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《暨南大学》 2010年
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欧洲越橘提取物抗眼组织氧化应激的作用研究

姚楠  
【摘要】: 实验目的:本实验旨在研究欧洲越橘提取物对小鼠眼组织处于氧化应激状态时眼内的抗氧化物和抗氧化酶以及线粒体功能的影响,并且探讨了可能的作用机制。 实验方法: (1)采用HPLC/ESI-MS的方法对欧洲越橘提取物进行了定性定量分析,并采用抗氧化能力指数(ORAC)和DPPH两种方法评价了它的体外抗氧化能力。 (2)18h拘束应激后诱发昆明种小鼠应激性眼损伤,分别用赖氏法测定小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,硫代巴比妥酸法测定眼组织丙二醛(MDA)水平,荧光酶标仪测定眼组织ORAC水平,HPLC法测定眼组织谷胱甘肽(GSH)和维生素C (Vit C)水平,Griess化学法测定眼组织一氧化氮(NO)水平,试剂盒测定眼组织超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。半定量RT-PCR检测眼组织iNOS, CuZnSOD, MnSOD以及GPx mRNA的表达。 (3)内毒素足底注射24 h后诱发BALB/C小鼠葡萄膜炎,分别测定NO水平,MDA水平,ORAC水平,GSH和Vit C水平,SOD和GPx活性,并且测定iNOS, CuZnSOD, MnSOD以及GPx mRNA的表达。 (4)利用荧光酶标仪测定眼组织线粒体呼吸链复合酶活性,采用半定量RT-PCR技术检测眼组织线粒体呼吸链复合酶相关基因Ndufsl, Ndufs4, Ndufs5, Ndufs6, SDH A, SDHB和COXI-II mRNA的表达。 (5)采用半定量RT-PCR技术检测NF-kB p65以及IkBαmRNA的表达,并且使用Western Blotting技术检测NF-kB p65蛋白的表达。 实验结果: (1) HPLC/ESI-MS的分析结果显示欧洲越橘提取物含有15种花色苷,总花色苷的含量为42.04%。DPPH和ORAC两种方法的实验结果都表明欧洲越橘提取物在体外有很好的抗氧化能力。 (2)18h拘束应激能诱发昆明种小鼠应激性眼损伤。与拘束应激模型组相比,欧洲越橘提取物中剂量(100 mg/kg)和高剂量(200 mg/kg)给药组小鼠眼组织内的MDA和NO水平降低,ORAC, GSH和Vit C水平升高,并且SOD和GPx活性升高。深入研究发现该提取物中剂量(100 mg/kg)和高剂量(200 mg/kg)给药组小鼠眼组织内iNOS mRNA的表达减弱,而CuZnSOD, MnSOD以及GPx mRNA的表达增强。 (3)内毒素足底注射24h后能诱发BALB/C小鼠葡萄膜炎。与LPS模型组相比,欧洲越橘提取物中剂量(100 mg/kg)和高剂量(200 mg/kg)给药组小鼠眼组织内的NO和MDA水平降低,ORAC, GSH和Vit C水平升高,并且SOD和GPx活性升高。深入研究发现该提取物中剂量(100 mg/kg)和高剂量(200 mg/kg)给药组小鼠眼组织内iNOS mRNA的表达减弱,而CuZnSOD, MnSOD以及GPx mRNA的表达增强。 (4)欧洲越橘提取物提高了氧化应激下小鼠眼组织线粒体呼吸链某些复合酶活性以及相关基因的表达水平。 (5)欧洲越橘提取物降低了氧化应激下小鼠眼组织NF-kB p65 mRNA以及蛋白的表达,从而降低了NF-kB p65的活性,进而降低了iNOS mRNA的表达水平,并且提高了线粒体呼吸链复合酶相关基因mRNA以及CuZnSOD, MnSOD和GPx mRNA的表达水平。 实验结论:欧洲越橘提取物可以改善氧化应激对眼组织造成的损伤,并且中剂量(100mg/kg)和高剂量(200 mg/kg)给药表现出一定的剂量依赖关系。其改善机制可能是通过清除眼组织内的自由基、维持眼组织内的抗氧化物和抗氧化酶水平以及保护眼组织线粒体功能来实现的。 创新点: (1)运用了生物化学和分子生物学技术,从动物水平探讨了欧洲越橘提取物抗眼组织氧化应激的作用及其机制。 (2)发现眼组织的氧化应激主要降低了线粒体呼吸链的第一和第二个复合酶活性以及相关基因mRNA的表达水平。 (3)发现欧洲越橘提取物抗眼组织氧化应激的作用在某种程度上是通过调控转录因子NF-kB的活性来实现的。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R93

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