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《华南热带农业大学》 2005年
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红树耐盐相关蛋白的分离和MALDI-TOF质谱鉴定

彭存智  
【摘要】:本项目的目的就是希望能充分利用海南特有而丰富的红树林资源,从中选取理想的品种作为实验材料,迅速而又高效的分离和鉴定红树林植物耐盐相关蛋白。项目的成功,使海南丰富的红树林资源发挥出重要的种质资源库作用,为植物耐盐性的研究和应用开辟了一条新的道路。 本项目通过双向电泳技术分离在500 mmol/L NaCl溶液处理12天后表达量增加的蛋白质,再经过MALDI-TOF质谱鉴定和蛋白质数据库,检索同源的蛋白质,从而得到该蛋白的氨基酸序列。 通过对双向电泳图谱的初步观察可以看到,蛋白质主要集中在等电点5—8和分子量28KD—66KD之间。接着将蛋白质双向电泳图输入双向电泳分析软件进行分析,根据凝胶报告,红树幼苗叶片在淡水处理后的蛋白质双向电泳图中大约有904个蛋白点,NaCl溶液处理12天后的蛋白质双向电泳图中大约有967个蛋白点,其中蛋白点匹配成对的有790对。通过搜索软件分析后得到的蛋白点群柱状图,然后根据凝胶图像在视觉上直接观察和比较蛋白点,最终挑选出15个在NaCl溶液处理后表达量增加的蛋白点用于MALDI-TOF质谱鉴定,并将鉴定结果在蛋白质数据库中进行检索。结果表明,17#样品与(CATA3_SOYBN)Catalase 3的匹配分数是80,匹配显著,同时分子量和等电点pI比较接近,因此可以认为17#样品是(CATA3_SOYBN)Catalase 3;29#样品与(ATPB_CUSRE)ATP synthase beta chain的匹配分数是191,匹配显著,同时分子量和等电点pI比较接近,可以认为29#样品是(ATPB_CUSRE)ATP synthase betachain;53#样品和43#、45#、52#样品的肽段峰一样,应该是同一类蛋白。其中,53#样品与(RCA_ARATH)Splice isoform Short的匹配分数是78,达到了显著,可以认为53#样品是(RCA_ARATH)Splice isoform Short,但根据该蛋白的功能特点,(RCA_ ARATH)Splice isoform Short对耐盐方面的作用不是太大。其余49#、63#、64#、66#、85#、87#、88#和94#样品的MALDI-TOF质谱鉴定结果在蛋白质数据库中进行检索都没有得到可信的结果。
【学位授予单位】:华南热带农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q946.1

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