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《暨南大学》 2010年
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乌龟孔雀石绿浸泡后的组织病理学研究及肝脏全长cDNA文库的构建与鉴定

严福祥  
【摘要】: 龟类在药用、观赏、食用以及科学研究等方面都具有重要的用途和经济价值。龟类的人工养殖不仅可以补充自然资源,保持生态平衡,而且可以满足人们食用及药用的需求。乌龟为国内最常见的养殖品种。在人工养殖中,由于养殖密度的增加和养殖环境的污染等因素,病害的发生越来越频繁,已危及养龟业的发展。因此,龟类病害的防治日显重要。 孔雀石绿常用于水产经济动物病害的防治。众所周知,孔雀石绿对人类有致畸、致癌等毒副作用,而且长期使用会造成环境污染及其他不良后果,按照农产品无公害化质量标准要求,孔雀石绿已在水产禁用药品之列。在龟类的疾病中,水霉病是最常见的疾病,对稚龟和幼龟的影响最大,而且难以治疗,除了孔雀石绿的疗效较好外,其他药物的治疗效果均不佳。在这种情况下,有些养殖者仍使用孔雀石绿来防治水霉病。因此,探讨孔雀石绿对龟类的危害具有重要意义。 通过应用石蜡切片技术,对乌龟经孔雀石绿浸泡后的组织病理变化进行了研究,结果显示,孔雀石绿对乌龟肝脏的影响最大,肝细胞出现脂肪变性,组织出现大片空斑;细胞胞质出现较大的空泡,部分肝细胞溶解坏死。其它组织器官病变不明显。针对这种情况,利用SMART技术,构建了经孔雀石绿浸泡后的乌龟肝脏全长cDNA文库。用RNAiso Reagen从实验组乌龟肝脏中提取总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行LD-PCR合成第二链cDNA,蛋白酶K消化,Sfi I酶切,通过CHROMASRIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,cDNA与λTriplEx2载体连接及连接产物的体外包装后构建cDNA文库。建文库滴度为7.5×109pfu/ml,插入片段平均长度大于1.Okb,文库重组率为94.38%。 构建的cDNA文库可进一步为基因组测序、有关基因的克隆和筛选等研究奠定基础,并通过与正常乌龟基因序列的比较分析,进而阐明孔雀石绿的致畸和致癌机制。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S947

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