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《暨南大学》 2010年
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穿心莲内酯衍生物抗H_2O_2诱导的胰岛细胞RIN-mβ凋亡的蛋白组学研究

周辉华  
【摘要】: 目的:用蛋白组学的方法研究穿心莲内酯衍生物AL-1抗H202诱导的胰岛RIN-mp细胞损伤的作用分子机理。 方法:以400μM的H2O2作用于胰岛RIN-mβ细胞4h建立细胞凋亡模型,采用四氮唑蓝还原法(MTT)测定细胞生长存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;荧光显微镜观察细胞凋亡形态的变化。采用蛋白组高通量技术,提取加药组(AL-1)(浓度为0.1μM,处理时间1 h)和对照组(Control)(加相应浓度的DMSO,处理时间1 h)总蛋白,双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质,银染,ImageMaster 2D Platinum软件分析2D图谱,获得差异表达蛋白,质谱鉴定差异蛋白。用生物信息学方法对差异蛋白进行功能分类。用Westernblot方法,验证了RHO GDP-Dissociation 1, EF-Tu,14-3-3ζ等差异蛋白的变化。分析AL-1对胰岛RIN-mβ细胞的信号转导通路的影响。应用蛋白组学分析鉴定了处理组(AL-1+ H2O2)(0.1μM AL-1预孵1h,400μM H2O2作用4 h)与对照组(H2O2)(400μM H2O2作用4 h)凋亡蛋白差异的变化。 结果:1)穿心莲内酯衍生物AL-1提高了H202处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。2)建立了单独AL-1作用前后RIN-mβ细胞系的双向凝胶电泳图谱,鉴定了Thioredoxin, Peroxiredoxin-1, Peroxiredoxin-5, Glutaredoxin-3,14-3-3ζ, DJ-1, Hsp90ab1, HnrnpA2/B1, EF-Tu等在内的72个差异蛋白分子。这些蛋白涉及到糖代谢、核酸代谢、蛋白质代谢和修饰、信号转导、细胞凋亡、细胞结构和运动、免疫和防御等细胞生理过程相关的蛋白变化。发现处理组(AL-1+H2O2)与对照组(H202)中促进凋亡蛋白Isoform 3 of Programmed cell death 6-interacting protein, Galectin-1, Nuclear mitotic apparatus protein 1等都发生下调,抑制凋亡的蛋白Prohibitin, Heat shock protein 9, Hspa5, Isoform 1 of 60kDa heat shock protein等都发生上调。3)基于蛋白质组学的结果,进一步分析了AL-1通过激活Akt和ERK信号转导通路,诱导抗氧化蛋白和抗凋亡蛋白的表达,从而阐明了AL-1抗H202诱导胰岛细胞损伤和凋亡的作用分子机理。 结论:本实验分析了AL-1处理胰岛RIN-mβ细胞前后细胞内蛋白质表达水平的变化,初步解释AL-1保护胰岛RIN-mp细胞的作用分子机理。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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【引证文献】
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