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伤害对巴西橡胶树胶乳中磷脂酶A_2的影响

邓治  
【摘要】:磷脂酶A_2(PLA_2)和脂氧合酶(LOX)在植物细胞代谢和信号转导中可能起重要作用。本课题通过研究胶乳C-乳清中的PLA_2的生理生化性质及伤害(割胶和乙烯)对其活性影响,伤害与PLA_2和LOX关系,以及它们与橡胶树无性系产胶特性的关系,探讨PLA_2做为信号分子对伤害和乙烯刺激应答的关系。 本研究以巴西橡胶树(Hevea brasilensis)为材料,以伤害信号转导的理论为指导,对胶乳中磷脂酶A_2进行研究。发现磷脂酶A_2活性与胶乳产量关系不大,与文献报道的该酶在离体条件下是橡胶合成的抑制因子并不一致。分析了幼树在伤害(割胶为机械伤害)后胶乳磷脂酶A_2变化的情况,以及不同剂量乙烯刺激(乙烯为化学伤害)、不同乙烯(利)刺激时间对不同排胶特性品系胶乳中磷脂酶A_2和脂氧合酶的影响,发现伤害和乙烯(利)刺激对橡胶树胶乳中磷脂酶A_2活性有诱导效应,但诱导效率与乙烯刺激浓度不呈线性相关。而脂氧合酶与磷脂酶A_2的活性并变化不一致,说明脂氧合酶活性可能还受到其它很多因素的调节,或者它的底物还有其它来源。在上述基础上,对胶乳中磷脂酶A_2进行了分离纯化与部分特性鉴定,并对磷脂酶A_2的调节机理进行了初步探讨。 为了探讨伤害对幼树及不同乙烯(利)刺激对胶乳中磷脂酶A_2基因在表达水平上的差异,利用RT-PCR技术,克隆了橡胶树胶乳磷脂酶A_2基因,经DNA序列测定后发现与Kostyal D.A.(1998)克隆的具有磷脂酶A_2活性的类patatin蛋白Hev b7的cDNA序列一致。以此序列作为探针对乙烯刺激下胶乳中磷脂酶A_2进行Norther斑点杂交。热研7-33-97和PR107均表现为乙烯刺激下磷脂酶A_2表达量大于无乙烯刺激,且热研7-33-97中磷脂酶A_2表达量大于PR107。而幼树伤害实验中,磷脂酶A_2的杂交信号强度表现为:第一刀乙烯刺激>第一刀未用乙烯刺激>初割刀。这些结果与酶活性测定的变化一致。


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