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《华南热带农业大学》 2002年
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抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究

王宇光  
【摘要】: 本研究的内容包括:一、在前人对抗菌肽CMIV研究的基础上,对N端和C端进行氨基酸保守变换,设计和合成了该基因,充分使用大肠杆菌偏爱的密码子,并将该基因5′端与硫氧还蛋白基因3′端融合,通过PTXFUS表达载体获得较高可溶性表达(在15%SDS-PAGE胶上可见明显的表达蛋白带)。由于硫氧还蛋白和抗菌肽之间设计了肠激酶(Enterokinase)切割位点和CNBr切割位点,通过对该表达的融合蛋白的切割,可得到目标抗菌肽CMIV突变体多肽分子。二、在以上研究的基础上,对CMIV抗菌肽的C端进行较大的改造,即将与肿瘤细胞过度表达的表皮生长因子受体(EGFR)具有高亲和性的因子多肽TGF_3通过疏水柔性接头连接在抗菌肽CMIV的C端,设计完整的基因,并在大肠杆菌中利用PTXFUS表达载体与硫氧还蛋白进行可溶性融合蛋白表达。三、对以上表达的融合蛋白进行初步纯化以及利用Enterokinase切割融合蛋白,并进行抗菌活性检测,结果表明所设计的CMIV突变体具有抗菌活性。以上研究的意义:1、初步解决了抗菌肽CMIV突变体在大肠杆菌中高效可溶性表达的问题,为进一步大量生产CMIV基因突变体打下基础;2、为进一步设计具有特异导向性的抗菌抗肿瘤CMIV突变体基因和表达以及以后进行动植物转化打下基础。
【学位授予单位】:华南热带农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q752

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李兵;王宇光;;抗菌肽CMIV在大肠杆菌中的表达与纯化[J];广西农业科学;2008年04期
【参考文献】
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【共引文献】
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10 温刘发;;抗微生物肽与氟苯尼考对断奶仔猪生产性能和腹泻频率的协同作用[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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