收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

巴西橡胶树死皮相关基因Hbf的克隆及表达

傅湘辉  
【摘要】: 死皮给橡胶种植业带来了严重危害,研究和阐明橡胶死皮发生的分子机制,具有重 大的理论和实际意义。在前期工作中,我们对5个无性系的健康和死皮树胶乳和树皮进 行DDRT-PCR(Differential Display Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction),鉴 定了一个在健康树中表达活跃,在死皮树中表达受到严重抑制的差异cDNA片段Hb-1 (721bp)(其相应基因命名为Hbf)。经Genbank检索,Hb-1为新基因片段,Northern 杂交证实其为真实的差异带。 在此基础上,本研究进一步运用5’RACE方法扩增得到了Hbf cDNA。该cDNA共 1204个核苷酸,含有完整的阅读框架,编码310个氨基酸。包含一个45bp的5’非编 码区和一个229bp的3’非编码区。将cDNA序列和推导的氨基酸序列进行BLAST分 析,结果表明它与拟南芥的转录激活子F16M14.2具有较高的同源性。在氨基酸水平 上,其同源性为59%。同时,它与Ibbf、Mybltf、MybStl、Ibbfl、F16M14.2等 DNA结合蛋白具有相同的HTH DNA结合域。蛋白质结构域预测结果表明在全长氨基 酸序列中含有一个可能的N糖基化位点(~(160)NISP)、三个可能的cAMP/cGMP依赖性蛋 白激酶糖基化位点(~(120)KPTT、~(193)RRSS、~(216)KKSS)、一个可能的PKC磷酸化位点(~(167)TTR)、 9个可能的酷蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(~(30)TPEE、~(63)TVGD、~(79)SDIE、~(92)SSSD、~(128)SEQE、 ~(139)TEEE、~(196)SIHD、~(212)SPDE、~(218)SSPD)、5个可能的N—豆蔻基化位点(~(118)GGKRTT、 ~(135)GVPWTE、~(237)GMAKGL、~(251)GGGAAG、~(288)GTLPGY)、一个可能的胺基化位点 (~(118)GGKR)及一个可能的ATP/GTP结合位点(~(56)AAVIPGKT)。蛋白质定位信号分析 表明Hbf基因表达产物极有可能是一种核蛋白。 根据Hbf cDNA序列,设计一对特异引物,经PCR扩增得到了全长为1277bp的DNA 序列。序列分析表明,该DNA除包含有HbfcDNA编码区外,还含有一个344bp的内 含子。它是一个典型的核mRNA内含子,包含明显的5’端的供体剪切位点、3’ 端的受体剪切位点和分支点序列。 Southern杂交和酶切位点分析表明,Hbf为低拷贝基因,只有2个拷贝,且橡胶各 无性系及健康树与死皮树之间并不存在拷贝数的差别。 Northern杂交表明,Hbf基因在各无性系的健康树的表达远高于其在死皮树中的表 达;从无性系间进行比较,越耐死皮的无性系,其表达量越高;Hbf基因的表达在不同 组织中存在表达量的差别,树皮最高、乳管次之、叶片最低;Hbf基因在死皮树不同部 位的乳管中也存在着差异表达,即割线处表达量最低,阴刀处次之,而距离割线的较远 处(未发生死皮)表达量最高。 利用 GenomeW8lker的方法获得 Hbf基因的 5’前导序列,序列分析表明,它可能 包含启动子区域,并对其调控元件进行了分析。 用定向克隆方法把带有起始密始子的成熟Hbf基因插入pBllZI质粒,构建了Hbf 的植物表达载体pBIH。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 白俊杰,叶星,李英华,李新辉,简清,罗建仁;草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆及序列分析[J];水产学报;2001年01期
2 胡银岗;林凡云;王士强;何蓓如;;糜子抗旱节水相关基因PmMYB的克隆及表达分析[J];遗传;2008年03期
3 李先超;;极大节旋藻气囊蛋白基因gvpA克隆与序列分析[J];北京联合大学学报(自然科学版);2008年01期
4 赵伟;宿红艳;王磊;张宪省;;小麦TaCRC基因的克隆及表达分析[J];西北植物学报;2009年07期
5 庞慧;李莹;李密密;严琴琴;杭悦宇;孙小芹;;十字花科植物FAE1基因的克隆与功能验证[J];植物资源与环境学报;2013年01期
6 谢雍,蔡以欣,彭泽国,吴瑞;水稻组蛋白H3基因和1.5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和结构分析[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1987年02期
7 罗进贤,周桢林,李镇林,胡晋新;假单胞杆菌抗镉基因的克隆[J];环境科学学报;1988年04期
8 李顺成,庞有志;天然基因克隆的制备[J];洛阳农专学报;1994年02期
9 沈漫,王明庥,黄敏仁;植物抗寒机理研究进展[J];植物学通报;1997年02期
10 王涛,陆应麟;基因克隆的方法进展[J];生物技术通讯;1998年01期
11 陈昌杰,何蕴韶;人脑源性神经生长因子基因克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];四川解剖学杂志;1999年03期
12 杨吉成;面向21世纪,尽快开设基因工程高等教育课[J];生物学杂志;1999年02期
13 刘羽;赵传志;李长生;李翠;王兴军;;花生HIR基因的克隆表达与进化分析[J];山东农业科学;2014年05期
14 朱玉贤;差异筛选与基因克隆[J];科学中国人;2003年07期
15 夏家辉,张华莉,唐冬生,汤熙翔,戴和平,潘乾,龙志高,廖晓东;人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆[J];科学通报;2000年12期
16 王志坤,秦智伟,丁国华,周秀艳;植物抗病基因同源序列及其研究进展[J];生物技术;2004年04期
17 马现永,曹永长,舒鼎铭,毕英佐;肌肉生成抑制因子基因的克隆、表达及动物免疫实验[J];中国科学C辑:生命科学;2004年06期
18 张乐 ,彭友;全球首个植物磷高效利用基因在浙大克隆成功[J];今日科技;2005年08期
19 赵剑,韩云,朱应葆;小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α下游新靶基因PTG的克隆[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年06期
20 刘文荣;张木清;;抑制性消减杂交技术在植物基因克隆中的应用[J];亚热带农业研究;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张上隆;;类胡萝卜素合成的相关基因及其基因工程[A];张上隆果树学文选[C];2006年
2 毕延震;郑新民;乔宪凤;刘西梅;周荆荣;华文君;李莉;肖红卫;张立苹;华再东;魏庆信;;一种无缝基因克隆方法[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年
3 李安娜;徐荣艳;申晨;郭晓红;李多川;;嗜热毛壳菌热稳定酶的基因克隆、表达及分子改造[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
4 岳文;王冬梅;袁红丰;裴雪涛;;干细胞分化调控新基因的筛选及其功能研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
5 曾邦哲;吴超;;细胞发生的信号传导、基因表达与基因克隆[A];遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集[C];2007年
6 赵高翔;张欣;李蔚;董传甫;周天鸿;;CGSIV病毒STPK基因表达鉴定和功能分析[A];中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编(2009-2013)[C];2013年
7 张虎;杨吉成;盛伟华;缪竞诚;李丽娥;王金志;白艳艳;谢宇锋;;人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
8 扈东青;林强;戴瑞强;赵卫国;张英华;刘赵越;刘利;;桑树光合系统Ⅱ MpsbR基因的克隆和不同部位表达分析[A];江苏省遗传学会第八届会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2010年
9 李克;王琳;成军;张玲霞;段惠娟;陆荫英;杨继珍;刘妍;夏小兵;王刚;董菁;李莉;钟彦伟;洪源;陈菊梅;;用酵母双杂交技术筛选与克隆丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因6[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
10 施碧红;温建新;吴伟斌;施巧琴;吴松刚;;Bacillus subtilis FS321淀粉酶基因的克隆与表达[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 熊华淇;常染色体隐性遗传性多囊肾相关新基因的克隆及其特征[D];汕头大学;2002年
2 张高华;獐茅离子转运蛋白基因AlNHX1与AlHAK1的克隆与表达研究[D];大连理工大学;2008年
3 王学仁;担子菌毛头鬼伞的TMV抗性蛋白y3基因的分离、鉴定和表达[D];西北大学;2010年
4 吕鸿雁;枯草芽孢杆菌中甲硫氨酸氨基肽酶基因的克隆与功能研究[D];中国协和医科大学;2002年
5 苏伟;水稻程序性细胞死亡相关基因的克隆和功能分析[D];复旦大学;2006年
6 温建国;灰飞虱免疫相关基因及微管蛋白基因的克隆和分子鉴定[D];复旦大学;2004年
7 李梅章;人类新基因的分离和鉴定研究[D];中国协和医科大学;2000年
8 生书晶;何首乌芪合酶基因(FmSTS)的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
9 陈文;人成骨蛋白-1成熟肽基因的克隆和序列分析、5’端修饰及其在大肠杆菌中的表达[D];第四军医大学;1997年
10 王呈玉;短芒大麦抗逆性相关基因DREB1和CDPK的克隆与特性分析[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王秋雁;广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化、性质研究及基因克隆[D];广西医科大学;2001年
2 智庆文;SBE2B基因的克隆、表达载体的构建及水稻遗传转化体系的建立[D];四川农业大学;2002年
3 庞浩;未培养微生物纤维素酶基因的克隆、鉴定和表达[D];广西大学;2004年
4 张华磊;光诱导苹果果实着色相关基因的克隆和表达分析[D];山东农业大学;2009年
5 田甜;3α-HSD基因的克隆和表达[D];吉林大学;2007年
6 王乐媛;重组小鼠gAcrp30的基因克隆、表达及生物活性研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
7 穆丽;人细胞周期蛋白B1基因克隆及在大肠杆菌中的表达[D];吉林大学;2008年
8 徐颖;中华水韭铁超氧化物歧化酶基因的(IsFeSOD)克隆与分析[D];上海师范大学;2013年
9 林琳;真核蛋氨酸裂解酶基因克隆,鉴定及分析比较[D];昆明医学院;2009年
10 潘宁;奇异果甜蛋白thaumatin基因二价载体在玉米中的共表达及其在酵母中的表达[D];首都师范大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 汪敏华;成功克隆2.1万个功能基因[N];解放日报;2004年
2 张学全;克隆人类全长功能基因获突破[N];中国高新技术产业导报;2004年
3 本报实习记者 王新佳;基因:改变人类命运的新技术[N];中国高新技术产业导报;2001年
4 张汝金;发现37条人类新基因[N];解放军报;2003年
5 记者 谢军;SARS病毒基因克隆、蛋白质表达等取得最新进展[N];光明日报;2003年
6 本报实习记者 申音 记者 王旗;基因不是.com[N];中国经营报;2000年
7 本报记者 周立文 本报通讯员 丁学国;中国基因三个人物与一个事业[N];光明日报;2000年
8 记者 张学全;克隆人类全长功能基因获得重大进展[N];新华每日电讯;2004年
9 张武 本报记者 徐兰山;打造基因“王国”[N];科技日报;2003年
10 本报记者 吕媛;基因控制家蚕生男不生女[N];北京科技报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978