枯草芽孢杆菌B68产拮抗物质的条件及其拮抗物质特性初步研究
【摘要】：
枯草芽孢杆菌B68是一株对香蕉冠腐病菌有很强的抑制作用效果,对热带地区重要的病原真菌表现出很强的拮抗作用,具有广阔的产业化开发前景的一株生防菌。为了开发抗真菌农业抗生素,本文对该菌株对香蕉果实上病原菌的抗菌谱、发酵液提取拮抗物质方法、产拮抗物质的发酵条件、拮抗物质的理化性质等方面进行了初步研究,其如果如下:
1. B68活体、无菌滤液、拮抗物质粗提取液对从香蕉果实上分离获得的14种真菌中的10种致病菌中的9种均表现出很强的抑菌活性,说明B68对香蕉果实上病原菌具有广谱抑菌作用。
2. B68无菌滤液和拮抗物质粗提取均对指示菌F4均表现出强烈的抑制作用。菌丝顶端和中部肿胀,形成念珠状囊状体,其直径为正常菌丝的4-5倍,后细胞壁溶解,原生质外溢,菌丝形成空胞。孢子不能正常萌发产生芽管,原生质浓缩,在孢子的顶端或中间产生一个圆球状泡,后细胞壁破裂,原生质溢出。
3.B68无菌滤液和B68拮抗物质粗提取液稀释至400倍均对指示菌的生长具抑制作用,稀释至40倍的稀释液对孢子萌发具有抑制作用,具浓度超高,抑制作用越强。
4.B68无菌滤液和拮抗物质粗提取液经高温灭菌后抑菌活性明显下降,只有小部分能耐高温。
5.B68无菌滤液经有机溶剂萃取后,与乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚、正丁醇不互溶,处理后有很少部分拮抗物质转入有机相中,大部分仍在水溶液中。甲醇、无水乙醇、异丙醇、乙腈、甲醛、丙酮等与培养液互溶后其抑菌活性保持不变。
6.逐级分级后,从20%到80%各级硫酸铵饱和度沉淀物均表现出抑菌活性,而高于80%后几乎无抑菌活性。
7.拮抗菌B68的最佳发酵条件:即在pH7.0的SDY培养基中于28℃,140r/min摇床振荡培养96h,并且应采用80%的硫酸铵饱和度对抗菌蛋白进行盐析。因此在以后的提取拮抗物质时均采用这些发酵条件和硫酸铵的饱和度,以期得到更多的发酵产物用于分离研究。
8.拮抗物质粗提液除对高温、碱性条件、部分蛋白酶下较敏感以外,能耐较高温耐酸,对紫外线、酸性条件下、各种有机溶济、高离子强度都不敏感,说明拮抗菌B68所产生的拮抗物质很稳定,能被硫酸铵沉淀,B68拮抗物质提取液的茚三酮反应呈阴性,说明它无自由N-端,酸水解后,茚三酮反应呈阳性,双缩脲反应也呈阳性。故推测它可能含有环肽类抗菌蛋白质。
【关键词】：枯草芽孢杆菌B68 拮抗物质 发酵条件 理化性质 【学位授予单位】：华南热带农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：S476
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2007.146842
【目录】：
- 摘要3-4
- ABSTRACT4-8
- 1 前言8-23
- 1.1 植物病害的的生物防治8-11
- 1.1.1 生物防治的概念和研究历史8-9
- 1.1.2 植物病害生物防治的发展9-10
- 1.1.3 抗菌蛋白与植物抗病基因工程育种10-11
- 1.2 植物体不同部位的细菌及其在生防中应用11-15
- 1.2.1 根际促生细菌与植物病害防治12-13
- 1.2.2 植物附生细菌与叶部病害防治13-14
- 1.2.3 植物内生细菌及其在生防中的作用14-15
- 1.3 生防细菌抗菌机制15-21
- 1.3.1 产生铁载体15-16
- 1.3.2 抗生作用16-18
- 1.3.3 抗真菌代谢活动18-19
- 1.3.4 产生抗真菌酶类19
- 1.3.5 其它抗病机制19-21
- 1.4 本研究的目的意义和研究内容21-23
- 1.4.1 目的意义21
- 1.4.2 研究内容21-23
- 2. 材料和方法23-33
- 2.1 材料23-24
- 2.1.1 菌种23
- 2.1.2 主要仪器设备23
- 2.1.3 培养基23-24
- 2.2 实验方法24-33
- 2.2.1 香蕉果实潜伏侵染的病原菌分离24-26
- 2.2.2 B68 产拮抗物质性质研究26-29
- 2.2.3 B68 产拮抗物质条件的研究29-30
- 2.2.4 B68 拮抗物质粗提取液理化性质研究30-33
- 3. 结果与分析33-51
- 3.1 B68 对香蕉果实病原菌的抑制作用33-36
- 3.1.1 香蕉果实真菌潜伏侵染的带菌率33
- 3.1.2 香蕉果实真菌潜伏侵染致病性测定和种类鉴定33-34
- 3.1.3 B68 对其抑制作用测定34
- 3.1.4 B68 无菌滤液对其抑制作用测定34-35
- 3.1.5 B68 拮抗物质粗提取液对其抑制作用测定35-36
- 3.2 B68 对香蕉冠腐病的作用机制36-41
- 3.2.1 无菌滤液对指示菌菌丝生长的影响36-37
- 3.2.2 无菌滤液对孢子萌发的影响37-38
- 3.2.3 粗提取液对菌丝生长的影响38
- 3.2.4 粗提取液对孢子萌发的影响38
- 3.2.5 B68 培养滤液最低抑制浓度测定38-39
- 3.2.6 B68 拮抗物质的粗提液最低抑制浓度测定39
- 3.2.7 B68 无菌滤液和拮抗物质粗提液经高温灭菌后对指示菌的抑制作用39
- 3.2.8 有机溶剂对B68 培养滤液活性的影响39-40
- 3.2.9 逐级分级沉淀40-41
- 3.3 B68 产拮抗物质条件的研究41-46
- 3.3.1 最佳硫酸铵饱和度的选择41-42
- 3.3.2 发酵时间对产拮抗物质的影响42-43
- 3.3.3 发酵温度对产拮抗物质的影响43
- 3.3.4 摇床转速对产抗菌物质的影响43-44
- 3.3.5 不同培养基对产抗菌物质的影响44-45
- 3.3.6 pH 值对产抗菌物质的影响45
- 3.3.7 不同分子截流量透析袋透析后的影响45-46
- 3.4 B68 拮抗物质粗提取液理化性质研究46-51
- 3.4.1 热稳定性46
- 3.4.2 对酸碱的稳定性46-47
- 3.4.3 对蛋白酶的稳定性47
- 3.4.4 对紫外线的稳定性47-48
- 3.4.5 对氯仿的稳定性48
- 3.4.6 对无水乙醇、异丙醇、乙腈的稳定性48
- 3.4.7 对不同贮藏条件、时间的稳定性48-50
- 3.4.8 茚三酮反应和双缩脲反应50
- 3.4.9 对离子强度的稳定性50-51
- 4. 讨论51-54
- 4.1 香蕉果实潜伏侵染的病原菌分离51
- 4.2 B68 对香蕉果实上潜伏侵染病原菌的抑制作用51
- 4.3 B68 无菌滤液和拮抗物质粗提取液对指示菌的作用机制51
- 4.4 B68 无菌滤液和拮抗物质粗提取液最低抑制浓度测定51-52
- 4.5 B68 无菌滤液和拮抗物质粗提液经高温灭菌后对指示菌的抑制作用52
- 4.6 B68 拮抗物质提取52
- 4.7 B68 产拮抗物质条件的研究52
- 4.8 拮抗物质粗提取液稳定性52-53
- 4.9 B68 拮抗物质理化性质研究53-54
- 5. 结论54-56
- 参考文献56-64
- 附录64-65
- 致谢65
全文下载：
CAJ格式
不支持迅雷等加速下载工具，请取消加速工具后下载
|
|
|
|
| 1 |
黄自然,郑庭辉,梁怡章,屈贤铭;柞蚕抗菌肽的抑菌效应[J];科学通报;1986年14期 |
| 2 |
陈卫良,徐平,龚鸿飞,李德葆;Enterobacter cloacae B8x在水稻叶部定殖及防治水稻白叶枯病的研究[J];农业生物技术学报;1994年02期 |
| 3 |
郝变青,马利平,乔雄梧,高芬;拮抗细菌菌株BC98-I对青椒枯萎病菌的抑制作用[J];农药学学报;2005年01期 |
| 4 |
张荣意,林运萍,谭志琼,刘爱荣;4株枯草芽孢杆菌对香蕉冠腐病的防效测定[J];热带农业科学;2004年02期 |
| 5 |
张荣意,谭志琼,简日明;芒果炭疽病菌生防细菌的筛选、鉴定及生防潜能的初步研究[J];热带作物学报;1998年03期 |
| 6 |
林运萍;谭志琼;张荣意;;香蕉冠腐病拮抗细菌B68的发酵条件[J];热带作物学报;2006年02期 |
| 7 |
王玉菊，祁红英，郭坚华;植物土传病害的微生物防治研究进展[J];世界农业;1995年01期 |
| 8 |
胡剑，林心怡，张九一，王树荣，王岳五;拮抗菌BS—98分泌抗菌蛋白的条件及其发酵液特性[J];微生物学通报;1996年06期 |
| 9 |
谢栋,彭憬,王津红,胡剑,王岳五;枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质[J];微生物学报;1998年01期 |
| 10 |
胡忠,杨增明,王钧;天麻球茎中一种抗真菌蛋白的分离和部分特性[J];云南植物研究;1988年04期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
蔡学清,林彩萍,何红,胡方平;内生枯草芽孢杆菌BS-2对水稻苗生长的效应[J];福建农业大学学报;2005年02期 |
| 2 |
彭广茜,张学君;枯草芽孢杆菌生防菌株Bp产生抗菌物质的条件[J];贵州农业科学;1999年01期 |
| 3 |
王璧生,彭埃天,黄华,刘朝桢;施保克浓乳剂防治香蕉采后病害试验初报[J];广东农业科学;1998年06期 |
| 4 |
屈贤铭,祁国荣,黄自然;注射大肠杆菌或超声波诱导家蚕及蓖麻蚕产生抗菌物质的比较研究[J];昆虫学报;1984年03期 |
| 5 |
屈贤铭,李士云,吴克佐,邱雪贞,娄艳春,刘新垣,祁国荣;大肠杆菌及聚肌胞核苷酸对柞蚕、家蚕蛹诱导产生溶菌酶、抗菌肽及凝集素的动力学[J];昆虫学报;1985年01期 |
| 6 |
钟文彪,黄自然,卢蕴良,刘新垣;聚肌胞核苷酸及2′,5′-寡腺苷酸诱导家蚕对细胞质多角体病毒抑制作用的研究[J];科学通报;1982年12期 |
| 7 |
祁国荣,周奇,屈贤铭,黄自然;超声波诱导柞蚕蛹血淋巴产生抗菌物质[J];科学通报;1983年10期 |
| 8 |
王津红，彭憬，张海波，王岳五;植物病原真菌拮抗菌Bs—98发酵特性及理化性质的研究[J];南开大学学报(自然科学版);1996年04期 |
| 9 |
陈卫良,徐平,龚鸿飞,李德葆;Enterobacter cloacae B8x在水稻叶部定殖及防治水稻白叶枯病的研究[J];农业生物技术学报;1994年02期 |
| 10 |
林东,徐庆,刘忆舟,魏军明,瞿礼嘉,顾红雅,陈章良;枯草芽孢杆菌SO113分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化[J];农业生物技术学报;2001年01期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
于晓丹,张彩霞,林英,吕淑霞,陈捷;拮抗木霉菌株T21发酵条件的研究[J];安徽农业科学;2005年02期 |
| 2 |
王光华,Jos M.Raaijmakers;生防细菌产生的拮抗物质及其在生物防治中的作用[J];应用生态学报;2004年06期 |
| 3 |
谌晓曦,陈卫良,李德葆;357细菌及其分泌的拮抗物质对麦类白粉病菌的抑制作用[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2002年04期 |
| 4 |
大泷
,三郎
,陈宏;鸡贫血因子(CAA)感染症[J];黑龙江畜牧兽医;1990年09期 |
| 5 |
林运萍;谭志琼;张荣意;;香蕉冠腐病拮抗细菌B68的发酵条件[J];热带作物学报;2006年02期 |
| 6 |
江学斌,冼海辉,谢双大,林壁润;农抗万隆霉素发酵条件探讨[J];广东农业科学;2005年02期 |
| 7 |
李梅云,高家合,王革,李天飞,李松,王颖琦;菌株JMB142发酵条件的初步研究[J];中国烟草科学;2004年01期 |
| 8 |
叶小梅,常志州,黄红英,马艳,张建英;番茄内生菌102安全性及其拮抗物质初步研究[J];江苏农业科学;2005年01期 |
| 9 |
鲍俊英,冯旭,王迪;貉油的理化性质及成份测定[J];中国林副特产;1996年03期 |
| 10 |
吴天太;;从紫胶理化性质看寄主树的选择[J];广西林业科学;1980年03期 |
|
