乙烯（利）对橡胶树胶乳中几丁质酶活性及基因表达的影响
【摘要】：
以巴西橡胶树为材料，用几丁质酶促进排胶的新理论为指导，对胶乳黄色体中的几丁质酶活性进行研究，发现乙烯(利)刺激对几丁质酶活性有重要影响。随后，研究了不同剂量(浓度)乙烯(利)、不同刺激时间对胶乳中几丁质酶活性变化的影响，及不同排胶特性品系橡胶树胶乳中几丁质酶活性差异。结果表明，不同剂量(浓度)乙烯(利)、不同刺激时间及不同品系橡胶树胶乳中几丁质酶活性的变化差异：乙烯(利)的有效刺激浓度范围内，随乙烯(利)浓度增加，几丁质酶活性增加；乙烯(利)持续刺激一段时间后，酶活性达到最大值；三种不同排胶特性品系(PR107、GT1、RRIM600)橡胶树在施用乙烯利刺激后胶乳中几丁质酶活性较未施用乙烯利刺激前均有所增加，其增加强度存在着品系差异，表现为：PR107＞GT1＞RRIM600。
为了探讨不同品系橡胶树胶乳中几丁质酶基因在表达水平上的差异，利用聚合酶链式反应(PCR)技术，克隆了橡胶树几丁质酶基因，命名为PGCH，序列测定的结果表明，与Evert Bokma(2001)发表的序列一致。Northern狭线杂交证实三个不同排胶特性品系：PR107、GT1、RRIM600的几丁质酶杂交信号强度表现为PR107＜GT1＜RRIM600，其结果与这三个品系的排胶特性相一致。而在施用乙烯利刺激后，它们的几丁质酶杂交信号强度的表现为：PR107＞GT1＞RRIM600。此刺激前后的变化趋势与酶活性测定的变化趋势相同。
【关键词】：巴西橡胶树 几丁质酶 狭线杂交 乙烯（利） 黄色体 【学位授予单位】：华南热带农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：S794.1
【目录】：
- 中文摘要5-6
- 前言及文献综述6-17
- 1． 橡胶产胶、排胶生理6-8
- 2． 堵塞现象及胶乳凝固机制的研究8-9
- 3． 乙烯利的刺激增产机理9-10
- 4． 植物几丁质酶研究综述10-11
- 5． 橡胶树几丁质酶研究状况11-15
- 6． 本研究的目的意义15-16
- 7． 技术路线16-17
- 第一部分： 橡胶树几丁质酶基因克隆及Northern狭线杂交17-34
- 1． 材料17
- 1．1 植物材料17
- 1．2 菌种17
- 1．3 生化试剂17
- 2． 方法17-28
- 2．1 橡胶树几丁质酶基因的克隆与测序17-25
- 2．1．1 橡胶树基因组DNA的提取17-19
- 2．1．2 几丁质酶基因PCR扩增19
- 2．1．3 PCR扩增产物的克隆及重组子筛选19-25
- 2．1．3．1 PCR产物的凝胶电泳观察19
- 2．1．3．2 PCR产物的回收19-20
- 2．1．3．3 目的片段的克隆20-25
- 2．1．3．3．1 PCR回收片断与片pGEM—T载体的连接20
- 2．1．3．3．2 感受态细胞的制备20-21
- 2．1．3．3．3 转化21
- 2．1．3．3．4 质粒DNA的微量提取21-22
- 2．1．3．3．5 重组体酶切鉴定22-23
- 2．1．3．3．6 重组子阳性克隆菌保存23
- 2．1．3．3．7 阳性重组质粒的大量提取23-25
- 2．1．4 DNA序列测定25
- 2．2 Northern狭线杂交25-28
- 2．2．1 橡胶树胶乳RNA提取25-26
- 2．2．2 Northern狭线杂交分析26-28
- 2．2．2．1 探针标记26-27
- 2．2．2．2 RNA样品标记27
- 2．2．2．3 预杂交及杂交27
- 2．2．2．4 洗膜与显色27-28
- 3． 结果与分析28-33
- 3．1 橡胶树胶乳几丁质酶基因的克隆及阳性重组子的筛选28-30
- 3．2 DNA序列测定30-32
- 3．3 胶乳RNA的提取32
- 3．4 Northern狭线杂交分析32-33
- 4． 讨论33-34
- 4．1 关于橡胶树胶乳RNA提取方法和取材33
- 4．2 Northern狭线杂交33-34
- 第二部分： 乙烯（利）刺激对几丁质酶活性影响的研究34-45
- 材料与材料的处理34-45
- 1． 材料34-35
- 2． 方法35-37
- 2．2．1 样品的采集35
- 2．2．2 几丁质酶活性的测定35-37
- 2．2．3 蛋白质含量测定37
- 2．2．4 数据处理37
- 3． 结果与分析37-43
- 3．1 N—乙酰氨基葡萄糖标准曲线及回归方程37
- 3．2 几丁质酶最适反应条件的确定37-38
- 3．3 相同剂量乙烯利不同刺激时间对橡胶树胶乳中几丁质酶活性变化的影响38-39
- 3．4 不同剂量乙烯利刺激橡胶树对几丁质酶活性的影响39-41
- 3．5 同一剂量乙烯利刺激不同品系橡胶树几丁质酶活性变化41-42
- 3．6 同一剂量乙烯利刺激不同割胶强度胶乳几丁质酶活性变化42-43
- 4． 讨论43-45
- 4．1 几丁质酶活性与胶乳产量的关系43-44
- 4．2 割胶对几丁质酶活性的影响44
- 4．3 不同品系橡胶树胶乳中几丁质酶活性、基因表达差异及与排胶的关系44-45
- 结束语45-46
- 结论46-47
- 图版47-51
- 参考文献51-58
- 英文摘要58-59
- 致谢59
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|
| 1 |
刘学敏,常稳,李大壮;烟草赤星病研究现状及存在问题[J];东北农业大学学报;2000年01期 |
| 2 |
杨若林,刘建云,吕欣,王新宇;白粉菌侵染对小麦叶片显微及超微结构的影响[J];西北植物学报;2001年02期 |
| 3 |
李碧鹰,贺伟;果蔬产后病害病原菌胞外酶的启动及其调控[J];河北林果研究;2005年02期 |
| 4 |
时焦,韩锦峰,徐宜民,Cooper J I,刘华山;转几丁质酶基因烟草酶活性及抗病性研究[J];华北农学报;2002年04期 |
| 5 |
王茅雁，邵世勤，张建华，耿庆汉;水分胁迫对玉米保护酶系活力及膜系统结构的影响[J];华北农学报;1995年02期 |
| 6 |
杨虹琦,罗泽民;菜豆种子几丁质酶的分离纯化及性质研究[J];湖南农业大学学报;1998年03期 |
| 7 |
何道一;段培树;陈丽萍;;RPW2表达载体构建及对烟草的遗传转化[J];核农学报;2009年04期 |
| 8 |
郭生云,何川生,张汉尧,许美玲,何川生,许介眉;用RAPD技术鉴定烤烟抗赤星病基因连锁标记[J];海南师范学院学报(自然科学版);2001年02期 |
| 9 |
韩宝芹,余长缨,刘万顺,楚晓珉;几丁质酶研究现状及展望[J];中国海洋药物;2001年05期 |
| 10 |
马贵龙,高洁,张佳环,杨信东,华致甫;不同生育期、氮肥水平和品种对烟草赤星病抗性组分的影响[J];吉林农业大学学报;2002年02期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
林毅,陈金辉,黄志鹏;芽孢杆菌几丁质酶及其在植物病虫害生物防治中的应用[J];福建农业科技;1998年S1期 |
| 2 |
张洁,蔡敬民,吴克,金胜先,潘仁瑞,樊美珍;球孢白僵菌Bb174固态发酵产几丁质酶产酶及酶学特征研究[J];应用生态学报;2004年05期 |
| 3 |
李华,刘开启,王革;微生物几丁质酶在植物病害生物防治中的应用[J];仲恺农业技术学院学报;2003年01期 |
| 4 |
戴富明,徐同;农杆菌介导木霉几丁质酶基因转化拟南芥及其T_1代对油菜菌核病抗性提高[J];上海交通大学学报(农业科学版);2005年01期 |
| 5 |
A.Verloop;C.D.Ferrell;陈宗懋;;苯甲酰基苯脲类——一类新的干扰几丁质沉积的杀幼虫剂[J];世界农药;1979年04期 |
| 6 |
江振莹;;日粮中添加几丁质、葡糖胺和纤维素对鱼生长的影响[J];饲料广角;1989年02期 |
| 7 |
张学昆,李加纳,唐章林,谌利,陈云坪,陈洪源,郭益红;油菜几丁质酶的特点及其与抗菌核病的关系[J];西南农业大学学报;2001年03期 |
| 8 |
杨合同,黄玉杰,郭勇,李纪顺;木霉菌的几丁质酶与植病生防[J];山东科学;2003年01期 |
| 9 |
杨虹琦,罗泽民;菜豆种子几丁质酶的分离纯化及性质研究[J];湖南农业大学学报;1998年03期 |
| 10 |
黎定军,罗宽;抗源蛋白质在植物基因工程中的应用[J];世界农业;2000年06期 |
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