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《华南农业大学》 2017年
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核受体对猪有机阴离子转运多肽1a2调控机制初探

陆继磊  
【摘要】:有机阴离子转运多肽(Organic anion transporting polypeptides,人类:OATPs,动物:Oatps)是重要的细胞膜转运蛋白,广泛分布于不同的组织和器官如肝脏、肾脏、小肠、睾丸、血脑屏障等,能够转运大量内、外源物质,该家族的底物包括类固醇类物质、胆汁盐、甲状腺激素、药物、毒素等多种内外源物质,因此在药物的吸收、分布和排泄中发挥重要作用。核受体是一类配体激活性转录调控因子,在机体的生长、发育等生理活动中发挥重要作用。PXR(孕烷X受体,Pregnane X receptor)、CAR(组成型雄激素受体,Constitutive androgen receptor)、LXR(肝X受体,Liver X receptor)和FXR(法尼醇X受体,Farnesoid X receptor)是核受体家族的重要成员,在体内广泛分布,经配体活化后调控众多机体代谢相关酶、转运蛋白和信号途径。有报道表明,在人类和模式动物中,许多OATPs的转录受到核受体的调控,但是在食品动物中对Oatps转录调控的研究还很匮乏。OATP1A2是OATPs家族中的重要成员,能够转运多种药物,影响药物在细胞中的累积。本实验室的前期研究从猪肝中克隆了人体OATP1A2的同型体猪Oatp1a2(sOatp1a2),并发现该转运蛋白在肝脏中高表达,有可能在猪体内药物吸收、分布和排泄中发挥作用。由于OATPs/Oatps可转运各种药物,包括抗生素类药物,明确该转运蛋白的调控机制将为我们利用Oatp1a2作为目标蛋白,提高猪体内对药物的吸收效率,减少药物残留提供重要理论依据。本研究中,我们重点对涉及OATPs表达调控的四种主要核受体PXR、CAR、LXR和FXR对Oatp1a2的作用进行了研究,所获得的主要研究结果如下:(1)计算机软件对Slco1a2转录起始位点上游2147 bp的序列进行分析发现,该序列具有5个可能的核受体靶位点,分别为IR2(-2030 bp~-2017 bp)、DR1(-1704 bp~-1692 bp)、ER1(-1476 bp~-1464 bp)、DR8(-1409 bp~-1390 bp)和DR3(-653 bp~-639bp);(2)在HepG2和LLC-PK1两种细胞中共转染LXR和FXR两种核受体均能显著上调带有猪Slco1a2转录起始位点前2147 bp序列的荧光素酶载体的表达,其中FXR的影响更明显。共转染的PXR和CAR则无显著影响;(3)利用各核受体的激动剂处理共转染带有Slco1a2转录起始位点前2147 bp序列的荧光素酶载体和不同核受体的细胞,同样发现LXR和FXR的激动剂可显著增加荧光素酶的表达,而PXR和CAR的激动剂对荧光素酶的表达并无显著影响;(4)通过构建带有不同核受体靶位点序列的荧光素酶载体,我们发现带有IR2(-2030bp~-2017 bp)和DR8(-1409 bp~-1390 bp)的载体对FXR的激动剂GW4064有较强的响应,初步推测FXR对Slco1a2的调控有可能是通过这两个位点实现的;带有IR2(-2030 bp~-2017 bp)的载体对LXR的激动剂GW3965也有比较强的响应,推测LXR对Slco1a2的调控有可能是通过该位点实现;(5)进一步对IR2和DR8两个位点保守碱基的突变发现,IR2和DR8的保守碱基突变后,GW4064均失去了对Slco1a2的上调作用。初步的电泳迁移率(EMSA)实验发现IR2可能直接与FXR发生了相互作用;(6)我们利用FXR转染并用GW4064处理猪肾细胞LLC-PK1的方法,发现激活的FXR可小幅度上调猪Slco1a2的表达。
【学位授予单位】:华南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.2

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