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《汕头大学》 2004年
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NGAL基因的原核融合表达、抗体制备及其在食管癌组织中的表达模式

王朝阳  
【摘要】:NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)蛋白首先由Kjeldsen等人于1993年在中性粒细胞内发现,与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程相关。我们在运用基因芯片技术筛选永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC之间的差异表达基因时发现NGAL基因在SHEEC细胞中过表达,进一步研究发现NGAL基因可能与肿瘤的侵袭与转移相关,但确切的功能与机制不清楚。最近我们研究发现NGAL基因还可能参与细胞的分化。越来越多的研究结果提示NGAL可能是一种重要的炎症或肿瘤标志物,对判断与监测病情变化具有重要的意义。但是目前无论是NGAL蛋白本身还是抗NGAL的抗体均未商品化,所以本文通过原核表达的策略首先获得纯的NGAL蛋白、然后制各其抗体,最后通过对各种食管癌组织样品进行检测,探讨NGAL基因在食管癌中的表达模式,这对深入研究NGAL在生理和病理过程中所发挥的功能具有科学意义和应用价值。 主要研究内容和方法: 一、构建四种NGAL原核融合表达载体并比较分析蛋白表达产物。 二、Ni~(2+)-金属鏊合层析技术纯化NGAL蛋白并制备多克隆抗体。 三、研究NGAL基因在食管癌组织及其血浆中的表达模式。 主要的研究结果: 一、构建了NGAL基因四种原核融合表达载体。 二、成功进行了四种NGAL融合蛋白的原核表达,并分析了它们的表达量、可溶性及其细胞定位,最后筛选出了适合大样表达NGAL蛋白的原核融合表达载体pDsbA2.0-NGAL。 三、成功进行了NGAL蛋白的纯化与鉴定,获得了较纯的NGAL蛋白。 四、成功制备出效价高、特异性较好的NGAL多克隆抗体,适用于IHC、Western blotting及ELISA等。 五、运用IHC、Western blotting及ELISA等实验技术,初步探讨了NGAL基因在食管癌组织中的表达模式。 汕头大学医学院硕士研究生论文 结论及意义: 一、不同的融合伴侣对靶蛋白的表达量、细胞定位以及可溶性会产生不同的影 口向。 二、NiZ七金属鳌合层析纯化技术是一种高效的纯化蛋白的技术。 三、成功建立了检测NGAL表达模式的实验技术:免疫组织化学、western blotting 与EL工SA技术,通过不同层面揭示了NGAI砂在食管癌中的表达模式:IHC实验显 示染色阳性细胞定位于细胞胞浆且集中于高分化食管鳞状上皮细胞癌癌巢癌珠 部分;Western blotting实验结果显示NGAL蛋白在部分食管癌组织中表达上调, 但尚需增加样本量进一步确证;而ELISA实验结果初步显示在正常人群血浆/血 清中能够检测到NGAL基因的蛋白表达产物,这为进一步探讨NGAL基因在食管癌 中的生物学功能与意义奠定了实验基础。
【学位授予单位】:汕头大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R735.1

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 许丽艳;NGAL基因在食管癌细胞中的表达调控机制[D];北京工业大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 马连红,陈戬,陈鹏;羊、兔血清IgG的快速纯化及其分析鉴定[J];免疫学杂志;1996年03期
2 邓瑞春;两种不同方法纯化抗血清IgG的效果比较[J];免疫学杂志;1999年01期
3 许正平,段治军,陈长征,李伯良;cAPK催化亚基的C端融合表达、纯化及其NMT底物活性作用[J];生物化学与生物物理学报;1998年02期
【共引文献】
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1 王朝阳,许丽艳,荣举,李劲涛,李恩民;NGAL蛋白Ni~(2+)-金属鏊合层析纯化及其鉴定[J];癌变.畸变.突变;2004年02期
2 于基成;刘秋;赵娜;曹远银;范圣第;;除草剂2,4-D完全抗原的合成与鉴定[J];安徽农业科学;2007年13期
3 车达;金鑫;陈莹莹;费景春;姜丹丹;吴丹;王笑玉;;延边黄牛气肿疽间接ELISA诊断方法的建立[J];安徽农业科学;2011年02期
4 刘淼,沈继龙,汪学龙,江宝玲;检测血清幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗体的间接ELISA法初步建立[J];安徽卫生职业技术学院学报;2005年03期
5 周显青;王晓辉;徐建平;王迎;路静;;维生素E对TCDD染毒小鼠白细胞介素和T细胞亚群的影响[J];动物学报;2007年05期
6 裴仁军,汪尔康,杨秀荣;表面等离子体共振免疫传感的放大检测研究[J];北京大学学报(自然科学版);2001年02期
7 朱承谟;标记免疫分析技术进展[J];标记免疫分析与临床;2002年03期
8 叶一秀,王巍,李洪敏,王安生,姚昊,孙立群,王仲元,刘金伟,李楠,郭晓青,陈红兵,林明贵,王金河,何珂;严重急性呼吸综合征患者血清TNF含量动态观察及评价[J];标记免疫分析与临床;2004年04期
9 邓光荣;赵万春;蔡中祥;;时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价[J];标记免疫分析与临床;2005年04期
10 刘向祎,寇丽筠;ELISA法测定血清Ⅳ型胶原[J];北京医学;2000年02期
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1 沈锦玉;尹文林;潘晓艺;郝贵杰;徐洋;何天雷;王友慧;叶金云;;鳖用四价细菌灭活疫苗免疫防治应用研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
2 孙振钧;;蚯蚓抗菌肽研究进展[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年
3 王士长;李彦;陈静;罗廷荣;;马尾藻多糖作为猪PRRS疫苗佐剂的免疫效果研究[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
4 谢甦;李丽红;凌湘力;;参芪地黄丸对D-半乳糖致衰老小鼠的免疫调节作用[A];贵州省中西医结合学会中医诊断现代研究论文汇编[C];2007年
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1 张岩;构建化学和生物传感界面用于环境有机污染物检测新方法研究[D];东华大学;2010年
2 陈蕾;非动物源性新型载体的研制及其对磺胺类药残检测特性的影响[D];华南理工大学;2011年
3 谭峰;弓形虫核苷三磷酸脱氢酶功能分析及疫苗候选靶标的研究[D];南方医科大学;2011年
4 樊彦红;黄曲霉毒素B_1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对锦鲤及原代培养肝细胞的毒性研究[D];南京农业大学;2008年
5 尹文婷;新型罗丹明基“OFF-ON”型荧光探针的设计合成及其生物应用研究[D];西北大学;2011年
6 张幼美;电针治疗痹证的临床疗效和实验研究[D];广州中医药大学;2000年
7 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
8 席庆;滨珊瑚用于组织工程骨构建的实验研究[D];第四军医大学;2002年
9 韩根成;抗病毒及抗膜补体调节蛋白双特异性抗体的制备及效应研究[D];第三军医大学;2002年
10 李俊莲;大黄(庶虫)虫丸对小鼠免疫调节作用及其机理的实验研究[D];湖北中医学院;2004年
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1 张静;恩诺沙星化学发光酶免疫分析方法研究[D];郑州大学;2010年
2 王骏俊;鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定[D];安徽农业大学;2010年
3 李兆学;人红细胞单链抗体的制备与血凝试验方法的初步建立[D];河南工业大学;2010年
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5 李军;畜禽饲料中硝基呋喃类药物快速检测技术研究[D];河北农业大学;2011年
6 孙兴荣;黄曲霉毒素M_1免疫亲和层析柱的研制[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
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8 吴姝;“芪归”催乳散促进动物泌乳的作用机理研究[D];福建农林大学;2011年
9 纪勇;用于溶藻弧菌快速检测的免疫磁珠技术的研究[D];集美大学;2011年
10 伍蓓;全真一气汤总多糖对免疫抑制小鼠免疫功能影响的初步研究[D];广州医学院;2011年
【同被引文献】
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2 李恩民,许丽艳,熊华淇,蔡唯佳,吴炳礼,张灿,张永发,林艳,沈忠英;食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5'-UTR和3'-UTR的克隆与鉴定[J];癌症;2003年02期
3 沈忠英,蔡维佳,沈健,许锦阶,岑山,滕智平,胡智,曾毅;人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮细胞恶性转化的研究[J];病毒学报;1999年01期
4 韩溟,许丽艳,李淳,吴贤英,沈忠英 ,李恩民;MMP-9与MMP-2在食管癌中的表达及其意义[J];肿瘤防治杂志;2002年04期
5 李恩民,许丽艳,吴炳礼,张灿,张永发,林艳,蔡唯佳,沈忠英;食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5′端转录调控区的克隆及其顺式作用元件定位分析[J];肿瘤防治杂志;2003年03期
6 王朝阳,许丽艳,荣举,韩溟,吉坤美,沈忠英,李恩民;食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析[J];肿瘤防治杂志;2003年10期
7 许丽艳,李恩民,熊华淇,蔡唯佳,沈忠英;NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究[J];生物化学与生物物理进展;2001年06期
8 王楠,刘芝华,丁芳,王秀琴,周传农,王明荣,吴旻;胃肠富集Kruppel样因子在食管癌的表达[J];生物化学与生物物理进展;2002年01期
9 林珏龙,许丽艳,李恩民,蔡唯佳,牛永东,方昆阳,熊华淇,沈忠英,曾毅;反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响[J];生物化学与生物物理进展;2004年05期
10 李恩民,许丽艳,蔡唯佳,熊华淇,沈忠英,曾毅;SHEEC食管癌细胞中NGAL基因的功能[J];生物化学与生物物理学报;2003年03期
【二级引证文献】
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1 常静霞;肺癌细胞中NGAL基因的基础表达调控机制[D];汕头大学;2007年
2 孟令英;食管癌细胞中NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的克隆与鉴定[D];汕头大学;2008年
【二级参考文献】
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1 邓瑞春,崔青山,李振甲,甄英凯;反亲和层析法纯化PMSG的试验研究[J];兽医大学学报;1989年03期
【相似文献】
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1 王朝阳,许丽艳,荣举,韩溟,吉坤美,沈忠英,李恩民;食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析[J];肿瘤防治杂志;2003年10期
2 王朝阳,许丽艳,荣举,李劲涛,李恩民;NGAL蛋白Ni~(2+)-金属鏊合层析纯化及其鉴定[J];癌变.畸变.突变;2004年02期
3 金慧英,魏尧梅,胡惠民,冯伟华,刘军华;镉-金属硫蛋白的抗体制备及酶联免疫吸附法测定[J];中国公共卫生;1998年02期
4 陈长春;李婉宜;章崇杰;魏大鹏;邝玉;;抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定[J];南方医科大学学报;2007年11期
5 李之源;肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的鉴定[J];第四军医大学学报;1994年05期
6 杨诏旭,窦科峰,路凡,赵忠良;GST-Gankyrin融合蛋白的原核表达及抗体制备[J];第四军医大学学报;2005年11期
7 莫发荣;谢小薰;罗国容;;抗体制备的新技术[J];医学综述;2007年01期
8 于保锋;陈显久;王惠珍;张悦红;程牛亮;牛勃;;抗双胸蚓核酸酶EWD_2多克隆抗体的制备及鉴定[J];山西医科大学学报;2007年12期
9 赵伟;魏晨曦;夏莹;杨旭;丁书茂;袁均林;;苯甲酸人工抗原的合成与免疫效价的测定[J];食品科学;2009年03期
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4 李恩民;;NGAL正反馈促进食管癌细胞移动侵袭分子机制的研究[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年
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1 胡德荣;肝癌疫苗进入二期临床[N];健康报;2004年
2 崔丹丹 蔡莲红;情感语音的分析与转换[N];计算机世界;2007年
3 沈自尹;肾虚与衰老的微观比较研究[N];中国医药报;2002年
4 谢青桐;彼岸的风景有未来的影子[N];东方早报;2008年
5 戴阿宝/译;鲍德里亚的“时尚”概念[N];社会科学报;2004年
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7 许可臻;上海生物医药重大突破注射疫苗可杀灭肝癌细胞[N];医药导报;2004年
8 文建平;生物医药外包相中中国[N];医药经济报;2004年
9 记者 姜云飞;海归博士欲建抗体“世界工厂”[N];大连日报;2006年
10 宿迁市宿城区检察院 朱建中;建议删去自首条款中的前一个“可以”[N];江苏法制报;2007年
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1 毛山山;NGAL-NGALR在肾小球肾炎中的表达及其机制的实验研究[D];复旦大学;2011年
2 靳瑾;妊娠期高血压疾病患者中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达及其与疾病严重程度的相关性研究[D];南方医科大学;2010年
3 肖锐;中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在呼吸机相关性肺损伤小鼠模型中表达的研究[D];广州医学院;2010年
4 韩梅;NGAL在脓毒症性急性肾损伤时的作用及肾脏保护性机制研究[D];河北医科大学;2012年
5 王立洪;肿瘤标志物中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)与钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能研究[D];北京协和医学院;2011年
6 吕建;小麦渐渗系山融3号MYB基因家族对非生物胁迫的响应及Tamyb31基因功能研究[D];山东大学;2010年
7 吴杰;IgA肾病肾小管间质损伤及无创性标志物相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
8 吴卓晶;大豆GmTOC1s和GmLCLs的基因克隆、表达模式及功能分析[D];内蒙古农业大学;2010年
9 梁永利;家蝇抗菌肽基因的表达模式与重组表达[D];山东大学;2005年
10 滕蕾;文昌鱼Legumain基因的克隆、表达和功能研究[D];中国海洋大学;2009年
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1 王朝阳;NGAL基因的原核融合表达、抗体制备及其在食管癌组织中的表达模式[D];汕头大学;2004年
2 薛雯;原发性肾病综合征患者尿液及肾组织中NGAL的表达及意义[D];河北医科大学;2012年
3 薛鹏程;尿NGAL在造影剂肾病早期诊断中的临床意义[D];山西医科大学;2011年
4 王卓;NGAL/Lcn2在感染幽门螺杆菌胃黏膜中的表达及临床意义[D];兰州大学;2011年
5 薛冰;NGAL对评价老年人冠脉介入术后对比剂肾损伤的相关研究[D];山东大学;2010年
6 李林国;NGAL基因在肝癌中的表达变化及其功能初步研究[D];复旦大学;2009年
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