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《华南热带农业大学》 2004年
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香菇GPD、RAS启动子和细胞色素P450基因的克隆

于晓玲  
【摘要】:香菇是我国食用菌产业中的支柱产品,占食用菌总产量的三分之一,种植香菇是山区致富奔小康的重要途径。香菇为优良食用菌,以香味鲜美而著称,为珍馐良药。香菇多糖除对疾病有特殊的治疗效果外,它的作用往往是综合的,它们都有滋补强化、扶正固本、抗衰老的作用,是一种天然补品。为了能使高品质的香菇品种得到产业化的生产,其转基因技术研究显得尤其重要。本研究的主要目的是分离鉴定适用于香菇转基因得高效表达启动子,为建立香菇外源基因表达系统提供顺式元件。 以香菇L26基因组DNA为模板,根据以往报道的RAS、GPD启动子相关序列设计引物,利用PCR方法克隆了RAS、GPD1和GPD2三个香菇启动子片断。DNA序列测定结果表明,RAS为715bp,GPD1为1056bp,GPD2为613bp。BLASTn搜索结果表明,RAS序列与以往报道的ras启动子序列同源性很好,达92%;GPD1与报道gLeGPD基因同源性达96%;GPD2与报道gLeGPD gene同源性达97%。采用Promoter Scan和PlantCARE软件对序列进行分析,结果表明序列的正负链各有一个启动子区,含有TATA-box,CAAT-box,G-box,GC-motif,Sp1-box,CT rich-motif等顺式作用元件。采用Tfsitescan service软件分析克隆的启动子片断,结果表明,该片断含有多个转录因子如GCR1,GCN4,AFT1,nit2,GF1等的结合位点。 将启动子的三个片段分别与gus报道基因和nos终止子连接,构建成真菌表达载体pRAS、pGPD1和pGPD2。通过原生质体电击转化的方法将三个表达载体分别转化到草菇菌丝的原生质体中,筛选出的转化子GUS活性表明,三个启动子片段都有启动报告基因在草菇菌丝中表达的功能,其启动活性比较结果表明,RAS启动活性最强。 细胞色素P450酶系在生物体中具有重要的功能——对许多内源性和外源性的化学物质尤其是对环境有害化学物质存在氧化代谢作用,而受到广泛 平南必命未六大李·硕士研宪吸牟六俗灰 的重视。它的广泛分布、多样的结构、复杂的功能及其基因的多层次调控可 以说是其重要性的体现。为使香菇细胞色素P450基因可以很好的进行体外表 达或基因工程生产此酶,我们以香菇L26基因组DNA为模板,设计引物, 利用PCR技术克隆香菇细胞色素P450基因,得到一个片断一A126序列长度 为93sbp,其有一段(448bp)序列与报道的香菇Le.e即1 gene for eytoehrome P4501同源性达98%以上。BLASTx搜索结果表明,A126序列预测氨基酸序 列与以报道香菇eytoehrome p45o 2 Le.CYPZ和eytoehrome p45ol同源性都能 达60%。基本上可以确定A126序列就是香菇细胞色素P450基因全长序列的 一部分。
【学位授予单位】:华南热带农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S646.12

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李厚德;“蘑菇皇后”──香菇[J];安徽林业;1995年01期
2 刘复权,张艳文,许智宏;烟草NFL1基因启动子区的克隆和初步的功能分析[J];北京大学学报(自然科学版);2000年02期
3 刘春如;香菇的分布概况及生物学特性[J];中国林副特产;2001年04期
4 刘春如,易诚;香菇的营养价值和药用价值[J];中国林副特产;2002年01期
5 夏伟;细胞色素P450的研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2000年01期
6 鞠美华;细胞色素P450同工酶在外源物代谢中的作用[J];国外医学.药学分册;1998年04期
7 刘宛,李培军,周启星,许华夏,孙铁珩,张春桂;植物细胞色素P450酶系的研究进展及其与外来物质的关系[J];环境污染治理技术与设备;2001年05期
8 李秀红,陈永征,赵保章;前景诱人的香菇生产[J];河南科技;1998年04期
9 王立东,周琦,于国强;食管固有膜乳头及其乳头区细胞增生和嗜酸性粒细胞浸润在食管癌变中的意义[J];河南医科大学学报;1995年02期
10 王本泉;食用山珍——香菇[J];江苏绿化;1997年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陆敦,印木泉;细胞色素P450酶、谷胱甘肽转移酶多态性及其与肿瘤的关系[J];癌变.畸变.突变;2001年02期
2 谢雪迎;任鹏飞;朱常香;宫志远;;24个香菇菌株的鉴定与分类研究[J];山东农业科学;2009年12期
3 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
4 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
5 王凤德;叶帅;王保;李利斌;王淑芬;朱正歌;高建伟;;小立碗藓细胞色素P450基因CYP73A49的克隆与功能分析[J];山东农业科学;2011年09期
6 吴志平;植物转基因方法在桑树上的应用[J];安徽农学通报;2003年04期
7 张宝琼;范眸天;屈云慧;于丽霞;李涵;;利用卡那霉素筛选非洲菊转基因植株的技术研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
8 夏珣;闫明旭;李名扬;眭顺照;;Metallothionein克隆载体及表达载体的构建及转化矮牵牛的初步研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
9 张霞;刘敦菊;徐立;眭顺照;李名扬;;白兰叶挥发油提取方法及工艺条件研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
10 陈明;陈文静;;几种微生物表达系统的比较[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 李欣龙;张敏;段霞瑜;周益林;;丝状真菌遗传转化系统的研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
3 励建荣;胡子豪;蒋跃明;;鲜香菇中甲醛含量检测的样品前处理方法改进[A];全国农产品质量控制与溯源技术交流研讨会论文集[C];2010年
4 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
5 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
6 齐靖;申连英;毛永民;曹柳青;兰海波;陈亮;;枣转基因研究前景展望[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
7 马艳芝;张玉星;;梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
8 卢丽丽;张如佳;王阳;王美南;井金学;康振生;;小麦条锈菌白化菌系的遗传转化[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 厉以强;胡冠九;张祥志;戢启宏;李兆利;陈海刚;孔志明;;生物标志物测试致突变量评估水源风险研究及展望[A];中国环境保护优秀论文精选[C];2006年
10 程艳;陈会明;张静;于文莲;周新;宋乃宁;王立峰;李晞;李蕾;孙鑫;王琤;;水相环境评估常用生物标志物应用[A];中国环境科学学会2009年学术年会论文集(第一卷)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭维兵;四种新型18β-甘草次酸和齐墩果酸修饰物成药性的初步评价[D];中国海洋大学;2010年
2 苗晶晶;苯并[a]芘对栉孔扇贝分子毒理学机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
4 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
5 王佳;人参多糖抗疲劳和抗抑郁作用及其机制的研究[D];东北师范大学;2010年
6 田新惠;彩色棉GhF3'H与GhF3'5'H基因的克隆、鉴定及四种类黄酮物质的HPLC分析[D];石河子大学;2010年
7 姜天甲;主要食用菌采后品质劣变机理及调控技术研究[D];浙江大学;2010年
8 王俊峰;川西獐牙菜体细胞杂交及其环烯醚萜类化合物合成相关基因香叶醇-10羟化酶的克隆和功能验证[D];山东大学;2010年
9 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
10 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 潘慧;杏鲍菇优良杂交子的初步选育[D];华中农业大学;2010年
2 李海峰;香菇子实体发育相关基因的克隆及分析[D];华中农业大学;2010年
3 吴关威;香菇柄中滋味成分释放研究及香菇精的研制[D];华中农业大学;2010年
4 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
5 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
6 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
7 袁静静;CYP3AP1-44G>A多态性对芬太尼术后静脉镇痛效应的影响[D];郑州大学;2010年
8 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
9 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
10 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘振岳,邢宏燕,马云川;紫孢侧耳平菇原生质体再生无性系的变异性研究[J];河北农业大学学报;1994年01期
2 鞠美华;细胞色素P450同工酶在外源物代谢中的作用[J];国外医学.药学分册;1998年04期
3 唐促跃,马谭庚,刘毓谷;溴氰菊酯对大鼠肝微粒体酶的影响[J];环境科学学报;1987年02期
4 杨娟,吴谋成,张声华;香菇子实体蛋白多糖Le-Ⅲ的分离、纯化及其性质研究[J];华中农业大学学报;1999年02期
5 周先锦,范云六;水稻种子贮存蛋白Prolamin 4a基因的组织特异性表达调控[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1992年11期
6 赵军,范云六;水稻种子醇溶蛋白4a基因的表达受串联复合启动子调控[J];中国科学C辑:生命科学;1996年02期
7 唐国敏;;丝状真菌基因表达系统研究进展[J];真菌学报;1992年02期
8 翟启慧;昆虫分子生物学的一些进展:杀虫剂抗性的分子基础[J];昆虫学报;1995年04期
9 唐振华;昆虫中的细胞色素P-450及其特性[J];昆虫知识;1990年01期
10 黄俊勇,冷欣夫;细胞色素P-450酶系的研究进展[J];昆虫知识;1991年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐家林;香菇下脚料的综合利用[J];农民致富之友;1999年02期
2 ;简讯[J];微生物学通报;1984年03期
3 倪宗耀;;香菇与肝病防治[J];食用菌;1986年01期
4 本刊通讯员;;热水浸块香菇可增产[J];中国食用菌;1988年05期
5 龚胜萍;汪昭月;潘迎捷;;丝瓜棚下种香菇[J];上海蔬菜;1992年02期
6 贾身茂,周伏忠;河南香菇的营养成份[J];中国食用菌;1994年01期
7 陈德明;香菇床式脱袋栽培技术[J];中国食用菌;1994年03期
8 刘叶高 ,刘万震 ,吴秀和;野草栽培香菇技术[J];安徽农业;1994年07期
9 王少鸥,赵海凉,洪继仁,陆雪琴;香菇和美味菇松中糖的HPLC测定[J];上海农业科技;1995年03期
10 杨虹;香菇的生料栽培[J];农机具之友;1995年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘子卓;张明立;梅中会;;香菇新品种的培育和保藏探讨[A];河南省植保学会第九次、河南省昆虫学会第八次、河南省植病学会第三次会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2009年
2 唐忠盛;柴向华;吴克刚;罗辑;;酶法提取香菇可溶性含氮化合物因素的探讨[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
3 余昌霞;曹晖;;翘鳞香菇交配型的研究[A];第九届全国食用菌学术研讨会摘要集[C];2010年
4 曹玉谦;李长莉;陈正芬;;香菇布勒杂交育种研究试验初报[A];第九届全国食用菌学术研讨会论文集[C];2010年
5 李秀云;;浅谈岫岩地区夏季香菇高产栽培技术[A];辽宁省农林业无害化生产技术研讨会论文集[C];2011年
6 宋文华;陈明杰;宋春艳;张美彦;陈祥;林楠;鲍大鹏;;一个香菇单核体的B位点结构的分子解析[A];第九届全国食用菌学术研讨会摘要集[C];2010年
7 姜付喜;刘玉波;范文平;;利用柞树枝栽培高产优质香菇的开发[A];全国蚕业资源综合利用会议论文集[C];2000年
8 杨春华;;香菇浑身宝 保健离不了,要想栽培好 转色最重要[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
9 丁荣辉;;中国香菇面对逆境应取科学对策的探讨[A];全国第6届食用菌学术研讨会论文集[C];2001年
10 鲍大鹏;宋文华;陈明杰;宋春艳;张美彦;陈祥;林楠;;香菇交配型位点的分子遗传学结构研究[A];海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药用菌学术研讨会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 程洪花;香菇春季巧补水[N];河南科技报;2009年
2 磐安县委副书记 黄福良;磐安香菇逆市飘红暗藏隐忧[N];金华日报;2009年
3 张士罡 汪尚法;香菇秋季高产栽培要点[N];云南科技报;2009年
4 记者 沈明堂 通讯员 张谨慎;“淮上香菇”生产渐成规模[N];蚌埠日报;2010年
5 李慎原 初延慧 记者 吴连祥;从种人参到种香菇[N];吉林农村报;2007年
6 通讯员 姚德延;为残疾人“量身定制”脱贫门路[N];丽水日报;2008年
7 郑晓;日本用杉材培植香菇[N];农民日报;2004年
8 杨志民;明义乡:大棚香菇把家发[N];保定日报;2006年
9 张研;香菇大块高效栽培技术[N];云南科技报;2009年
10 张时长 汪尚法;桑树枝条木屑高效栽培香菇[N];湖北科技报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑明奇;棉铃虫细胞色素P450的诱导、纯化及其性质研究[D];中国农业大学;2003年
2 王玲平;十字花科植物CYP86MF同源基因的结构、功能及进化关系的研究[D];浙江大学;2004年
3 程水明;香菇交配型偏分离现象及其遗传基础研究[D];华中农业大学;2005年
4 黄慧艳;Lentinula edodes降解木质纤维素与羟自由基清除能力研究[D];华中科技大学;2007年
5 诸葛坚;细胞色素P450 2D6和2C18的可变剪接研究[D];浙江大学;2003年
6 史丽;人类CYP2A13基因SNPs及其与喉、咽、鼻恶性肿瘤危险性的相关性研究[D];山东大学;2005年
7 马彩霞;棉铃虫细胞色素P450基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2005年
8 黄剑;小菜蛾抗阿维菌素品系细胞色素P450的研究[D];西北农林科技大学;2005年
9 胡红芳;恩诺沙星对鸡细胞色素P450酶系的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
10 代方国;基于大鼠肝脏微粒体细胞色素P450酶系的甘遂和甘草配伍作用研究[D];第一军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于晓玲;香菇GPD、RAS启动子和细胞色素P450基因的克隆[D];华南热带农业大学;2004年
2 葛亮;香菇实时分级生产线的研究[D];华中农业大学;2012年
3 夏苗;香菇内源性甲醛含量的消长规律及采后调控研究[D];浙江工商大学;2012年
4 陈艳勤;保康香菇包装设计的研究[D];中南民族大学;2012年
5 魏倩婷;香菇酚类物质的提取及功能学特性的研究[D];福建农林大学;2011年
6 陈祥明;香菇、茶叶等植物源性辐照产品检测技术研究[D];福建农林大学;2010年
7 段东霞;He-Ne激光诱变香菇原生质体选育速生高产菌株及香菇液体深层发酵工艺研究[D];西北大学;2002年
8 李晓;香菇优良杂交新菌株选育的研究[D];吉林农业大学;2002年
9 孙勇;中国香菇自然群体遗传多样性的RAPD分析[D];华中农业大学;2001年
10 王翔;香菇杂交子生物学特性和基因差异表达类型的初步研究[D];华中农业大学;2012年
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