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《华南农业大学》 2016年
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TNFα影响有机阴离子转运多肽1A2表达水平的分子机理研究

王丽雪  
【摘要】:人类有机阴离子转运多肽(Organic Anion Transporting Polypeptides,OATP)是一类重要的药物转运蛋白,能介导内、外源性物质的跨细胞转运,在药物的吸收、分布、代谢、消除方面起着重要的作用。OATP1A2为OATP家族中的一个成员,在大脑、小肠、肝脏、肾脏等不同组织中表达,可转运各种不同的药物,影响药物在细胞中的累积。因此,对OATP1A2表达水平的调控会影响机体对药物的生物利用度。炎症状态下众多药物代谢酶及转运体的表达和功能发生下调,从而导致机体对药物的处置过程会发生显著改变。研究发现,机体在该状态下会释放一系列炎症细胞因子,影响药物代谢酶的表达和功能,药物转运体也可能受到这些细胞因子的调控。已有报道表明,TNFα可导致多个OATP家族成员的表达水平下降,但是具体的分子调控机制尚不清楚。本研究通过分析OATP1A2的编码基因SLCO1A2转录起始位点前2087 bp到转录起始位点后73bp的片段,发现在转录起始位点前1834 bp到1848 bp处有一个转录因子NFκB的可能结合位点,由于TNFα对蛋白表达水平的调控往往是通过NFκB实现的,我们进一步对该位点在TNFα调控OATP1A2过程中的作用进行了系统的分析,所获得的主要研究结果如下:1.构建获得了带不同长度SLCO1A2转录起始位点上游片段的荧光素酶报告载体,发现带有NFκB结合靶位点的重组子比没有该靶位点的启动子活性低,说明NFκB的结合可能对SLCO1A2的转录表达有抑制作用;2.在对NFκB的可能结合位点进行点突变后,双荧光素酶报告基因分析发现启动子活性部分恢复,说明该结合位点在SLCO1A2表达水平调控过程中发挥了作用;3.通过TNFα对细胞进行处理,发现细胞核中NFκB的含量显著增加,表明转录因子NFκB参与了细胞对TNFα刺激的反应;4.TNFα中和抗体处理表达带有NFκB可能结合位点荧光素酶报告载体的细胞后,启动子活性部分恢复,进一步说明该位点参与了TNFα对OATP1A2的调控;5.通过染色质免疫沉淀,我们验证了该区域与NFκB的结合,并发现在TNFα存在的条件下,与该位点结合的NFκB增加,进一步揭示了TNFα对SLCO1A2表达的抑制作用是通过NFκB的负调控实现的。
【学位授予单位】:华南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:Q78;R91

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