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人脐带间充质干细胞的体外扩增及向神经元样细胞定向诱导分化

崔冰琳  
【摘要】:目的:研究人脐带间充质干细胞(MSCs)的体外分离、纯化、扩增及丹参诱导MSCs向神经元样细胞分化,为神经细胞移植、脐带组织库的建立及中药丹参作为神经诱导剂提供理论依据。方法:无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,组织块培养法获取MSCs,进行培养。丹参诱导人脐带来源的MSCs向神经细胞分化;用免疫细胞化学方法检测神经细胞相关蛋白标记的表达;用光镜、扫描电子显微镜监测丹参诱导后细胞形态改变;透射电子显微镜观察丹参诱导后细胞超微结构改变;用共聚焦显微镜分析丹参诱导前后细胞内DNA、RNA含量改变及神经干细胞的标记巢蛋白(nestin),神经元的蛋白标记β-Ⅲ类神经微管(β-TubulinⅢ)表达含量变化。用RT-PCR检测细胞神经相关基因pleiotrophin和神经干细胞的标记巢蛋白(nestin)的表达。RT-PCR检测证实,经丹参诱导后的MSCs表达神经干细胞相关基因Nestin,诱导前和诱导后的MSCs均表达神经细胞基因Pleiotrophin,诱导后的表达明显增强。结果:从人脐带华尔通胶分离、培养的贴壁细胞,体外生长形态类似于成纤维细胞,可以维持在未分化状态稳定增殖,体外增殖超过10代,细胞冻存一个月后


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