香蕉果实中ABA相关cDNA克隆的筛选及其功能的初步分析

【摘要】：本研究利用96孔板和一对特异的引物，逐级从cDNA文库中筛选目标克隆，最终获得目标cDNA片段。与同位素杂交筛选法相比，该方法具有快速、简单、经济等优点，且无需使用同位素。本研究就是利用这一方法从香蕉cDNA文库中筛选出二条cDNA序列，其中一条序列是Mafra1，另一条序列是Maasr1。 在NCBI上的BLASTn和BLASTx比对结果表明Mafra1的功能尚不清楚，可能为一个新的基因；保守结构域分析结果表明Mafra1可能含有一个Exonuclease保守结构域；用OMIGA软件分析表明该片断包含了一个完整的ORF；用PROPSEARCH在线分析的结果表明Mafra1的编码产物可能与人的骨形态发生蛋白7前体(BMP-7)、分泌型糖蛋白前体(SGP)、外壳蛋白F(GPF)等基因具有较高同源。用Maasr1作BLASTn比对发现它可能与水稻ABA和胁迫诱导蛋白(Asr1)的mRNA有86％的同源，与甘蔗干旱胁迫蛋白(SoDip22)的mRNA有84％的同源，与百合花A23基因的mRNA有86％的同源，与野黑杏脱落胁迫成熟蛋白的mRNA有82％的同源；并且用GENSCAN_predicted进行在线分析，结果表明Maasr1包含了一个完整的ORF。 Southern杂交结果表明Maasr1在香蕉基因组中为双拷贝基因。Northern杂交结果表明：在采后香蕉果实中，随着时间的往后推移，Maasr1的表达量逐渐升高，这一变化与跃变以前的乙烯变化、果实软化的进程一致，所以Maasr1可能与香蕉果实的成熟相关，并且在果实成熟软化过程中可能是一个上调基因。