泛素蛋白酶体通路在动脉粥样硬化中作用的研究

【摘要】： 背景动脉粥样硬化是严重危害人类健康的常见病，多发病。目前认为，其病理变化是一慢性炎症过程，但发病机制尚未完全阐明。泛素蛋白酶体通路，是ATP依赖性的，非溶酶体的蛋白质降解通路。该通路还参与NF-κB通路的激活，研究发现NF-κB通路在动脉粥样硬化病理变化中起着重要的作用。然而，泛素蛋白酶体通路是否直接参与动脉粥样硬化的病理过程，尚不清楚。此外，氧化应激状态下，泛素蛋白酶体通路的活性中心，蛋白酶体26S和20S的活性是否受到影响，看法不一；氧化应激与泛素蛋白酶体通路功能之间的关系尚未阐明；非甾体抗炎药，能通过抑制泛素蛋白酶体通路，介导多种癌细胞凋亡，抑制癌细胞的增殖。然而，将非甾体抗炎药，作为泛素蛋白酶体通路的抑制剂，用于动脉粥样硬化的研究，尚未见报导。因此，我们提出假说：如果泛素蛋白酶体通路积极参与动脉粥样硬化的病理过程，那么抑制其活性，有可能会减少炎症因子的激活，延缓动脉粥样硬化的演进。 目的应用动脉粥样硬化兔模型，在阿司匹林干预下，探讨泛素蛋白酶体通路在动脉粥样硬化中的作用机制，检测氧化应激相关指标和蛋白酶体26S和20S的活性，观察动脉粥样的病理变化与NF-κB通路，以及泛素蛋白酶体通路功能之间的关系。 方法1、将40只3月龄大小，体重相当的新西兰雄性兔，随机分为正常饮食组(N)、正常饮食加阿司匹林组(NI)、高胆固醇饮食组(H)和高胆固醇加阿司匹林组(HI)； 2、分别检测各组总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的水平，以及氧化应激指标：超氧化无歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)； 3、检测蛋白酶体26S和20S的活性； 4、HE染色观察血管组织的病理变化； 5、免疫组化方法观察泛素／UPC、IκBα、磷酸化IκBα及p65在各组血管组织中的表达情况； 6、运用western blot检测泛素／UPC、IκBα及磷酸化IκBα和p65在各组中的表达； 结果1、成功建立了AS动物模型； 2、H或HI组中的TC、TG、LDL和HDL的水平，分别高于正常饮食组N或NI，有统计学意义(P＜0.05)；而H和HI组，或N和NI组间比较没有组间差异(P＞0.05)； 3、氧化应激指标中，H或HI组别的MDA明显分别高于N或NI组，有统计学意义(P＜0.05)，而H或HI组中SOD和CAT明显分别低于N或NI组(P＜0.05)； 4、蛋白酶体26S在4组中没有差别，而H组20S的活性比任何一组均增高； 5、HE染色提示：H和HI组别的血管壁厚度分别比N和NI组明显增厚，H组的粥样斑块明显，且血管壁厚度比HI组明显增厚(P＜0.05)； 6、免疫组化显示：HI组中泛素／UPC和IκBα或pIκBα的表达比H组明显增多，尤其是粥样斑块中的细胞表达更为突出，而p65在H组中的表达要比HI组增多；在NI中，泛素／UPC和IκBα或pIκBα的表达，比N组明显增多； 7、western blot显示：HI或NI组别中，泛素／UPC和IκBα或pIκBα的平均灰度值明显高于H或N组(P＜0.05)；而H组的p65平均灰度值比其余3组均增高(P＜0.05)，而其他3组间比较，没有明显差异(P＞0.05)。 结论1、泛素蛋白酶体通路积极参与动脉粥样硬化的病理过程； 2、氧化应激状态下，蛋白酶体26S的活性几乎不受到影响，而20S的活性明显增强； 3、阿司匹林，能通过部分抑制泛素蛋白酶体通路的活性，特别是20S的活性，减少对UPC、IκBα和pIκBα的降解，使p65表达下调，从而延缓动脉粥样斑快的形成； 4、泛素蛋白酶体通路可能是防治动脉粥样硬化的新靶点之一。

【关键词】：泛素蛋白酶体通路 动脉粥样硬化 阿司匹林 高胆固醇血症
【学位授予单位】：汕头大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R543
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