阿尔茨海默病造模条件的优化及去痴灵对该模型的作用

【摘要】： 目的 (1)对实验室前期已建立的D-半乳糖与氯化铝共同诱导12周所制备的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)模型进行优化(该模型已获得国家发明专利授权),通过与单因素造模比较,阐明联合造模的必要性；通过铝剂量提高,缩短造模周期；通过模型维持时间考查,为药物治疗研究奠定基础。 (2)利用条件优化后制备的模型,进一步研究去痴灵对该模型小鼠的治疗作用。 方法 (1)选用昆明种小鼠,随机分4组：空白组、氯化铝组、D-半乳糖组、氯化铝+D-半乳糖组(以下简称联合组)。除空白组,其余3组相应给予氯化铝20.0mg·kg-1·d-1; D-半乳糖120mg·kg-1·d-1.在造模8周、10周及停止造模6周三个时间点每组随机各取16只小鼠依次进行Morris水迷宫测试,脑内乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)生化检测,神经原纤维镀银染色及p-淀粉样蛋白(Aβ)免疫组化染色,分析各组AD样病理改变及行为、生化变化情况。 (2)选用昆明种小鼠,按上述优化后的条件造模。治疗组分别灌胃低、中、高剂量(4.6g-kg-1·d-1、9.2g-kg-1·d-1、18.4g·kg-1·d-1)去痴灵,连续5周；另设石杉碱甲(0.4mg-kg-1·d"')阳性药对照组和溶剂对照组。治疗结束后,依次进行Morris水迷宫测试、脑内胆碱能系统生化测试、p淀粉样前体蛋白(APP)基因表达测试、神经原纤维镀银染色及p-淀粉样蛋白(Aβ)免疫组化染色,分析去痴灵对该模型小鼠的治疗作用。 结果 (1)氯化铝组：造模10周,小鼠学习记忆减退；停止造模6周,小鼠学习记忆恢复正常；造模前后,小鼠脑内AchE、ChAT活性及Ach含量均无变化,类神经原纤维缠结(NFT)及老年斑(SP)等病理变化不明显。 (2)D-半乳糖组：造模10周,小鼠学习记忆减退,其余指标均无明显变化；停止造模6周,小鼠学习记忆未恢复,脑内AchE、ChAT活性及Ach含量降低,可观察到SP,但不明显。 (3)联合组：造模8周,小鼠学习记忆减退,脑内ChAT活性及Ach含量降低、类NFT及SP结构出现;造模10周,各种变化更加明显；停止造模6周,造模10周建立的AD样改变无明显变化。 (4)与AD模型组比较,去痴灵各剂量组小鼠学习记忆能力提高,脑内ChAT活性增强,Ach含量增加,APP基因表达量降低,类NFT及SP数目减少,且以去痴灵高剂量组表现最显著。 结论 (1)氯化铝组复制AD样变化较单一且不稳定；D-半乳糖组复制AD样变化较全面但耗时长；联合组复制AD样变化全面,包括学习记忆障碍、中枢胆碱能系统功能减退、类NFT及SP数目增多等,且这些变化出现早、明显、维持时间较长。 (2)联合组造模10周AD样变化较造模8周明显。故铝剂量提高后,原造模时间从12周缩短至10周。 (3)联合组AD样改变在停止造模6周内维持稳定,这为药物治疗研究的可靠性提供了保证。 (4)优化后的造模条件为：D-半乳糖120mg·kg-1·d-1,氯化铝20.0mg·kg-1·d-1,联合诱导10周。 (5)去痴灵可改善AD模型小鼠的学习记忆能力,抑制小鼠脑内类NFT和老年斑形成,其可能的作用机制为：改善中枢胆碱能系统功能,降低APP含量,抑制Ap生成、聚集和沉积等。

【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.16