收藏本站
《华南农业大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

一种在植物细胞内共表达多种荧光融合蛋白的新方法及其在蛋白质极性转运与功能研究中的应用

钟桂涛  
【摘要】:蛋白质的亚细胞定位对于深入了解与研究其在细胞中的生理功能至关重要。将目标蛋白质与细胞内各细胞器和囊泡运输的报告蛋白进行共同表达时空分析,是一种方便且有效用于揭示目标蛋白的亚细胞定位和阐明其生物学功能的研究手段。传统的蛋白质共表达方法一般需要采用多个独立的蛋白表达载体来分别表达荧光融合蛋白,因此具有系列局限,其中包括:蛋白质共表达效率低、各载体表达水平有差异以及共表达转基因植株的获得需要转化、杂交和后续遗传筛选需时较长等缺点。在本研究中,我们建立了一个能够在植物中共表达多种荧光融合蛋白的新型高效的实验体系,并利用该体系来研究植物细胞内蛋白质极性转运的分子作用机理。首先,我们构建由多个半独立蛋白表达盒组成的表达载体,并在细胞中对该载体进行瞬时或稳定遗传表达,从而实现利用单一载体高效共表达多种荧光融合蛋白。为了验证该方法的可行性,我们分别在几种植物细胞中共同表达荧光融合的液泡分选受体和分泌载体膜蛋白。结果表明,它们的亚细胞定位与前人研究结果一致,说明该新实验体系完全有效可行。同时,与传统的植物蛋白共表达方法相比,这一新型的植物蛋白表达方法具有诸多优点。其每个蛋白质表达盒都含有各自独立的表达元件如启动子或终止子,可根据不同的蛋白质表达需求来进行灵活组合。此外,该方法中DNA片段的连接、蛋白质表达盒的组装和最终表达载体构建可以方便快捷地通过优化的一步法反应实现,无需额外酶切和连接反应。同时,它完全兼容目前基于荧光蛋白的生物成像技术和分析方法,如FRET和BiFC。同时,该新系统可以显著提高制备多蛋白共表达遗传转化植物的效率,缩短纯合体筛选所需时间。其次,利用该新型蛋白质共表达系统对植物细胞壁合成酶极性运输进的分子调控机制开展研究。植物细胞壁是植物细胞的重要结构,主要由纤维素和果胶,以及其他多糖和蛋白质等组成。这些细胞壁组分的形成需要多种细胞壁合成酶的参与,包括纤维素合酶,果胶甲基酯酶和胼胝质合酶。其中果胶甲酯酶NtPPME1在高尔基体中以囊泡形式分泌到细胞膜,纤维素合酶复合物和胼胝质合酶复合物通过反式高尔基网状体分泌的囊泡运输到细胞膜。然而,纤维素合酶,果胶甲基酯酶和胼胝质合酶极性分泌过程的分子作用机制尚未被研究清楚。我们利用新建立的蛋白共表达体系,以快速增长的花粉管细胞为实验材料,通过激光共聚焦电子显微镜技术探索纤维素合酶,果胶甲基酯酶和胼胝质合酶极性分泌与胞吐复合体之间的关系。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 ;中国医药城首批融合蛋白试剂出口[J];泰州科技;2010年08期
2 冀旺盛;王斌;刘新奇;;三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ的表达及抗单纯疱疹病毒/人乳头瘤病毒功能研究[J];中国病毒病杂志;2019年06期
3 李东巧;陈芳;Cynthia Liu;Yingzhu Li;Yi Deng;韩涛;余敏;杨艳萍;王学昭;;全球融合蛋白药物研发态势分析[J];中国生物工程杂志;2019年05期
4 KahYong Goh;Lufang Zhou;练桂丽;;线粒体融合蛋白与心血管疾病[J];中华高血压杂志;2014年10期
5 徐富勇;孟玮;刘仁荣;徐玲;裘雪梅;朱立鑫;;脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用[J];食品科学;2014年08期
6 李献帅;穆军升;;线粒体融合蛋白1、线粒体融合蛋白2与心肌细胞生理机能关系的研究进展[J];中国胸心血管外科临床杂志;2013年04期
7 沈波;傅鹰;孟哲峰;徐巍;何小帆;朱敏;;融合蛋白CXCL10-loop3-EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究[J];中国病理生理杂志;2009年12期
8 汪建华;融合蛋白技术的应用[J];陕西医学杂志;2004年12期
9 杨和平,黄宗之;融合蛋白的生产技术[J];中国动脉硬化杂志;1994年04期
10 吴祖泽;汪坤;李世崇;董晓娜;窦桂芳;葛志强;靳继德;;新蛭素和人IgG-Fc融合蛋白的表达纯化和功能评价[J];天津大学学报(自然科学与工程技术版);2019年02期
11 夏姗;赵洪亮;薛冲;吴晓杰;李月;杜莹莹;武福军;张娜;刘志敏;;可解离的人胰高血糖素样肽1与人血清白蛋白融合蛋白的构建表达及其初步药代动力学和药效动力学评价[J];军事医学;2015年08期
12 张晓芳;佘佳红;李先平;陆国才;张晓冬;姜华;陈黛影;戴益民;张淑英;袁伯俊;;rhLFA-3:Fc融合蛋白连续静脉注射对食蟹猴长期毒性实验研究[J];中国新药杂志;2013年10期
13 严凌;朱铁兵;;线粒体融合蛋白-2与心血管疾病[J];心血管病学进展;2011年02期
14 赵光举;卢中秋;姚咏明;;线粒体融合蛋白2研究新进展[J];生物化学与生物物理进展;2010年03期
15 肖明兵;赵敏星;倪润洲;江枫;周嘉伟;;GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化[J];临床检验杂志;2010年03期
16 朱振洪;;抗体—超抗原融合蛋白及其应用的研究进展[J];药物生物技术;2007年04期
17 李凌云,许正平;血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化[J];南京医科大学学报(自然科学版);2005年07期
18 黄纯兰,羊裔明,李晓明,韩丽英,黄丽;免疫荧光技术在急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗中的作用[J];泸州医学院学报;2004年05期
19 林丽珠,李昌本,赵寿元,DeWilde G.Haegeman G.FiersW.;人肿瘤坏死因子受体I死亡域融合蛋白基因的克隆与表达[J];生物化学与生物物理学报;1998年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 姜文国;张树平;;基于4-1BBL的双功能融合蛋白的构建及比较[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
2 孙益;葛霁光;;人睫状神经营养因子和可溶性人睫状神经营养因子受体的融合蛋白的表达[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
3 高基民;吕建新;;白细胞介素15/链亲和素融合蛋白的制备及活性测定[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
4 李凤杰;张蓉;胡长鹏;冉茜;向阳;相丽欣;陈立;肖燕妮;李忠俊;;急性辐射损伤防治药物制剂IL-12/Fc融合蛋白的药效学、药理学和毒理学研究[A];中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要[C];2018年
5 杨振泉;刘巧泉;于恒秀;潘志明;焦新安;;新城疫病毒融合蛋白在转基因水稻叶片中的表达及其免疫原性[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
6 杨振泉;刘巧泉;于恒秀;潘志明;焦新安;;新城疫病毒融合蛋白在转基因水稻叶片中的表达及其免疫原性[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
7 王兰;王德仲;杨晶;官丽莉;王艳芳;刘秀明;夏继桥;李海燕;姜潮;李校堃;;拟南芥表达植物油体蛋白-角质细胞生长因子-2融合蛋白的研究[A];2013全国植物生物学大会论文集[C];2013年
8 陈丽华;王强;侯万国;;不同链接剂修饰的融合谷胱甘肽活性的研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
9 丁来丰;王玉兰;;一种融合蛋白对黑素瘤移植小鼠代谢组影响的研究[A];2018第二十届全国波谱学学术年会会议论文摘要集[C];2018年
10 孙翠莲;潘建平;;sflk1-IFN-γ融合蛋白的分离与纯化[A];浙江省免疫学会第六次学术研讨会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 朱敏丽 通讯员 潘越;中国医药城首批融合蛋白试剂出口[N];泰州日报;2010年
2 常丽君;线粒体融合蛋白2决定细胞生死[N];科技日报;2013年
3 吴红梅;我省首批融合蛋白试剂出口美国[N];新华日报;2010年
4 金陵;融合蛋白试剂首次出口美国[N];中国医药报;2010年
5 本报特约撰稿 吴文君;抗体药与融合蛋白药物两大高速扩容地带[N];医药经济报;2016年
6 记者 张晔 通讯员 刘宁春;一种有效治疗冠心病的融合蛋白发现[N];科技日报;2009年
7 通讯员 沈季 记者 张兆军;抗肿瘤融合蛋白进入临床试验[N];科技日报;2005年
8 毛磊;新型抗流感药物有望面世[N];医药经济报;2003年
9 冯卫东;抑制蛋白相互作用可成为治癌新方法[N];科技日报;2009年
10 本报记者 张蓝飞;抗VEGF药物优势对比[N];医药经济报;2016年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 罗刚;毕赤酵母表达重组猪促卵泡素的研究[D];中国农业大学;2019年
2 吉福志;融合蛋白anti-EGFR-iRGD对胃癌放疗增敏作用与机制[D];南京医科大学;2018年
3 茹毅;重组HSA/dTMP融合蛋白在哺乳动物细胞中的高效表达及其活性研究[D];兰州大学;2016年
4 王梅竹;TAT-HSA-α-MSH融合蛋白的酵母表达及抑制中枢神经炎症的研究[D];兰州大学;2016年
5 李玉龙;融合蛋白PML-RARα对NRF2信号通路的调控及机理研究[D];浙江大学;2016年
6 殷艳婷;B类G蛋白偶联受体的结构与功能研究[D];中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所);2017年
7 王维敏;长效Fc-apelin-13融合蛋白对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏及心脏的保护作用[D];南京医科大学;2018年
8 聂凌虎;一组导向融合蛋白的基因工程研究[D];中国协和医科大学;1998年
9 杨晶;三组治疗艾滋病的靶向融合蛋白的基因工程研究[D];中国协和医科大学;2004年
10 孙凯;血小板/T细胞活化抗原1融合蛋白的表达、纯化及其配体的初步鉴定[D];第四军医大学;1998年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李大成;大黄鱼抗菌肽Pc-pis的抗癌作用以及融合蛋白表达[D];厦门大学;2019年
2 张雁;HPV18-E6/7融合蛋白在乳酸菌中的表达及其粘膜免疫[D];暨南大学;2017年
3 钟桂涛;一种在植物细胞内共表达多种荧光融合蛋白的新方法及其在蛋白质极性转运与功能研究中的应用[D];华南农业大学;2018年
4 安晨;主动免疫INH-α、AMH和PRL融合蛋白对浙东白鹅产蛋及就巢性状的影响[D];扬州大学;2019年
5 沈伊勤;单克隆抗体聚体与碎片的去除与纯度检测方法的优化[D];上海交通大学;2018年
6 杜诗涵;p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响[D];天津医科大学;2019年
7 张娇;线粒体融合蛋白2在小鼠角膜形态发育中的作用[D];中国医科大学;2019年
8 陈思诗;人PD-Ls-Fc融合蛋白的表达及其生物学效应的研究[D];福州大学;2018年
9 王娜;重组促血小板生成素模拟肽-人血清白蛋白融合蛋白的分离纯化及稳定性研究[D];兰州大学;2017年
10 汪坤;新蛭素与人IgG-Fc融合蛋白的表达纯化和功能评价[D];天津大学;2018年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978