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《暨南大学》 2006年
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应用培养的羊膜上皮细胞重建角膜表层的初步实验研究

金玲  
【摘要】:目的:通过体外培养妊娠中期和晚期鼠、兔羊膜上皮细胞(AECs),研究妊娠中期和晚期AECs在体外的生长特性;探讨EGF、10%FBS和两者联合应用对妊娠中期和晚期AECs体外增殖性的影响;将兔AECs种植到新鲜兔角膜基质上,并使之复层化,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。 方法:(1)分别采用组织块法和消化法培养妊娠中期和晚期的鼠、兔羊膜上皮细胞,用HE染色、倒置显微镜和扫描电镜观察培养的妊娠中期和晚期鼠、兔AECs形态结构,并用细胞角蛋白ck3/12单克隆抗体AE1/AE3、AE5对鼠、兔AECs进行免疫组化检测。(2)应用分别添加有20ng/mlEGF、10%FBS及20ng/mlEGF和10%FBS的DMEM/F_(12)培养液和不添加任何成分的DMEM/F_(12)基础培养液体外培养鼠AECs,用MTT法检测鼠AECs在四种不同培养液中的增殖活性。(3)用细胞黏附剂处理兔角膜基质后,将体外培养的2-3代兔AECs种植在新鲜兔角膜基质上,形成单层后,再应用插入式细胞培养器形成的气-液界面培养法使之复层化。固定、脱水后,再进行扫描电镜观察和HE染色后光学显微镜观察,并进行单克隆抗体AE1/AE3、AE5免疫组化测定。 结果:(1)妊娠中期和晚期的鼠或兔的羊膜上皮细胞在体外培养时的形态和生长特性极为相似,体外培养12h的妊娠中期和晚期鼠、兔AECs完全伸展开,核大呈圆形或椭圆形,表面有许多脊样胞浆突起和微绒毛;培养24h的妊娠中期和晚期鼠、兔AECs呈多形性形态,核体积变大、可见核分裂像;培养48h的妊娠中期和晚期鼠、兔AECs之间连接紧密,大部分已融合成片。妊娠晚期的鼠、兔AECs也能在体外增殖,但其传代次数相对较少,一般只能传4-5代。免疫组化结果显示:体外培养的鼠、兔AECs单克隆抗体AE1/AE3、AE5表达阳性。(2)MTT法检测结果表明:EGF、10%FBS都可促进AECs体外增殖;且两者联合应用对促进鼠AECs的增殖大于单独应用EGF或10%FBS。(3)兔AECs在新鲜兔角膜基质上形成单层后,应用插入式细胞培养器形成的气.液界面培养法能使之形成3-5层
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R77

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