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《华南农业大学》 2005年
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番茄RNA病毒寄主因子基因ToTOM3的克隆与功能鉴定

蒙姣荣  
【摘要】: 本研究克隆了支持烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)复制的番茄基因ToTOM3。该基因全长cDNA共有1267个核苷酸,包含一个含888个核苷酸的编码区、72个核苷酸的5′非编码区和307个核苷酸的3′非编码区,编码一个含295个氨基酸、推测是一种七次跨膜蛋白的分子量为34.4 kDa的蛋白质。ToTOM3与拟南芥一个RNA病毒寄主因子基因AtTOM3有76.9%的同源性,与番茄中支持CMV的寄主因子基因ToTOM1有58.6%的同源性。 用部分基因组文库结合PCR的方法克隆了ToTOM3基因的全长转录区,共6885bp,包含11个外显子和10个内含子。11个外显子的长度依次为243、91、53、93、72、73、46、64、54、78和400bp。10个内含子的长度依次为2031、155、77、77、654、75、1274、80、333和862 bp。 相对定量RT-PCR试验表明ToTOM3基因在番茄子叶期、5叶期、10叶期、结果期等4个生育期的茎、根、叶及结果期的花和果等组织中均有表达,而且表达量基本一致,说明ToTOM3属于组成型表达基因。 将ToTOM3基因反义RNA和RNA干扰质粒通过农杆菌介导方法导入番茄,获得26株转基因番茄。Southern杂交表明,这26株转基因番茄的染色体中均携带单拷贝外源基因片段。所有的盆栽转基因番茄均能正常生长、开花和结果。 分别用TMV和CMV对5-6叶期转基因番茄和非转基因番茄苗进行接种。用TMV接种10天后,非转基因番茄苗表现出斑驳症状,而转基因苗则无任何症状表现;90天后,接种TMV的非转基因植株仍表现为斑驳症状,而转基因植株无任何症状。苋色藜枯斑定量和DAS-ELISA检测结果显示,所有的转基因植株中TMV均比非转基因对照明显减少,其中,A53中TMV的含量最低,仅相当于对照的7.0%,而A134和R(A)114所含的病毒量最高,相当于对照的52.6%。用CMV接种10天后,非转基因番茄表现出典型的花叶症状,而转基因苗则无任何症状表现;90天后,非转基因番茄苗的叶片严重黄化,形成凹突不平的疱斑,而转基因植株仅表现出轻微的斑驳症状。苋色藜枯斑定量和DAS-ELISA检测结果显示,所有的转基因植株中CMV的含量均比非转基因对照明显减少。不同的转基因株系携带的病毒量有所差异,A25所含的CMV量仅为对照的12.4%,R(A)8为对照的58.1%。高抗TMV的转基因株系同时也高抗CMV。 本研究证明,ToTOM3是TMV和CMV共同的寄主因子。同时,本研究也显示,通过抑制寄主因子的表达,可以创造出抗病毒的植物新种质。
【学位授予单位】:华南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S436.412

【参考文献】
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1 李华平,胡晋生,范怀忠;植物病毒株系间交互保护和遗传工程交互保护[J];生物工程进展;1995年06期
2 周北雁,李毅,陈章良;北京大学的抗病毒转基因作物[J];生物技术通报;1999年03期
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1 程海荣;番茄RNA病毒寄主因子基因TTOM1的克隆与功能鉴定[D];广西大学;2003年
【共引文献】
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1 刘华山,张玉丰,韩锦峰,孟凡庭,王方;烟草花叶病防治研究进展[J];安徽农业科学;2005年08期
2 袁贞;沈文涛;王冬梅;周鹏;;翻译起始因子4E及其异构体与植物病毒感染的联系[J];安徽农业科学;2008年09期
3 周静亚;徐忠传;张保龙;何晓兰;;AP70抗病基因转化番茄的研究[J];安徽农业科学;2008年13期
4 张洪清;;木本植物研究进展[J];安徽农业科学;2008年20期
5 徐兴阳;董家红;端永明;张廷金;杨龙祥;;植物诱导抗病剂组合应用对烟草花叶病的防控效果[J];安徽农业科学;2011年31期
6 王杰,张大伟,方琴;无子嫁接西瓜抗病毒病的生理生化机制研究[J];安徽农业大学学报;2002年04期
7 张超,操海群,陈莉,王杰;食用菌多糖对植物病毒抑制作用的初步研究[J];安徽农业大学学报;2005年01期
8 黄锡志,寿森炎,廖乾生;转基因番茄研究进展[J];北方园艺;2001年03期
9 熊先军,杨丽梅,刘明月,方智远;蔬菜转基因研究进展[J];北方园艺;2004年01期
10 彭炳惠,王秀峰;转基因蔬菜的现状及安全性分析[J];北方园艺;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 李春燕;刘和;田彩芳;秦国新;蔡华成;;脱毒骏枣幼树枝干抗寒性的调查研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
2 苏彩霞;霍秀文;刘杰才;马立国;;番茄子叶、下胚轴植株再生体系的建立[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
3 漆巨容;周心智;;生物技术在果树上的应用[A];农业生物灾害预防与控制研究[C];2005年
4 庄木;谢丙炎;王晓武;方智远;;利用PVX侵染性载体分析CMV正义和反义2b基因间的相互作用[A];农业生物灾害预防与控制研究[C];2005年
5 洪健;周雪平;;ICTV第七次报告以来植物病毒的分类进展[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
6 王从丽;王凤龙;王劲波;钱玉梅;;1.5%植病灵(Ⅱ)号乳油对烟草花叶病毒病防病作用的研究[A];“植物保护21世纪展望”——植物保护21世纪展望暨第三届全国青年植物保护科技工作者学术研讨会文集[C];1998年
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1 李红霞;几种抗病毒药剂对烟草花叶病毒的抑制作用及相关机理研究[D];河北农业大学;2010年
2 赵钦;国内禽戊型肝炎病毒的分离鉴定及其抗原性的研究[D];山东农业大学;2011年
3 王元英;烟草抗病基因筛选及其高通量RNAi载体库的构建[D];中国农业科学院;2011年
4 李开拓;荔枝果实成熟过程中的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2011年
5 史利玉;玉米粗缩病抗性遗传研究[D];四川农业大学;2010年
6 覃碧;小麦抗白粉病基因Pm6的精细定位及其候选基因的克隆[D];南京农业大学;2011年
7 牛吉山;小麦—族毛麦6VS/6AL易位系叶片cDNA文库构建及6VS/6AL易位系中抗白粉病相关基因的克隆[D];南京农业大学;2000年
8 王心宇;分子标记技术在小麦抗白粉病育种及指纹图谱分析中的应用研究[D];南京农业大学;2000年
9 温瑞;植物抗病毒基因工程研究 Ⅰ黄瓜花叶病毒复制酶基因表达载体构建和遗传转化 Ⅱ导入病毒基因的转基因植物释放的风险评估[D];浙江大学;2001年
10 戴良英;拟南芥COⅠ1互作基因的分离与鉴定[D];湖南农业大学;2001年
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1 张晓黎;番茄耐贮藏基因标记开发及辅助自交系选育[D];华中农业大学;2010年
2 李一星;番茄抗病毒相关基因的克隆与比较分析[D];浙江理工大学;2010年
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4 白建芳;百合双价抗病毒载体的构建及遗传转化的研究[D];大连理工大学;2010年
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1 张荃,王淑芳,赵彦修,赵可夫,张慧;HAL1基因转化番茄及耐盐转基因番茄的鉴定[J];生物工程学报;2001年06期
2 马庆虎,宋艳茹,魏玉凝,李跃东,侯林林;多聚半乳糖醛酸酶反义基因在转基因番茄中的表达[J];生物多样性;1995年01期
3 程英豪,吴光,王继伟,潘乃穟,陈章良;表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄抗黄瓜花叶病毒侵染[J];Acta Botanica Sinica;1997年01期
4 赵春晖,王荣,赵长生,王关林,田波;含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究[J];农业生物技术学报;2000年01期
5 韩美清,赵致,张渭,张万萍;Nr番茄及其野生亲本与转基因番茄的特性研究[J];贵州农业科学;2004年06期
6 胡亚忱,徐洪伟;转基因番茄的快繁研究[J];吉林师范大学学报(自然科学版);2004年01期
7 ;耐贮转基因番茄[J];福建农业科技;1996年01期
8 赵春晖,王荣,赵长生,王关林,田波;含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究[J];农业生物技术学报;2000年02期
9 陆瑞菊,黄剑华,王亦菲,孙月芳,周润梅;几丁质酶基因在番茄上的转化[J];上海农业学报;2000年04期
10 杉菜;;科学家培育出抗HIV和HBV的转基因番茄[J];国外医学情报;2006年08期
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1 刘建国;白国辉;田源;陈筑;白朋元;韩琦;管晓燕;张剑;;转基因番茄防龋疫苗中外源基因漂移的初步研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
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4 陆一鸣;颜宏利;贺艳;张毅;李彦舫;孙树汉;;乙型肝炎口服疫苗的转基因番茄植物模型的建立[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
5 蒙姣荣;陈保善;;番茄RNA病毒寄主因子基因ToTOM3的克隆与功能鉴定[A];2005年中南、西南植物病理学会和中国菌物学会联合学术年会论文集[C];2005年
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7 潘丽;张永光;王永录;方玉珍;蒋守田;王炜;孙元;吕建亮;谢庆阁;;口蹄疫病毒转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
8 陈琦;郝浩永;尉亚辉;;转HBsAg基因番茄的表型变异研究[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
9 凌均棨;蒋少云;;转基因番茄防龋疫苗的研究 V.携带pac基因A区的农杆菌载体转化番茄及检测[A];中华口腔医学会第二次全国会员代表大会暨第七次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];2001年
10 唐克轩;林娟;赵凌侠;任薇薇;李维;王国丰;林玲;孙小芬;;利用转基因番茄和生菜表达鲑鱼降钙素的研究[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
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1 向杰;是天使,不是魔鬼[N];科技日报;2004年
2 熊峰;转基因食品须贴签上市[N];大众科技报;2002年
3 龙飞;农业部宣布:种子抽测要查基因[N];农资导报;2010年
4 张宁;转基因生物:全方位走近生活[N];中国质量报;2000年
5 本报记者 吴金慧;基因技术拆了农药的台吗?[N];中国化工报;2001年
6 ;麦当劳食品含有基因改造成分?[N];深圳商报;2000年
7 王斌;转基因食品悄然走来[N];医药经济报;2002年
8 ;转基因食品安全吗[N];江苏农业科技报;2002年
9 记者 周其俊 王勇;餐桌上将有更多转基因食品[N];文汇报;2002年
10 钟农;抗乙肝西红柿开花结果[N];农民日报;2001年
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1 叶志彪;乙烯形成酶反义基因转化番茄及耐贮藏品种的选育[D];华中农业大学;2000年
2 尹涛;西瓜AGPL1启动子果实特异调控机理的研究及在番茄遗传转化中的应用[D];浙江大学;2008年
3 刘训言;番茄叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因(LeFAD7)的克隆及其在温度逆境下的功能分析[D];山东农业大学;2006年
4 唐前君;双生病毒外壳蛋白和传毒相关蛋白基因介导的病毒抗性研究[D];湖南农业大学;2010年
5 彭志强;霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄植物中表达的研究[D];第一军医大学;2001年
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7 田吉林;HAL1和merB基因增强转基因植物耐盐和抗汞能力研究[D];浙江大学;2003年
8 胡琼;dsRNA介导的烟草和番茄抗病毒基因工程研究[D];浙江大学;2010年
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1 白国辉;转基因番茄防龋疫苗安全性的初步研究[D];遵义医学院;2010年
2 梁彦君;转基因番茄外源基因检测方法研究[D];浙江理工大学;2013年
3 白朋元;防龋用转基因番茄和生菜中目的基因遗传传递的初步分析[D];遵义医学院;2011年
4 王仁厚;利用转基因番茄表达人类酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)[D];东北师范大学;2003年
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