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《暨南大学》 2005年
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mIL-12基因转染抑制裸鼠肝癌血管生成的研究

严林  
【摘要】:目的:研究腺病毒介导的小鼠白细胞介素—12基因在体外对肝癌H22细胞生长的影响,以及在裸鼠体内对肝癌血管生成的抑制。 方法:(1)构建携带鼠白细胞介素—12基因的重组腺病毒,在体外转染H22细胞,荧光显微镜观测转染率,ELISA法检测细胞培养上清液中的鼠白细胞介素—12含量。(2)应用倒置显微镜、细胞计数法、改良MTT法、流式细胞仪观察重组腺病毒在体外对H22细胞生长的影响。(3)用携带鼠白细胞介素—12基因重组腺病毒转染的小鼠肝癌H22细胞作为实验组,以腺病毒转染的H22细胞和未转染的H22细胞为对照组,三种细胞分别被接种到裸鼠肾包膜下,观察肝癌H22细胞的生长以及肝癌血管的生成情况,RT-PCR法检测肝癌组织中的血管内皮细胞生长因子和血管生成素—2基因的表达情况。 结果:(1)成功构建携带鼠白细胞介素—12基因的重组腺病毒,感染复数为100、感染时间为2小时条件下重组腺病毒的转染率为96.41%,实验组细胞培养上清液中检测到鼠白细胞介素—12的含量为(89.71±22.05)ng.48h~(-1).10~6cells~(-1),对照组细胞培养上清液中未检测到鼠白细胞介素—12。(2)在体外,实验组和对照组H22细胞的大小、形态、生长增殖、细胞周期无差别(P0.05)。(3)在裸鼠体内,摘除瘤组织时实验组瘤组织体积较小,出血较对照组少;实验组血管内皮细胞生长因子和血管生成素—2基因的PCR产物条带亮度均弱于对照组(P0.05);实验组血管内皮细胞生长因子的PCR产物条带辉度比值(0.8867±0.1924)低于载体对照组(1.1744±0.1189)和空白对照组(1.1874±0.1752)(P0.05);实验组血管生成素—2基因的PCR产物条带辉度比值(0.7878±0.1471)低于载体对照组(1.0319±0.1574)和空白对照组(1.0361±0.1536)(P0.05)。 结论:(1)携带鼠白细胞介素—12基因的重组腺病毒构建正确,转染率较高,能高表达鼠白细胞介素—12蛋白。(2)体外实验,白细胞介素—12对H22细胞的生长无抑制作用。(3)在裸鼠体内,白细胞介素—12能抑制H22细胞的生长,抑制血管内皮细胞生长因子和血管生成素2基因的表达,从而抑制肝癌的血管生成,抑制肝癌细胞的生长。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R735.7

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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