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《华南热带农业大学》 2007年
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枯草芽孢杆菌B68产拮抗物质的条件及其拮抗物质特性初步研究

王星云  
【摘要】: 枯草芽孢杆菌B68是一株对香蕉冠腐病菌有很强的抑制作用效果,对热带地区重要的病原真菌表现出很强的拮抗作用,具有广阔的产业化开发前景的一株生防菌。为了开发抗真菌农业抗生素,本文对该菌株对香蕉果实上病原菌的抗菌谱、发酵液提取拮抗物质方法、产拮抗物质的发酵条件、拮抗物质的理化性质等方面进行了初步研究,其如果如下: 1. B68活体、无菌滤液、拮抗物质粗提取液对从香蕉果实上分离获得的14种真菌中的10种致病菌中的9种均表现出很强的抑菌活性,说明B68对香蕉果实上病原菌具有广谱抑菌作用。 2. B68无菌滤液和拮抗物质粗提取均对指示菌F4均表现出强烈的抑制作用。菌丝顶端和中部肿胀,形成念珠状囊状体,其直径为正常菌丝的4-5倍,后细胞壁溶解,原生质外溢,菌丝形成空胞。孢子不能正常萌发产生芽管,原生质浓缩,在孢子的顶端或中间产生一个圆球状泡,后细胞壁破裂,原生质溢出。 3.B68无菌滤液和B68拮抗物质粗提取液稀释至400倍均对指示菌的生长具抑制作用,稀释至40倍的稀释液对孢子萌发具有抑制作用,具浓度超高,抑制作用越强。 4.B68无菌滤液和拮抗物质粗提取液经高温灭菌后抑菌活性明显下降,只有小部分能耐高温。 5.B68无菌滤液经有机溶剂萃取后,与乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚、正丁醇不互溶,处理后有很少部分拮抗物质转入有机相中,大部分仍在水溶液中。甲醇、无水乙醇、异丙醇、乙腈、甲醛、丙酮等与培养液互溶后其抑菌活性保持不变。 6.逐级分级后,从20%到80%各级硫酸铵饱和度沉淀物均表现出抑菌活性,而高于80%后几乎无抑菌活性。 7.拮抗菌B68的最佳发酵条件:即在pH7.0的SDY培养基中于28℃,140r/min摇床振荡培养96h,并且应采用80%的硫酸铵饱和度对抗菌蛋白进行盐析。因此在以后的提取拮抗物质时均采用这些发酵条件和硫酸铵的饱和度,以期得到更多的发酵产物用于分离研究。 8.拮抗物质粗提液除对高温、碱性条件、部分蛋白酶下较敏感以外,能耐较高温耐酸,对紫外线、酸性条件下、各种有机溶济、高离子强度都不敏感,说明拮抗菌B68所产生的拮抗物质很稳定,能被硫酸铵沉淀,B68拮抗物质提取液的茚三酮反应呈阴性,说明它无自由N-端,酸水解后,茚三酮反应呈阳性,双缩脲反应也呈阳性。故推测它可能含有环肽类抗菌蛋白质。
【学位授予单位】:华南热带农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S476

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【引证文献】
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