伤害对巴西橡胶树胶乳中磷脂酶A_2的影响
【摘要】：磷脂酶A_2(PLA_2)和脂氧合酶(LOX)在植物细胞代谢和信号转导中可能起重要作用。本课题通过研究胶乳C-乳清中的PLA_2的生理生化性质及伤害(割胶和乙烯)对其活性影响，伤害与PLA_2和LOX关系，以及它们与橡胶树无性系产胶特性的关系，探讨PLA_2做为信号分子对伤害和乙烯刺激应答的关系。
本研究以巴西橡胶树(Hevea brasilensis)为材料，以伤害信号转导的理论为指导，对胶乳中磷脂酶A_2进行研究。发现磷脂酶A_2活性与胶乳产量关系不大，与文献报道的该酶在离体条件下是橡胶合成的抑制因子并不一致。分析了幼树在伤害(割胶为机械伤害)后胶乳磷脂酶A_2变化的情况，以及不同剂量乙烯刺激(乙烯为化学伤害)、不同乙烯(利)刺激时间对不同排胶特性品系胶乳中磷脂酶A_2和脂氧合酶的影响，发现伤害和乙烯(利)刺激对橡胶树胶乳中磷脂酶A_2活性有诱导效应，但诱导效率与乙烯刺激浓度不呈线性相关。而脂氧合酶与磷脂酶A_2的活性并变化不一致，说明脂氧合酶活性可能还受到其它很多因素的调节，或者它的底物还有其它来源。在上述基础上，对胶乳中磷脂酶A_2进行了分离纯化与部分特性鉴定，并对磷脂酶A_2的调节机理进行了初步探讨。
为了探讨伤害对幼树及不同乙烯(利)刺激对胶乳中磷脂酶A_2基因在表达水平上的差异，利用RT-PCR技术，克隆了橡胶树胶乳磷脂酶A_2基因，经DNA序列测定后发现与Kostyal D．A．(1998)克隆的具有磷脂酶A_2活性的类patatin蛋白Hev b7的cDNA序列一致。以此序列作为探针对乙烯刺激下胶乳中磷脂酶A_2进行Norther斑点杂交。热研7-33-97和PR107均表现为乙烯刺激下磷脂酶A_2表达量大于无乙烯刺激，且热研7-33-97中磷脂酶A_2表达量大于PR107。而幼树伤害实验中，磷脂酶A_2的杂交信号强度表现为：第一刀乙烯刺激＞第一刀未用乙烯刺激＞初割刀。这些结果与酶活性测定的变化一致。
【关键词】：巴西橡胶树 伤害 乙烯(利) 磷脂酶A_2 脂氧合酶 信号转导 【学位授予单位】：华南热带农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：S794.1
【目录】：
- 摘要6-7
- Abstract7-9
- 引言9-28
- 1 磷脂酶A_2研究概况9-17
- 1.1 磷脂酶A_2的分类、分布及分子特性9-10
- 1.2 磷脂酶A_2的催化机制及活化、调控10-13
- 1.3 磷脂酶A_2的功能13-16
- 1.4 磷脂酶A_2分子生物学研究概况16-17
- 2 橡胶树胶乳中的磷脂酶A_2的研究概况17-21
- 2.1 橡胶树胶乳中磷脂酶A_2的性质17-18
- 2.2 橡胶树胶乳中磷脂酶A_2的功能18-21
- 3 与磷脂酶A_2密切相关的脂氧合酶21-25
- 3.1 植物中磷脂酶A_2:脂氧合酶的的关系21-22
- 3.2 脂氧合酶简介22-23
- 3.3 脂氧合酶的生理学功能23-25
- 4 橡胶树中的脂氧合酶25-26
- 5 研究目的意义26-27
- 6 技术路线27-28
- 第一章28-35
- 1 材料与方法28-30
- 1.1 实验材料及处理28
- 1.2 实验方法28-30
- 2 结果与分析30-35
- 2.1 伤害及乙烯利刺激对橡胶树幼树胶乳中磷脂酶A_2的影响30
- 2.2 测定相同乙烯利刺激不同时间对同一品系橡胶树胶乳中磷脂酶A_2和脂氧合酶的影响30-31
- 2.3 不同乙烯气体剂量刺激对不同品系橡胶树胶乳中磷脂酶A_2及产量的影响31-33
- 2.4 不同乙烯气体剂量刺激对不同品系橡胶树胶乳中脂氧合酶的影响33-35
- 第二章35-42
- 1 实验材料及处理35
- 1.1 样品的采集35
- 1.2 粗酶液C-乳清的获得35
- 2 实验方法35-37
- 2.1 酶的分离纯化35-36
- 2.2 电泳鉴定36
- 2.3 酶活性的测定36-37
- 2.4 蛋白质含量测定37
- 2.5 测定不同浓度的钙离子及不同pH值对PLA_2活性的影响、测定不同稀土离子浓度对PLA_2活性的影响及不同浓度钙离子存在下稀土离子对PLA_2活性的影响37
- 3 结果与分析37-42
- 3.1 对硝基苯酚标准曲线37
- 3.2 酶的分离纯化37-38
- 3.3 电泳结果38-39
- 3.4 纯化PLA_2的理化性质研究结果39-42
- 第三章42-55
- 1 材料42
- 1.1 实验材料42
- 1.2 菌种42
- 1.3 生化试剂42
- 2 实验方法42-51
- 2.1 橡胶树胶乳总RNA的提取42-43
- 2.2 RT-PCR43-45
- 2.3 PCR扩增产物的回收45
- 2.4 目的片段的克隆45-49
- 2.5 DNA序列分析49
- 2.6 Northern斑点杂交49-51
- 3 结果与分析51-55
- 3.1 胶乳总RNA的提取51-52
- 3.2 橡胶树胶乳磷脂A_2基因的克隆及阳性重组子的筛选52-53
- 3.3 DNA序列测定53-54
- 3.4 Northern斑点杂交54-55
- 结论55-56
- 讨论56-60
- 附图60-63
- 缩略词表63-64
- 参考文献64-74
- 致谢74-75
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|
| 1 |
曹慧,王永章,杜俊杰,兰彦平;脂氧合酶研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2001年02期 |
| 2 |
范衡宇,佟超,孙青原;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的研究进展[J];动物学杂志;2002年05期 |
| 3 |
陈晶,李正国;脂氧合酶在果实成熟衰老中的作用[J];广州食品工业科技;2002年01期 |
| 4 |
李伟国,卢振伟,赵大庆;稀土及其配合物对蛇毒磷脂酶A_2活性的影响[J];化学研究;2002年01期 |
| 5 |
曾日中,白先权,黎瑜,谭海燕,郝秉中,吴继林;外源茉莉酸诱导巴西橡胶树乳管分化的酶学研究(Ι)[J];热带作物学报;2001年03期 |
| 6 |
刘小龙,潘华,杨冠珍,吴祥甫,周元聪,蔡明德;江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2基因的表达[J];生物化学与生物物理学报;1998年04期 |
| 7 |
李伟国,赵大庆,倪嘉缵;一种钙/钙调蛋白依赖性的蛇毒磷脂酶A_2[J];应用化学;2001年09期 |
| 8 |
陈昆松,张上隆;脂氧合酶与果实的成熟衰老——文献综述[J];园艺学报;1998年04期 |
| 9 |
胡勤海,叶兆杰;稀土元素的植物生理效应[J];植物生理学通讯;1996年04期 |
| 10 |
宋平,夏凯,曹显祖;茉莉酸类化合物结构与活性之间的关系及参与茉莉酸生物合成的酶[J];植物生理学通讯;2002年01期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
杨素平;;稀土——在蔬菜上的应用[J];河北农业科技;1990年10期 |
| 2 |
邝炎华,邓志群;应用~(141)Ce示踪研究水稻对铈的吸收和分配规律[J];环境科学;1981年01期 |
| 3 |
解惠光;于中和;;稀土元素对春小麦的增产效果及生理效应的研究[J];黑龙江农业科学;1985年01期 |
| 4 |
生吉萍,罗云波,申琳;转ACS番茄采后脂质过氧化相关酶研究初报[J];中国农业大学学报;1999年01期 |
| 5 |
孙明忠,丁兰,赵大庆,倪嘉缵;长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的分离和初步表征[J];生物化学与生物物理学报;1999年01期 |
| 6 |
李新民，倪嘉缵，王平原，陈建文，黄芬;稀土对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活性的影响[J];生物化学杂志;1995年03期 |
| 7 |
解惠光;陈丰民;;稀土在甜菜上的施用效果与技术[J];甜菜糖业;1984年02期 |
| 8 |
戚天庆,刘普灵,宋才炽,汪夕彬;农作物中稀土元素的吸收、输送及分布[J];中国稀土学报;1984年01期 |
| 9 |
王兰仙,徐仲,吴相钰,唐任寰;稀土元素对固氮鱼腥藻光合作用和固氮作用的影响[J];中国稀土学报;1985年03期 |
| 10 |
杨家朴,张淑媛;稀土元素对提高小麦抗逆性的初步研究[J];中国稀土学报;1986年04期 |
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