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《汕头大学》 2010年
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缝隙连接细胞间通讯在大鼠骨髓基质细胞成骨分化中的作用

郑创义  
【摘要】: 目的:探讨缝隙连接细胞间通讯在大鼠骨髓基质细胞成骨分化中的作用。 方法:采取全骨髓贴壁分离筛选法从雄性Sprague-Dawley大鼠中的股骨、胫骨中提取骨髓基质细胞并在L-DMEM中进行培养。细胞传代培养至第3代时,分成对照组、诱导组、实验组共3组,选用地塞米松+β-甘油磷酸钠+维生素C为成骨诱导剂、18α-甘草次酸为缝隙连接通讯阻滞剂,3组细胞分别加入培养液、培养液+成骨诱导剂、培养液+成骨诱导剂+18α-甘草次酸进行培养。培养过程中在不同时间点检测各组细胞的增殖、碱性磷酸酶相对活性,同时在第7天应用细胞免疫荧光技术定位缝隙连接蛋白43,RT-PCR法检测缝隙连接蛋白43、骨钙素、骨涎蛋白的mRNA水平。在第10天应用划痕标记染料示踪法评估缝隙连接细胞间通讯功能,在第21天茜素红S染色法检验基质中钙结节形成能力。 结果:在第7、9天的增殖能力,实验组诱导组对照组。第9、11天的碱性磷酸酶相对活性,对照组实验组诱导组。第7天,发现缝隙连接蛋白43定位于胞浆、胞膜,缝隙连接蛋白43的mRNA水平诱导组和实验组间无显著差别,但均高于对照组;骨钙素、骨涎蛋白的mRNA对照组实验组诱导组。第10天,显示缝隙连接通讯功能对照组实验组诱导组(均以P0.05为有显著统计学意义)。第21天,钙结节形成能力方面,肉眼观察显示实验组诱导组,对照组无钙结节形成。 结论:18α-甘草次酸能通过阻滞由缝隙连接蛋白43介导的缝隙连接细胞间通讯能力,从而减弱成骨诱导剂对大鼠基质细胞的成骨分化作用。
【学位授予单位】:汕头大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R329

【参考文献】
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