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《暨南大学》 2005年
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半乳糖受体介导c-myc反义核酸对肝癌细胞的靶向增效作用

蒋建伟  
【摘要】:目的 探讨半乳糖(galactose, Gal)受体介导的c-myc反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)对肝癌细胞的靶向投递作用和对肝癌细胞增殖的高效抑制作用。 方法 1 细胞培养:人肝癌Bel-7402细胞,Raji淋巴瘤细胞,U937淋巴瘤细胞;培养体系:RPMI-1640培养液含10%新生牛血清,100u/mL青霉素、100μg/mL链霉素,置37℃、5%CO_2培养箱培养。 2 反义核酸的合成、Gal-PEI-ASODN复合物的制备、离体靶向投递实验: (1) c-myc ASODN的合成:针对c-myc基因序列162~179设计ASODN并进行全程硫代修饰,3′端羧基荧光素FAM修饰或不修饰(上海生物工程公司合成),序列为:5′-CTT CTC GAG GCA GGA GGG-3′。 (2) 半乳糖-聚乙烯亚胺(polyethyleneimine, PEI)-c-myc反义核酸复合物(Gal-PEI-ASODN复合物)制备:采用无血清RPMI-1640液分别溶解Gal-PEI试剂和c-myc ASODN, 2:1(v/v)混匀,使两者氮磷比为5.0,得Gal-PEI-ASODN复合物。 (3) 离体靶向投递实验:取Bel-7402细胞、U937细胞或Raji细胞,加入荧光标记的ASODN、Gal-PEI-ASODN,孵育不同时间,流式细胞仪检测细胞荧光摄取率及胞内平均荧光强度的差异,相差/荧光显微镜观察荧光标记物进入3种细胞的形态,台盼蓝拒染法检测Gal-PEI-ASODN复合物对3种细胞增殖抑制作用的差异。 3 台盼蓝拒染法、细胞克隆和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和坏死: 取Bel-7402细胞,加入不同浓度的Gal-PEI试剂,ASODN,Gal-PEI-ASODN,孵育不同时间,台盼蓝拒染法检测药物对细胞增殖的抑制作用,计算药物对细胞增殖的
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R735.7

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