收藏本站
《广东海洋大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

溶藻弧菌毒力相关基因的检测与保藏方法的研究

韩佳丽  
【摘要】:溶藻弧菌对宿主的致病性与溶藻弧菌产生的各种毒力因子息息相关。本研究以溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因(Collagenase)、碱性丝氨酸蛋白酶基因(Alkaline serine exoprotease,AspA)、鞭毛丝蛋白基因(FlaA)、铁摄取调节基因(fur)、毒力调控基因toxR以及toxS作为目的基因,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对不同保藏方法其表达量进行检测。 选取实验室保存的8株溶藻弧菌为对象,提取其总RNA为模板,根据GenBank上的全序列设计特异性引物,以16S基因为内参照,研究了collagenase、AspA、FlaA、fur、toxR以及toxS基因的表达量。再分别用这8株菌对罗非鱼进行传统攻毒实验,观测其致死率,分析其毒性强弱。结合两部分研究结果发现,溶藻弧菌的collagenase、AspA、FlaA、toxR以及toxS基因的表达量与溶藻弧菌的毒力具有相关性;而fur基因则与溶藻弧菌的毒力不具有相关性。 采用斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、生理盐水保藏法以及甘油液保藏法对实验室同一株溶藻弧菌强毒株进行为期一年的保藏,再用实时荧光定量PCR对其各毒力相关基因的表达量进行检测。分析发现,本研究所采取的四种保藏手法都能较好的保持菌种的存活率以及遗传稳定性,其中斜面低温保藏法效果尤为明显。另外,研究还发现铁摄取调节基因(fur)和毒力调控基因toxS在不同的保藏手法下表达量始终保持相对稳定。 本论文的研究成果为探讨溶藻弧菌毒力的荧光定量PCR检测方法的应用奠定了坚实的基础,完善了溶藻弧菌毒力检测的分子手段,有效地提高了溶藻弧菌毒力检测技术的速度与准确性。同时,本文通过对菌种保藏方法的研究,为实验室如何更好地保藏菌种提供了重要的理论指导,为菌种的进一步研究提供优质的实验材料。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S943

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢建军;许文军;施慧;查智辉;;溶藻弧菌诱导对三疣梭子蟹血淋巴非特异性免疫水平的影响[J];水产学报;2011年09期
2 许奕端;林壮炳;张楚妃;翁华;赖向生;曾向坤;郑端义;陈业鑫;;杂色鲍育苗“掉板症”的预防试验[J];科学养鱼;2011年06期
3 王斌;程振远;王惠;张兴;周雅飞;周一兵;;沿海滩涂镉吸附细菌的分离、鉴定及生长特性的研究[J];大连海洋大学学报;2011年04期
4 侯晓阳;孙铂光;刘吉文;孙婧;张晓华;;哈维氏弧菌VIB645毒性相关质粒的结构解析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年09期
5 徐长安;罗秀针;俞超超;;海洋源生防细菌LHB02的筛选、鉴定及其抑菌谱检测[J];海洋与湖沼;2011年02期
6 郭腾飞;黄旭雄;苏明;王武刚;怀向军;胡盼;严佳琦;吕丹;黄征征;;饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶mRNA及Toll受体mRNA表达的影响[J];水产学报;2011年07期
7 胡钰婷;张殿昌;崔淑歌;郭华阳;陈明强;江世贵;;合浦珠母贝C-型凝集素基因的序列特征和功能分析[J];水产学报;2011年09期
8 徐子男;张晓华;;鳗弧菌膜绑定溶胞壁质转糖酶MltD的表达纯化及生物信息学分析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年Z2期
9 张美君;廖晓萍;王秀梅;朱恒乾;孙坚;孙迎;王杨;庄娜;刘雅红;;宠物源大肠杆菌的血清型和毒力基因及耐药性调查[J];中国预防兽医学报;2011年08期
10 李进寿;卢斌;王波;柯才焕;;氯霉素暴露对杂色鲍免疫活性的影响[J];台湾海峡;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 罗鹏;苏婷;胡超群;任春华;;溶藻弧菌的普通溶血现象及相关基因定位[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 梁海鹰;吴灶和;简纪常;;溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 朱其建;邹卫丽;戴习林;邓平平;张立田;丁福江;;溶藻弧菌对罗氏沼虾血清中一氧化氮及氧自由基的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 王蓓;吴灶和;简纪常;鲁义善;蔡双虎;汤菊芬;;8溶藻弧菌HY9901生物被膜的特性与相关基因的研究[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
5 周宸;;斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)溶藻弧菌病及免疫防治的研究[A];中国海洋湖沼学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
6 周桂莲;王淑真;杨宝兰;;鉴别副溶血性弧菌和溶藻弧菌致病与非致病性的动物试验方法[A];北京食品学会1982年年会论文(摘要)[C];1982年
7 陈偿;胡超群;张吕平;陈晓燕;沈琪;任春华;;海水养殖动物主要病原细菌—溶藻弧菌的分子生物学研究[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
8 徐常新;王三英;彭宣宪;;对不同Na~+浓度条件下溶藻弧菌外膜蛋白的蛋白质组学分析[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
9 陈偿;胡超群;张吕平;陈晓燕;沈琪;任春华;;ERIC-PCR和RAPD技术在弧菌遗传多样性分析中的应用[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
10 李庆山;张桂珍;侯霄煜;石涓;;由溶藻弧菌引起的一起食物中毒[A];山东预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 麦文伟;湛江局两项地方标准国内领先[N];中国国门时报;2007年
2 林岳夫;我国研制出多联鱼病防治疫苗[N];中国海洋报;2004年
3 王有国;狐假虎威的“假霍乱”[N];医药经济报;2003年
4 陈昌生 马平;九孔鲍鱼的养殖技术(五)[N];福建科技报;2006年
5 本报记者 南山通讯员 麦文伟;湛江水产品出口创历史最高纪录[N];国际商报;2007年
6 本报记者 束海燕 实习记者 蔡紫;食以“安”为先[N];中国国门时报;2003年
7 林岳夫;福建制成多联鱼病防治疫苗[N];农资导报;2004年
8 本报记者 王威克;2008年水科院十大成果亮点[N];中国渔业报;2009年
9 马广一;强化把关服务促进外贸发展[N];中国国门时报;2003年
10 李正法 尹耀文 马广一 朱雪良;为南京地区开放型经济保驾护航[N];江苏经济报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘欢;溶藻弧菌群体感应系统元件Hfq和LuxT的功能研究[D];华东理工大学;2012年
2 贾爱荣;大菱鲆4种免疫相关基因的克隆、表达分析及溶藻弧菌溶血素的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
4 王虹;小鼠吸入性鼠疫模型的组织病理学和鼠疫耶尔森氏菌重要毒力相关基因体内转录水平的研究[D];吉林大学;2006年
5 张会东;赖型钩端螺旋体毒力相关基因ompl17的蛋白质功能学研究[D];四川大学;2006年
6 万文菊;剑尾鱼HSP70家族两成员的分子克隆及溶藻弧菌感染与免疫对其基因的诱导表达[D];山东农业大学;2006年
7 钱荣华;溶藻弧菌主要毒力相关基因的克隆、表达及其免疫原性研究[D];浙江大学;2007年
8 伦立民;文昌鱼谷丙转氨酶组织定位及在LPS和溶藻弧菌处理后急性炎症相关因子的变化[D];中国海洋大学;2008年
9 张崇文;哈维氏弧菌外膜蛋白(OmpK和GAPDH)免疫原性研究及主要海水病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选[D];浙江大学;2007年
10 刘越;生物功能化碳纳米管的合成、表征及分析应用[D];南开大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贺红红;溶藻弧菌双精氨酸蛋白转运系统和六型分泌系统的研究[D];华东理工大学;2011年
2 丁文超;几种水产养殖动物病原快速检测方法的研究[D];宁波大学;2009年
3 欧阳吉隆;溶藻弧菌毒力菌株特异基因的克隆与表达[D];海南大学;2011年
4 刘燕;猪链球菌2型主要毒力相关基因克隆、表达及其在检测中的应用研究[D];吉林大学;2007年
5 戴广明;河南省福氏志贺菌株中毒力相关基因及She毒力岛的分布研究[D];大连医科大学;2008年
6 纪勇;用于溶藻弧菌快速检测的免疫磁珠技术的研究[D];集美大学;2011年
7 李华;哈氏弧菌和溶藻弧菌亚单位偶联疫苗的初步研究[D];西北农林科技大学;2007年
8 曹宏梅;二联疫苗及药物对大菱鲆的免疫影响研究[D];中国海洋大学;2006年
9 苏洁;弯曲菌地方分离株毒力相关基因分析及HT-29细胞感染模型的建立与应用[D];扬州大学;2007年
10 张永志;致鹅卵黄性腹膜炎性大肠杆菌的部分生物学特性研究[D];扬州大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026