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《暨南大学》 2007年
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CRMP-1-phrGFP II-N真核表达载体的构建及其对突起生长的调节

辛莉  
【摘要】: 目的:构建CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体,探讨坍塌反应调节蛋白-1(Collapsin Response Mediator Protein-1,CRMP-1)过表达情况下对细胞突起生长的影响。 材料与方法:取新生6d SD大鼠脑海马组织,提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增目的基因cDNA,将其克隆到PGEM-T Easy载体上,经测序正确后再亚克隆到phrGFPⅡ-N真核表达载体,大量提取质粒。用NGF诱导PC12细胞分化为神经元样细胞,脂质体法瞬时转染CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体,通过绿色荧光蛋白示踪的方法对其表达部位进行亚细胞定位,并观察PC12细胞的表型变化。 结果:1)成功扩增CRMP-1基因cDNA,构建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体,经测序与genebank的序列同源性为99.8%。2)未经NGF诱导的PC12细胞有3~5个突起,突起短小、分支少,增殖迅速。经NGF诱导后的PC12细胞突起明显变长,分支增多,增殖缓慢。3)脂质体法瞬时转染后,空载体转染组的细胞显示较强的绿色荧光,胞体和突起内均有荧光分布,胞体和突起末端的荧光较中段突起内强,细胞突起和分支与空白对照组细胞无明差异。CRMP-1-phrGFPⅡ-N转染组,其荧光较空载体组弱,但其分布与空载体转染组相似。该组细胞突起明显短小,仅有个别阳性细胞具有超过胞体直径数倍的突起,但仍较空载体组短小。突起再分支级数少,仅1~2级分支。 结论:1)成功构建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表达载体。2)CRMP-1表达于PC12细胞的胞体和突起。3)CRMP-1过表达时细胞突起短小且再分支级数少,表明CRMP-1可能具有抑制突起生长和分支的作用。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R346

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【参考文献】
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