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《华南理工大学》 2004年
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显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的提取纯化及抗氧化活性研究

林淑英  
【摘要】:二氢杨梅素具有多种生理活性,来源广泛,在显齿蛇葡萄中具有很高的含量,目前对其的研究主要为药理方面,为了真正实现物尽其用,进一步系统研究其提取纯化和应用性质等是非常必要的。目前对二氢杨梅素纯化的研究集中在色谱法,此法在生产上投资大,制备规模小,不利于工业化。因此本研究以显齿蛇葡萄幼嫩芽头干叶为原料致力于易于工业化生产二氢杨梅素的结晶条件研究。并对其抗氧化机理、应用条件、稳定性及分子修饰进行了系统的研究。 1. 首先鉴定了显齿蛇葡萄芽头干叶中二氢杨梅素化学结构,其化学命名为3,5,7,3',4',5'六羟基二氢黄酮醇。在此基础上,建立了高效液相色谱法测定二氢杨梅素的操作条件。色谱柱为Symmetry 300~(TM) C_(18) 3.5×150mm;流动相:乙腈:水:乙酸=1:9:0.1,pH 值为3.5;柱温:25℃;流速:1.0mL/min;检测波长:288nm;进样量:10μL。样品浓度在10μg/mL~100μg/mL 范围内呈现良好的线性相关性。 2. 本研究所采用的原料显齿蛇葡萄幼嫩芽头干叶中二氢杨梅素含量高达20.27%;总黄酮含量为30.22%。蛋白质含量为8.69%;可溶性糖为9.10%;总灰分6.52%。含有氨基酸种类达17 种以上。采用水热提取法分离制备显齿蛇葡萄幼嫩芽头干叶中的二氢杨梅素,料水比为1:20,100℃下提取30min 为较好的制备条件,提取率可达22.00±0.99%;纯度为51.60±1.21%。 3. 二氢杨梅素在水中的溶解度随温度变化非常大, 100 ℃溶解度为1.5900g/100g 水,25℃下溶解度为0.0691g/100g 水。二氢杨梅素在乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸以及正己烷等常用有机溶剂中的溶解度较高;在乙醇溶液中的溶解度随温度变化较小,随浓度变化较大。 4. 采用水重结晶法以15:1000 的料水比进行等溶质浓度重结晶,5 次重结晶后产率为10.83±0.36%;浓度梯度重结晶法较等溶质浓度重结晶法产率提高5%以上,产品纯度均可达到95%以上。产品外观为黄白色细针状晶体,无味。有机溶剂重结晶法,选择60%浓度乙醇为适合的二氢杨梅素结晶体系,经过5 次重结晶后,产品的纯度可达98%,晶体为黄色、棒状,长度可达3mm,结晶产率为30.01±1.26%,较水重结晶法高2 倍左右。水重结晶法和60%乙醇温度梯度重结晶法得到的二氢杨梅素结晶产品晶形不同,均具有较高的结晶度。 5. 固态二氢杨梅素具有良好的热稳定性,加热到245℃才发生分解。但在水相中随时间和温度的增加会变得不稳定。pH 值是影响二氢杨梅素稳定性的重要因素。碱性条件下(pH8.0),二氢杨梅素结构发生变化,达到pH=9.0 后二氢杨梅素分子结构彻底被破坏。酸性和中性条件(pH7.0)下,二氢杨梅素则表现出良
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