松茸多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性的研究

【摘要】：松茸(Tricholoma matsutake(S. Ito et Imai) Sing.)是一种与松属或栎属植物共生形成的外生菌根食用菌，有极高的营养价值和经济价值。松茸多糖是松茸的主要活性成分。目前国内对松茸多糖的研究重点侧重于抗肿瘤、调节免疫力等药理和功效，对结构研究较少。本文对松茸多糖的提取、分离纯化、结构鉴定和抗肿瘤活性方面进行了较为系统的研究，得到以下结论： 松茸的化学组成为：水分9.14%，粗蛋白19.21%，粗纤维7.40%，粗脂肪4.00%，灰分8.28%，总糖48.37%，粗多糖10.61%。通过响应面分析方法，以多糖提取率和氧自由基清除率(ORAC值)为响应指标，得到超声辅助水提松茸多糖工艺的最优参数为超声时间6min，超声功率234W，液料比为16，超声处理后经沸水浴提取2h，此时多糖得率为5.76±0.05%，ORAC值为423.80±9.43μmol Trolox/g。 松茸多糖TM-P经DEAE Sepharosse Fast Flow柱层析分级，得到TM-P1，TM-P2和TM-P3三个组分，其中TM-P2的ORAC值最高，达2100.44±25.32μmol Trolox/g。经气相色谱分析，TM-P1、TM-P2和TM-P3三个组分的单糖组成摩尔比分别为：TM-P1为岩藻糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:1.9:7.7:4.0；TM-P2为甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:5.9:1.1；TM-P3为岩藻糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:2.2:5.1:4.9。 TM-P1主要由→3,6)-Glcp-(2→、→6)-Glcp-(1→和→6)-Galp-(1→组成；TM-P2主要以→6)-Glcp-(1→、Glcp-(1→组成；TM-P3主要是以→3,6)-Glcp-(2→、→6)-Galp-(1→和Galp-(1→组成。TM-P1，TM-P2和TM-P3对人肝癌细胞HepG2和人肺癌细胞A549的体外抗肿瘤实验表明，抗肿瘤活性较高的组分为TM-P2，其次是TM-P1。当TM-P2的浓度为4mg/ml，对人肝癌细胞HepG2和人肺癌细胞A549的抑制率达到最大，分别为67.98±1.08%和59.04±3.78%。 经Sephadex G-75层析柱分离纯化，从TM-P1中分离出活性组分TM-P1A，分子量为361309Da，ORAC值为211.80±4.68μmol Trolox/g；TM-P2得到TM-P2A和TM-P2B两个组分，平均分子量为372443Da和4796Da，其ORAC值分别为268.66±5.02μmolTrolox/g和2475.33±15.32μmol Trolox/g。 TM-P1A、TM-P2A和TM-P2B的单糖组成摩尔比分别为甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:8.7:1.8、岩藻糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:3.9:17.7:7.9、甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.0:8.9:1.3。 经NMR分析得：TM-P1A是一种直链多糖，主要由α-1,6-吡喃型葡萄糖构成，另有少量吡喃甘露糖和吡喃半乳糖以1,6-糖苷键与之相连；TM-P2A是一种由β-1,6-吡喃型葡萄糖构成的无支链多糖，另外含有少量α-1,6-吡喃型葡萄糖、β-1,6-吡喃型半乳糖和β-1,6-吡喃型甘露糖；TM-P2B主要由β-1,6-吡喃型葡萄糖构成，无支链，有少量β-1,6-吡喃型半乳糖和β-1,6-吡喃型甘露糖。