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溪黄草多酚的提取、纯化、鉴定及生物活性研究

李臻  
【摘要】:溪黄草[Rabdosin serra (Maxim.) Hara]为唇形科香茶菜属[Rabdosia (Bl.)Hassk.]植物,是民间经常使用的一种中草药,其性甘苦、凉,可清热、退黄、利胆,治急性胆囊炎、急性黄疸型肝炎。 多酚在食品、日化、制药等领域有着广泛的用途,近年来,从植物中提取多酚逐渐成为研究热点,然而针对溪黄草多酚的研究报道较少。本文研究了溪黄草多酚的超声提取工艺,得出了最优提取条件;并研究了大孔树脂对多酚提取液的纯化工艺,为多酚的进一步研究提供了条件。此外,对溪黄草多酚的生物活性(抗氧化性,抑菌性和α-葡萄糖苷酶抑制作用)进行了研究,并对其中溪黄草多酚的抗氧化活性组分进行了初步鉴定。 主要研究内容如下: 1.溪黄草多酚的超声提取工艺优化采用正交实验设计对溪黄草多酚的超声提取工艺条件进行优化。通过Folin-Ciocalteu法对提取液的总酚进行测定,考查了乙醇浓度、料液比、提取温度、超声功率、提取时间等五个因素对溪黄草多酚超声提取得率。结果表明:溪黄草多酚超声提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%,料液比(g/mL)1:10,提取温度40℃,超声功率225W,提取时间25min,在最佳工艺条件下多酚得率达(6.81±0.11)%。 2.大孔树脂对溪黄草多酚吸附分离的工艺优化以溪黄草多酚为原料,通过静态吸附和解吸实验对10种大孔树脂进行筛选,确定AL-1为最优吸附树脂。通过静态与动态相结合的方法,确立AL-1树脂对溪黄草多酚的最佳吸附/解吸工艺条件。结果表明,溪黄草多酚提取液的最佳吸附条件为:上样总酚质量浓度为520μg/mL,上样液pH为4,吸附流速为0.8mL/min。最佳洗脱条件为:乙醇体积分数80%,流速0.5mL/min。 3.溪黄草多酚的抗氧化活性研究对溪黄草中的多酚提取物的抗氧化性进行了研究。通过DPPH自由基清除实验、过氧化氢清除实验、还原力实验、抑制β-胡萝卜素褪色实验以及抑制亚油酸过氧化实验分别研究了溪黄草多酚与抗坏血酸的抗氧化能力。结果表明,溪黄草多酚提取物具有良好的抗氧化能力,其清除DPPH自由基、清除过氧化氢、抑制亚油酸过氧化的IC50值分别为5.00μg/mL、42.51μg/mL与66.58μg/mL,低于抗坏血酸相应的IC50值,即5.99μg/mL、56.74μg/mL与94.83μg/mL。表明在试验范围内,溪黄草多酚的抗氧化活性强于抗坏血酸。用高效液相色谱,紫外光谱扫描以及液质联用等方法对溪黄草多酚的抗氧化活性组分进行了鉴定。结果表明:溪黄草多酚的主要抗氧化成分为迷迭香酸和绿原酸,其中迷迭香酸为主要活性成分。 4.溪黄草多酚的抑菌性研究 以牛津杯法对溪黄草多酚的抑菌性进行研究。分别比较不同温度、pH、浓度的溪黄草多酚提取液的抑菌性,并对溪黄草多酚的最低抑菌浓度进行了测定。结果表明:溪黄草多酚对皱褶假丝酵母、米黑根毛霉两类真菌未有明显抑制作用,而对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌这三类细菌均存在明显的抑制效果,且抑制效果大小依次为金黄色葡萄球菌大肠杆菌枯草芽孢杆菌。其中,温度对溪黄草多酚的抑菌效果并无显著影响,而pH的影响则根据不同抑菌对象而有所不同,对于金黄色葡萄球菌的抑制作用在pH值为7时最强,对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用均在pH为8时最强。此外,溪黄草多酚对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度分别为0.3mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL。 5.溪黄草多酚的α-葡萄糖苷酶抑制作用研究用比色法建立酶反应动力学方程,并对溪黄草多酚的α-葡萄糖苷酶抑制作用进行研究。结果表明:溪黄草多酚对α-葡萄糖苷酶的抑制属于可逆性抑制剂,其具体抑制类型为混合非竞争性抑制。抑制率实验显示,溪黄草多酚对α-葡萄糖苷酶的抑制性随溪黄草多酚浓度的增大而增强,达到一定浓度后增幅不再明显,当浓度为48μg/mL时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为44.15%,趋于稳定值。 本研究建立了溪黄草多酚的超声辅助提取-大孔树脂纯化工艺,首次较为综合地评价了溪黄草超声辅助提取物的生物活性,所得结果有利于提高溪黄草的利用价值,为其进一步的开发利用提供理论基础。


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