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《华南农业大学》 2017年
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广州市光鸡中禽流感病毒的污染状况及来源分析研究

毛小晓  
【摘要】:禽流感病毒的广泛传播已对人类健康产生严重威胁并造成巨大经济损失。家禽在广州市人们饮食文化中扮演重要角色,且购买和食用常采用到禽类市场挑选新鲜光鸡或挑选活禽当场宰杀的方式。近年,广州市卫生部门对禽类市场污染状况不间断分析表明,禽类市场普遍存在禽流感病毒污染。同时,具有禽类市场暴露史的人患禽流感病例不断增加提示直接接触光鸡存在感染禽流感病毒风险。鉴于此,本文以光鸡为研究对象,通过对不同市场光鸡中禽流感病毒污染状况、不同部位禽流感病毒污染水平和光鸡中禽流感病毒污染来源的检测,跟踪分析了广州市光鸡中禽流感病毒的污染状况,为保护人民群众避免被禽流感病毒感染、相关部门制定禽流感病毒的防控措施,保障食品安全提供科学依据。具体研究内容和结果如下:(1)光鸡样本禽流感病毒污染分析指标体系构建建立了以FluA检出率、禽流感病毒感染率和H5、H7和H9不同亚型分布以及病毒RNA含量和活病毒含量的光鸡禽流感病毒污染状况分析的指标体系。采用实时荧光定量RT-PCR方法测定FluA的RNA含量并确定不同亚型;通过测定半数组织培养感染剂量(TCID50)确定禽流感病毒的感染率。结果显示,建立的荧光定量RT-PCR方法对FluA扩增效率为90.9%,标准曲线相关性R~2=0.998;能够定量测定禽流感病毒的RNA含量;能够有效鉴定H5、H7和H9不同亚型;感染禽流感活病毒的MDCK细胞有显著病变现象并与病毒滴度呈正相关梯度关系,可用于测定病毒感染率和滴度。(2)广州市不同类型市场光鸡中禽流感病毒污染状况分析对活禽批发、活禽零售和超市3类8个代表性市场连续6个月跟踪采样,共采集光鸡样品1377份,其中批发市场359份、大型超市147份、零售市场871份。其FluA的检出率分别为47.4%、5.4%和67.5%,感染率为29.2%、0.0%和44.1%,不同类型市场禽流感病毒检出率和感染率之间的差异具有统计学意义(P0.05)。零售市场的禽流感病毒检出率和感染率高于批发市场和大型超市,其中大型超市检出率和感染率最低。四分位数分布统计分析显示活禽零售市场的禽流感病毒的RNA含量高于批发市场(P0.001)和大型超市(P0.001)。分析不同市场光鸡中禽流感病毒的感染活性,结果表明零售市场(长湴R=0.372,P0.001;富山R=0.560,P0.001)禽流感病毒感染活性高于批发市场(R=0.259,P=0.209)和超市。分析不同市场光鸡中禽流感病毒H5、H7和H9的亚型分布,发现各个市场中H9的阳性率最高,其次是H7,H5仅在部分零售市场中存在。批发市场肺部样本RNA低拷贝样本数相对其他类型市场含量较多,零售市场中则含有较多RNA高拷贝而非H5、H7和H9亚型。(3)广州市光鸡不同组织部位禽流感病毒污染分析采集光鸡禽流感病毒高分布部位咽拭、肛拭和肺部,6个月共采集咽拭样本460份,肛拭样本447份和肺部样本470份,三者检出率分别为60.0%、52.0%和53.8%,感染率分别为43.9%、38.9%和24.7%,差异均具有统计学意义(P0.05)。四分位数分布统计分析显示,咽拭样本禽流感病毒RNA含量分布浓度达到10~6 copies/mL,其他样本RNA含量相对较低,在光鸡不同组织部位中活病毒含量都在检出线附近,咽拭样本活病毒量(10~2.6.6 copies/mL)在上四分位数分布浓度大于肛拭样本(10~(2.3)copies/mL)和肺部样本(10~1.8.8 copies/mL)。分析同一市场光鸡不同组织部位中禽流感病毒的污染状况,同样显示光鸡咽拭样本禽流感病毒检出率、感染率、RNA含量和活病毒含量在三种样本中最高。不同样本禽流感病毒H5、H7和H9亚型分析,显示光鸡中不同样本主要是H9亚型,其中肺部样本在各个市场中较咽拭和肛拭样本亚型种类多。分析不同样本禽流感病活病毒量和RNA拷贝数的相关性发现,禽流感病毒在咽拭样本感染性较强,其次是肺部样本。(4)广州市光鸡中禽流感病毒污染来源分析分别选取一个零售和批发市场,进行同步活禽和环境样本采集,分析广州市光鸡中禽流感病毒污染来源。分别对两个市场中的6类样本(活禽咽拭和肛拭、光鸡咽拭和肛拭、光鸡肺部以及环境)进行统计分析,零售市场活禽咽拭样本在6种样本中病毒检出率最高(79.6%),环境样本(77.2%)次之而活禽肛拭样本最低(18.8%),各样本之间的差异具有统计学意义(P0.05),批发市场与零售市场的结果相一致。光鸡中禽流感病毒多少直接受活禽和环境禽流感病毒污染程度影响。另外,从零售和批发两个市场分别取40只活禽进行从活禽到宰杀为光鸡的一对一实验,分析光鸡对应样本的活禽及其密切接触环境状况。结果表明,光鸡样本中咽拭样本污染主要来自活禽,肛拭样本污染主要来自环境和其它宰杀环节污染,活禽批发市场相对与零售市场光鸡中禽流感病毒分布受活禽和环境污染程度弱。批发市场活禽宰杀之前的最初环境中禽流感病毒含量低于零售市场,但在宰杀过程中,在档口原有环境基础上产生了较高禽流感病毒的新环境,该新环境禽流感病毒含量高低与初始活禽带毒量密切相关。本研究表明活禽零售市场中光鸡的禽流感病毒污染最严重,主要来源于市场中的活禽和环境。大型超市中光鸡污染禽流感病毒情况最轻,几乎没有活病毒的污染,没有禽流感病毒感染风险。
【学位授予单位】:华南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

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