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《华南热带农业大学》 2006年
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海洋真菌抗MRSA活性菌株的筛选及菌株W0707抗菌活性物质的研究

吴碧文  
【摘要】: 随着抗生素及其他抗菌药物的广泛应用,病原微生物的耐药问题日趋严重,如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率不断升高,已成为院内外感染的重要致病菌之一。因此,开发抗MRSA的新型抗生素迫在眉睫。陆地微生物曾是寻找抗生素的主要来源,但近年来从陆地微生物中发现新抗生素的几率越来越低,人们必须寻找新的药源。海洋环境的特殊性使海洋微生物具有独特的遗传背景与代谢途径,能产生结构新颖、作用独特的代谢产物,成为筛选新型抗生素的重要来源。 本论文从海南、湛江及北海部分海域采集样品,进行海洋真菌的分离,对所分离的真菌进行抗MRSA活性菌株的筛选,并对活性较强的菌株W0707进行进一步研究。主要研究结果总结如下: 采用7种培养基对采集自三亚蜈支洲岛的海绵、海藻样品进行真菌分离。结果表明,以培养基A(蔗糖2%,K2HPO40.5%,蛋白胨1%,土豆汁10%,青霉素、链霉素各100U·mL-1,琼脂1.6%,pH6.5)为分离培养基时,能够获得种类最多的真菌,且细菌数量少,最适于海洋真菌的分离。以培养基A为分离培养基,采用平板稀释法,从海南、湛江和北海沿海采集的29份样品中共分离获得真菌312株。以MRSA3558菌株为指示菌,通过纸片扩散法筛选得到22株活性菌株,活性率为7.05%。菌株W0707是从琼海潭门镇采集的海绵中分离得到,该菌对MRSA3558菌株抑制作用强,遗传稳定。通过对菌株W0707的形态特征、18S rDNA序列测定及系统发育分析,鉴定菌株W0707为土曲霉Aspergillus terreus W0707。菌株W0707的18S rDNA在GenBank的登录号为DQ489561。 对菌株W0707的发酵工艺进行了优化,确定菌株W0707产抗菌活性物质的最优发酵培养基为改良的PDA培养基,组成为:土豆汁20%,甘油1.5%,可溶性淀粉2.0%,蛋白胨0.25%,玉米粉0.5%,天然陈海水60%,蒸馏水40%。最佳培养条件为:初始pH6.5,种龄36h,接种量6%,200r·min-1培养7d。 对菌株W0707所产抗菌活性物质理化性质进行了初步探讨,研究表明,该抗菌活性物质具有较强的光稳定性和热稳定性,酸性、中性条件下稳定,碱性条件下不稳定。活性物质易溶于氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、乙醇及丙酮,微溶于水,不溶于石油醚。捷克八溶剂系统纸层析鉴定结果表明,菌株W0707抗菌活性物质的纸层
【学位授予单位】:华南热带农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q93

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【参考文献】
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