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《暨南大学》 2009年
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诱导人羊膜上皮细胞分化用于结膜重建的实验研究

杨水平  
【摘要】: 目的: 探讨人羊膜上皮细胞作为新的种子细胞,在兔去上皮结膜基质和结膜匀浆培养液下定向诱导分化为结膜上皮,并进一步研究分化细胞的生物学特性及构建组织工程结膜用于眼表重建的可能性。 方法: 1.人羊膜上皮细胞在去上皮结膜基质和结膜匀浆培养液诱导环境下培养,免疫组化鉴定角蛋白CK4、CK8、CK13、CK18及MUC5AC,PAS染色;ELISA法检测不同时间培养液中MUC5AC浓度;RT-PCR检测分化细胞MUC5AC基因表达。 2.运用MTT、群体倍增时间、量子点标记示踪等方法,探讨分化细胞的生物学特性。 3.以脱细胞羊膜作为载体,量子点标记的分化细胞接种于载体上,借助transwell培养皿进行气-液界面培养,构建组织工程结膜;分别于培养7天和14天取出,苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜观察细胞复层情况;共聚焦激光扫描显微镜观察量子点标记的分化细胞生长状态;培养14天后行免疫组化鉴定角蛋白CK4、CK8、CK13及MUC5AC。 4.量子点标记的组织工程结膜移植于结膜缺损模型兔眼表,对侧眼新鲜羊膜作对照,观察植片的存活情况;14天后取材,行HE染色、PAS染色、透射电镜、免疫组化及共聚焦激光扫描显微镜检查。 结果: 1.人羊膜上皮细胞经诱导培养后,免疫组化结果显示角蛋白CK4、CK8、CK13、CK18及MUC5AC表达阳性,PAS染色见紫红色阳性细胞;ELISA检测1-7天内培养液中均有微量MUC5AC且逐渐升高;RT-PCR检测分化细胞MUC5AC基因表达阳性。 2.在培养1-5天内,MTT法显示分化细胞活性在1-4天内呈上升趋势,第5天开始下降;1-5天内细胞生长曲线及群体倍增时间均显示分化细胞增殖能力强;量子点孵育分化细胞2h后,成功标记于细胞,在随后7天内,标记细胞荧光强度无明显衰减,细胞形态正常,呈现良好的生长分裂状态。 3.量子点标记的分化细胞接种于脱细胞羊膜,气-液界面培养7天后,HE染色和透射电镜显示2-3层细胞,培养14天,细胞增至4-5层,分化细胞与脱细胞羊膜连接紧密,成功构建类似正常结膜结构的组织工程结膜;共聚焦激光扫描显微镜显示14天内标记细胞荧光强度不衰减,细胞形态规则,整齐;免疫组化显示分化细胞表型未发生改变。 4.组织工程结膜和新鲜羊膜移植术后2周内,双组眼表临床观察无明显区别,植片在位、完整;2周后取材,HE染色显示植片有2-5层细胞,PAS染色见散在紫红色阳性细胞,细胞角蛋白CK4、CK8、CK13及MUC5AC表达阳性,量子点标记的细胞排列整齐、形态规则。 结论: 1.在兔结膜匀浆液和去细胞基质诱导条件下,人羊膜上皮细胞可分化为结膜上皮样细胞和杯状细胞,而且具有合成和分泌MUC5AC功能。证实羊膜上皮细胞具有干细胞的分化潜能。 2.分化细胞具有良好的生物学特性。本实验首次应用量子点来标记示踪结膜上皮,量子点是一种理想细胞示踪标记物,它适合长期实时观察活体细胞。 3.脱细胞羊膜是较好的组织工程化载体;分化细胞接种于此载体上,借助transwell培养皿,成功构建与正常结膜结构相似的组织工程结膜;在构建过程中,分化细胞生理状态良好,细胞表型未发生改变。 4.实验观察期间,组织工程结膜与模型兔眼具有良好的组织相容性,重建模型兔完整眼表,预示工程化结膜在根治许多难治性眼表疾病方面提供一新途径。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R779.6

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 纪家武,王玮;神经干细胞诱导分化的研究进展[J];解剖与临床;2004年04期
2 牛朝诗;孔杰;;损伤脑组织匀浆诱导骨髓间质干细胞向神经细胞分化的研究[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2006年05期
3 卢蓉,葛坚,黄冰,黄丹平,高楠,魏雁涛,王智崇,彭展;体外诱导恒河猴皮肤干细胞分化为结膜上皮细胞的实验研究[J];中华医学杂志;2005年36期
4 孟忻!100035,张青蔚!100035,唐少华!100035,刘炯!100035;结膜细胞外基质移植的实验研究与临床应用[J];中华眼科杂志;2001年03期
5 黄丹平;郑健梁;高前应;葛坚;刘金陵;;兔结膜基质诱导人骨髓间质干细胞分化的初步研究[J];中山大学学报(医学科学版);2006年01期
6 孟繁剑;陈家祺;;人皮肤干细胞体外诱导分化构建人工结膜的实验[J];中山大学学报(医学科学版);2006年03期
7 吴静!510632广州,徐锦堂!510632广州;层粘连蛋白对体外角膜上皮细胞凋亡的保护[J];眼科研究;2000年02期
8 黄丹平,葛坚,高前应,陶靖,郑健樑;胚胎干细胞定向诱导为结膜上皮样细胞的实验研究[J];眼科学报;2003年02期
9 柯碧莲,邱孝芝,张皙,许迅;羊膜移植重建结膜的组织学基础[J];眼科研究;2004年05期
10 王涛;赵敏;;组织工程材料在眼表重建中的应用[J];眼科新进展;2006年12期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵宏霞,黄才欢,丁珊;组织工程人工角膜的研究进展[J];广东工业大学学报;2004年04期
2 胡柯,赵敏;羊膜中生物活性物质的研究进展[J];国际眼科杂志;2004年04期
3 刘蕾;洪晶;;以不同性质羊膜为载体培养人角膜缘干细胞的生物学特性[J];国际眼科杂志;2006年05期
4 刘炳乾;廖洪斐;丁亚梅;江毅;崔鹏;;兔结膜重建中羊膜细胞外基质、保存羊膜及自体结膜的比较[J];国际眼科杂志;2007年04期
5 文道源,李舒梅,曾祥云,王辉,钟瑞冲,熊跃玲,叶金花,罗晓婷;羊膜建库及其临床应用研究[J];赣南医学院学报;2002年03期
6 李文,温玉明,王力红,杨湛,张瑞林;nm23-h1转染腺样囊性癌细胞及其增殖能力的实验研究[J];华西口腔医学杂志;2004年02期
7 刘晓云,张志峰,廖承义,姜明,绳秀珍,徐怀恕;中国对虾中肠盲囊的研究 Ⅱ中肠后盲囊的结构与功能[J];海洋湖沼通报;1999年02期
8 丁勇,徐锦堂,吴春云,陈建苏,张志雄,周长忍;壳聚糖植入兔角膜的生物学反应[J];暨南大学学报;2003年04期
9 陈瑞,陈建苏,徐锦堂,丁勇,赵松滨,李施娜;兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究[J];暨南大学学报;2005年02期
10 胡辅华;羊膜移植在眼科的临床应用[J];中国交通医学杂志;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 刘诚;张英;袁红梅;;自体角膜缘移植联合应用丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉[A];2007年贵州省医学会眼科学分会第五届第三次学术年会论文汇编[C];2007年
2 杨丽丽;皮喜田;彭承琳;刘洪英;;人工角膜材料的研究[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集(下册)[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚华;砷作用的远期效应及其分子遗传机制的研究[D];新疆医科大学;2001年
2 徐世文;三氧化二砷抗鸡MD肿瘤效应及其机理的研究[D];东北农业大学;2001年
3 周瑾;肾衰合剂对大鼠实验性急性肾衰竭的防治作用及其机理研究[D];湖北中医学院;2002年
4 王淑娟;补益脾胃法对脾虚老龄大鼠海马神经元PKC活性与bc1-2和bax蛋白表达及超微结构的影响[D];辽宁中医学院;2002年
5 田进文;从细胞到人体的阴阳五藏之演化及肝藏生理病理的研究[D];山东中医药大学;2003年
6 但果;脉冲电场食品非热处理的理论与实验研究[D];大连理工大学;2003年
7 许红民;不同分化程度大肠癌的基因表达谱分析[D];第一军医大学;2004年
8 张晓东;牵张应力对牙周膜成纤维细胞及细胞外基质代谢影响的研究[D];第四军医大学;2005年
9 何伟;同步化、抗氧化、γ射线照射对动物肿瘤细胞作用及细胞周期调控因子反应机制的研究[D];第四军医大学;2005年
10 李志华;周期性牵张应力作用下大鼠成肌细胞形态改变力学响应机制的研究[D];四川大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 颜立群;MR对应用抗ICAM-1抗体和IGF-1的神经保护鸡尾酒疗法在猫脑缺血再灌注损伤中有效性评价的比较研究[D];河北医科大学;2004年
2 胡柯;羊膜制备工艺及新鲜与保存羊膜眼表移植的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
3 鲁静;保存羊膜的组织形态及生物学活性研究[D];重庆医科大学;2005年
4 李文军;FMMU白化豚鼠、三色豚鼠缺氧耐受性比较研究[D];第一军医大学;2000年
5 张云山;L-精氨酸对热应激大鼠胸腺细胞凋亡影响的实验研究[D];第一军医大学;2000年
6 赵宏霞;组织工程人工角膜胶原支架材料的制备及其性能研究[D];暨南大学;2002年
7 孙敬儒;强电脉冲致细胞膜电穿孔提高抗癌药物疗效研究与机理分析[D];四川大学;2002年
8 张春光;犬下颌骨牵张成骨中髁状突软骨改建与细胞外基质变化的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 王瑞玲;仔猪小肠组织的日龄变化与物质转运及免疫的联系[D];中国农业大学;2003年
10 陈海川;电磁脉冲诱导细胞膜电穿孔及其在治疗肿瘤中的应用[D];四川大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邓政兴,张志雄,李立华,周长忍;聚乙烯吡咯烷酮接枝壳聚糖的生物相容性评价[J];第一军医大学学报;2004年06期
2 葛坚,郭彦,王智崇,刘海泉,杨智宽,李永平,李树浓;体外诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞的初步研究[J];解剖学报;2001年04期
3 牛朝诗,李健,傅先明,汪业汉;骨髓间质干细胞的分离培养及向神经细胞分化的研究[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2004年02期
4 李健,牛朝诗,傅先明;bFGF和N2体外联合定向诱导骨髓间质干细胞向神经元样细胞分化[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2004年03期
5 王智崇,葛坚,陈家祺,黄冰;角膜基质诱导胚胎干细胞定向分化的初步实验研究[J];眼科学报;1999年04期
6 郑健樑,卢蓉,张洁,林明楷,林建贤;人结膜上皮细胞的培养鉴定及液氮冻存[J];眼科学报;2000年02期
7 吴静!510632广州,徐锦堂!510632广州;层粘连蛋白对体外角膜上皮细胞凋亡的保护[J];眼科研究;2000年02期
8 朱豫,宋国祥;兔眼眶结构解剖研究[J];眼科研究;1998年02期
9 孟忻!100035,赵光熹,张青蔚!100035,唐少华!100035;结膜细胞外基质(ECM)的研究[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);2000年01期
10 吴木潮;程桦;陈黎红;徐明彤;黎锋;薛声能;;三种不同细胞培养方式对体外小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞诱导效果的比较[J];中国病理生理杂志;2006年08期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘德成;刘懿;刘风霞;;脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的研究与应用[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);2009年12期
2 肖光礼;聂卫;高萍;祝君梅;种影影;;脱细胞羊膜制备及生物学评价[J];临床医学工程;2009年01期
3 范伟杰;杨志明;李秀群;王珍;智伟;邱琳;;快速培养纯化猪角朊细胞及复合羊膜体外培养实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年03期
4 董智勇;李忱;陈东;孟晓婷;李玉林;;大鼠羊膜上皮细胞神经营养因子基因的表达[J];中国老年学杂志;2009年09期
5 李一帆;陈东;苏略;薛辉;刘佳梅;;甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤的实验研究[J];中风与神经疾病杂志;2010年06期
6 范伟杰;杨志明;罗静聪;黄云;李秀群;王珍;;脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性皮肤缺损的比较研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年02期
7 宋秀军;陈代雄;方宁;章涛;刘祖林;刘金伟;万卫红;;人羊膜上皮细胞分化为成骨细胞的特性[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年38期
8 焦丽君;徐锡明;;羊膜上皮细胞移植治疗脑卒中患者的护理体会[J];医学信息(中旬刊);2010年11期
9 朱梅;陈东;孟晓婷;陈爱军;;羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究[J];中国老年学杂志;2006年02期
10 金玲;陈剑;吴静;徐锦堂;周清;赵松滨;;培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究[J];眼科研究;2009年04期
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1 杨水平;诱导人羊膜上皮细胞分化用于结膜重建的实验研究[D];暨南大学;2009年
2 朱梅;羊膜上皮细胞移植对帕金森病大鼠的治疗作用及其机理的初探[D];吉林大学;2006年
3 吴智远;人羊膜上皮细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究[D];苏州大学;2005年
4 孟晓婷;转hbFGF羊膜上皮细胞与神经干细胞共移植治疗脊髓损伤的研究[D];吉林大学;2007年
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1 霍艳丽;脱细胞羊膜与小肠黏膜下层促进大鼠皮肤缺损修复和血管形成[D];中国医科大学;2009年
2 谢佳芯;bFGF转染羊膜上皮细胞的建立及其对视神经再生作用的初步研究[D];第二军医大学;2009年
3 金玲;应用培养的羊膜上皮细胞重建角膜表层的初步实验研究[D];暨南大学;2006年
4 刘绍辉;羊膜保存方法及其对羊膜活性影响的研究[D];青岛大学;2001年
5 任静;基质金属蛋白酶9在胎膜早破的表达和作用[D];中国医科大学;2004年
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