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《暨南大学》 2009年
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鲢TNF、IL-8、HSP70基因的克隆及表达分析

梁卉  
【摘要】: 细胞因子(Cytokine)是指由多种细胞所分泌的能调节细胞生长分化、参与炎症发生以及细胞间相互作用等小分子多肽的统称。HSP70是一种重要的内源性细胞保护因子,在参与机体的免疫调控方面具有广泛的生物学活性。 鲢(Hypophthalmichthys molitrix)属于鲤形目,鲤科,鲢亚科,是我国主要的淡水养殖鱼类之一,具有重要的经济地位。然而,有关鲢的非特异性免疫因子研究的较少,为了进一步研究鲢的细胞因子的结构和功能,并揭示鲢的免疫防御机理。本文利用同源克隆和RACE方法,测定了鲢TNF基因的全长cDNA序列、HSP70基因的核心序列,并推测得到其相应氨基酸序列;通过生物信息学软件分析,了解鲢TNF与其他脊椎动物的TNF结构异同及进化地位;使用RT-PCR技术分析鲢TNF在鲢组织中的分布情况;最后,使用原核蛋白表达系统,表达了鲢重组IL-8蛋白。主要研究结果如下: 序列分析表明,鲢TNF cDNA全序列长1254bp,该序列包含394bp的5'端非编码区,398 bp的3'端非编码区和462bp的开放阅读框,编码239个氨基酸,其中包含一个TNF家族标签序列、构成一对二硫键的2个保守半胱氨酸(Cysteine,Cys)和两个TNF-α基因特有的内毒素应答序列(TTATTTAT);鲢HSP70核心片段长1428 bp,编码370个氨基酸,含有一个HSP70家族标签序列。 进化分析结果表明,鲢TNF为α型TNF,与高等动物TNFα和TNFβ源于共同的祖先,但分别处于进化上不同的分支。鲢TNFα与同属于鲤形目的鲤鱼亲缘关系最近,其次是鲶形目的斑点叉尾鲴,鲑形目的河鳟、虹鳟,鲽形目的牙鲆,而与真鲷和金头鲷等鲈型目鱼类关系较远。 RT-PCR结果表明鲢TNF mRNA主要在脑、鳃和头。肾中表达,肠和脾中有少量表达,而在肝中几乎没有表达。 SDS-PAGE电泳结果显示鲢PQE30-IL8重组融合蛋白在分子量约11 kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q78

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