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《华南理工大学》 2010年
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siRNA特异抑制树突状细胞BAK基因表达的研究

余森辉  
【摘要】: 本研究主要探讨小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)中促凋亡基因BAK表达的影响。针对BAK基因区设计了2条高效特异的siRNA,合成相应的oligo DNA,构建siRNA表达质粒psi-BAK-183与psi-BAK-195,并对这些质粒进行了限制性酶切、测序等鉴定工作;在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,提取总蛋白,用蛋白印迹法检测Bak蛋白的表达量;并通过流式细胞仪检测转染后72h树突状细胞的存活率。经过酶切鉴定和测序证实两个重组质粒psi-BAK-183、psi-BAK-195分别构建成功; western-blot结果显示2条特异性siRNA均起到了抑制作用,而以si-BAK-183较为明显,转染后72h达到(51.5±3.54)﹪,相同条件之下,si-BAK-195对Bak蛋白表达的抑制率则为(26.5±6.36)﹪,细胞同时转染阴性对照质粒psiRNA,对Bak蛋白表达没有影响;转染重组质粒后72h,树突状细胞存活率分别为93.95﹪、89.66﹪,均高过对照组的88.00﹪。si-BAK-183、si-BAK-195都能降低树突状细胞中促凋亡基因BAK的表达,为进一步延长树突状细胞的寿命提供了实验基础,并为增强抗原递呈能力提供了新的思路和方法。
【学位授予单位】:华南理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q789

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