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《华南热带农业大学》 2005年
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橡胶树遗传转化的研究

苏文潘  
【摘要】:巴西橡胶树是重要的经济树种,其独特的乳管结构和生产期长的特性,有可能发展成为一个高效、低成本的“植物生物反应器”,潜藏着巨大的商业开发价值。建立稳定、高效的橡胶树遗传转化体系,是将橡胶树发展成为“植物生物反应器”的关键步骤。因此,开展橡胶树遗传转化体系的研究具有重要的理论意义和巨大的应用前景。 本研究在综述橡胶树遗传转化体系、胚胎发生相关基因研究的基础上,以巴西橡胶树海垦2、热研88-13、热研7-33-97的花药为外植体,对愈伤组织的诱导条件、影响遗传转化的可能因素等进行了探讨,对利用胚胎发生相关基因提高橡胶树遗传转化效率的可能性等进行了研究,初步试验结果如下: 1、对以海垦2、热研88-13、热研7-33-97的花药为外植体诱导愈伤组织的最适变温温度和ABA浓度进行了研究,发现白天26℃、晚上25℃的变温、ABA为0.25mg/L时能够诱导出较高质量的花药愈伤组织。 2、以农杆菌浸染后愈伤组织的褐化程度为指标,发现最适于转化的愈伤组织为花药接种后25天左右,培养基的最适超纯琼脂粉为3g/L。通常使用的筛选抗生素Kan并不适合用于橡胶树花药愈伤组织转化的筛选。 3、根据文献报道的序列,从拟南芥基因组中成功克隆了胎胚发生关键基因PEI1基因的编码序列,构建了植物表达载体pBIP。将含有相应基因的植物表达载体pBIP(PEI基因)、pBIN(BnBBM1基因)和pBI121(GUS基因)直接导入农杆菌后,以接种后25天左右的花药愈伤组织为外植体,分别开展了橡胶树遗传转化的研究。 4、对抗性植株叶片和根部的组织化学检测结果表明,我们获得了1株Gus基因转基因植株;分子检测结果表明,我们获得了1株BnBBM1转基因植株,没有获得PEI1基因转化植株。这表明,在本试验中,胚胎发生相关基因BnBBM1和PEI1对遗传转化效率没有明显的影响。
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