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《广东海洋大学》 2012年
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栉江珧精子的超低温冷冻保存及精子质量检测方法的研究

郑娇  
【摘要】:本文以栉江珧为研究对象,以二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)、蔗糖为抗冻剂,对栉江珧精液进行超低温冷冻保存,尝试建立栉江珧精子的超低温冷冻保存的基本程序;并选用荧光染料对栉江珧精液进行染色来检测精子质膜完整性、线粒体活性,筛选出适宜栉江珧精子质量检测的染色方法,为贝类精子质量检测提供参考数据。 1栉江珧精子超低温冷冻保存的研究 本文利用解剖法采集栉江珧精液,以自然海水为基础液,配置不同浓度的二甲基亚砜、甘油、蔗糖作为超低温保护剂,于成熟的精子中加入不同种类、不同浓度的抗冻剂,样品按照四组不同的降温程序平衡后投入液氮中保存,比较其超低温冷冻保存的效果。并且还探讨了不同浓度的DMSO、样品保存体积、平衡时间、解冻方式对栉江珧精液冷冻效果的影响。结果表明:抗冻保护剂DMSO其冷冻保存效果优于甘油、DMSO与蔗糖混合的效果,二甲基亚砜浓度过高或过低都会影响存活率,其最适浓度为8%~10%;样品保存的最适体积为1.0~1.5mL;在0℃平衡处理,15min时保存效果较好;解冻方式采取38~40℃水浴快速解冻效果较好。 2双荧光复染法检测栉江珧精子质膜完整性研究 本文采用二乙酰荧光素(FDA)和碘化丙啶(PI)两种荧光染料对栉江珧精子质膜完整性进行检测,比较不同的染色浓度和时间的效果,筛选出FDA和PI的最适染色浓度均为10μg/mL,染色时间为10min。用水浴致死的精液和新鲜精液配置含有不同死亡率的9个样品(10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%),将其作为理论死亡率,采用PI和FDA检测各个样品的实际死亡率,并进行相关性分析。结果表明FDA和PI能有效区分活精子和死精子,活精子发出绿色荧光,死精子发出红色荧光,各样品理论死亡率和实测精子死亡率之间呈极显著正相关,相关系数R=0.99(P0.01),表明FDA-PI双荧光复染法检测精子质膜完整性是可行的。用此方法检测栉江珧精液超低温冷冻前后的质膜完整率,结果表明栉江珧精液经超低温冷冻保存后其存活率显著下降(P0.01),质膜也受到了不同程度的损伤。 3罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)检测栉江珧精子线粒体活性研究 本文采用罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)两种荧光染料对栉江珧精子线粒体活性进行检测,比较不同染液浓度和染色时间的检测效果,并用该方法检测和比较超低温冷冻保存对线粒体活性的影响。结果显示:Rh123染色的最适染液浓度为10μg/mL,染色时间控制在10min之内;染色后具有线粒体活性的精子发出绿色荧光,死精子发出红色荧光,质膜受损但线粒体还未受损的精子发出红绿色荧光,表明Rh123和PI双荧光染色检测栉江珧精子线粒体活性是可行的;精液经冷冻后,线粒体活性为61.9%、质膜完整率56.8%,显著低于新鲜精液组(95.3%、93.5%),表明冷冻对精子结构会造成不同程度的损伤,Rh123和PI双荧光染色法可用来检测栉江珧精子质量。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S968.316.9

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 霍立军,杨增明;哺乳动物精子质量的评价方法[J];动物学杂志;2002年02期
2 张静,侯林,吕红丽,姚锋,王伟,高岩;双壳类精子发生的研究[J];东海海洋;2003年04期
3 采克俊,司维,李亚辉,季维智;流式细胞术在哺乳动物精液质量检测中的应用[J];动物学研究;2003年04期
4 谢开恩;陈炳能;陈世杰;黄百芳;尤建雄;;泉州湾栉江珧[Atrina perinata(Linne)]调查研究报告[J];福建水产科技;1980年02期
5 葛凤燕,闫喜龙,潘惠英,周小丽,陈立功;荧光素类探针在生物分析中的研究进展[J];分析化学;2005年08期
6 白修云;王有柱;李向臣;关伟军;;哺乳动物精子质量检测原理及方法[J];中国畜牧兽医;2007年09期
7 毛勇,余祥勇,周莉,桂建芳,梁飞龙;应用RAPD技术初步分析无裂栉江珧四种类型的基因组DNA[J];广西科学;2003年04期
8 谌丽斌,梁文艳,曲久辉,解明曙,雷鹏举,刘会娟;FDA-PI双色荧光法检测蓝藻细胞活性的研究[J];环境化学;2005年05期
9 伊亚玲,张维生,李成,岳奎忠,孙兴参;乙酰荧光素(FDA)在小鼠和猪卵母细胞活力评价上作用[J];黑龙江动物繁殖;2003年02期
10 孙振兴,常林瑞;贝类种质资源保护研究进展[J];海洋湖沼通报;2005年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 胡建宏;猪精液冷冻保存研究[D];西北农林科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 豆伟;马氏珠母贝精子质量检测方法的研究[D];广东海洋大学;2011年
2 李纯;海洋经济动物精子超低温保存的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
3 刘清华;真鲷(Pagrosomus major)精液超低温保存及其低温损伤研究[D];中国海洋大学;2005年
4 范丽君;线粒体和DNA完整性在中华绒螯蟹精子质量评价中的应用[D];华东师范大学;2006年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高如承;吴丽云;;流式细胞仪在水生动物研究中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年23期
2 李林春,秦玉丽,黄斌;中华鳖精液保存技术研究[J];安徽农业科学;2005年03期
3 田照辉;徐绍刚;胡红霞;张清靖;梁秋婷;;水泥池养殖缺帘鱼性腺发育研究[J];安徽农业科学;2009年18期
4 徐海龙;张桂芬;朱永安;杨广;张志山;乔秀亭;;高体革鯻精子超低温保存方法研究[J];安徽农业科学;2010年06期
5 刘艳萍;滕立平;段黄金;鲁乃增;王高辉;;包埋玻璃化法超低温保存沙生柽柳休眠茎尖的研究[J];安徽农业科学;2010年11期
6 赵冰;徐振军;李建娇;白桂芬;刘冰;;克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响[J];安徽农业科学;2010年36期
7 李雁,郑从义;微生物物种多样性的保护与其资源保藏[J];氨基酸和生物资源;2003年03期
8 陈丽婷;张雪瑾;沈超;郑从义;;实验细胞资源同功酶分析鉴定[J];氨基酸和生物资源;2006年04期
9 胡蝶;汪永丽;朱伊娜;鲁芳;;一种呫吨荧光分子在植物细胞中的应用研究[J];现代农业科技;2012年04期
10 徐广友;万全;袁兆祥;马明发;凌武海;吴泊君;;滁州鲫雌核发育的细胞学研究[J];安徽农业大学学报;2009年04期
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1 薛建平;张爱民;盛玮;;植物种质超低温保存研究进展[A];2004“生态安徽”博士科技论坛论文集[C];2004年
2 傅伊倩;刘燕;;百合种质资源离体保存研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 慕峰;吴旭干;成永旭;陆剑锋;;克氏原螯虾胚胎发育的形态学变化[A];2006年上海市动物学会学术年会论文集[C];2006年
4 孙菊香;范丽君;贾林芝;厉小波;陈东华;曲迪;王群;;伊红、PI染色法检测中华绒螯蟹活精子率[A];2006年上海市动物学会学术年会论文集[C];2006年
5 王金锋;谢晶;;基于流态化实验的青刀豆速冻品质分析[A];上海市制冷学会2009年学术年会论文集[C];2009年
6 武彩红;张斌;贺生中;;稀释液的渗透压对犬精液保存效果的影响[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
7 徐振军;赵冰;黄亚斐;刘冰;刘黎明;王佳鹏;张红霞;;冷冻保存对绵羊精子质膜完整性的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
8 曾玉峰;阎萍;林金杏;郭宪;梁春年;包鹏甲;裴杰;;哺乳动物精子超微结构研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
9 赵冰;徐振军;李建娇;白桂芬;刘冰;;克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
10 张金龙;闫小芹;张效生;崔茂盛;冯建忠;;应用精子生育相关性抗原提高奶牛妊娠率研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
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1 陈彩芳;四种细胞色素P450酶在半滑舌鳎繁殖生理机能中的作用研究[D];中国海洋大学;2010年
2 李秉玲;芍药属植物超低温保存花粉的差异表达蛋白质研究及花粉库的建立[D];北京林业大学;2010年
3 范菊莉;人血小板冷冻干燥保存工艺的优化研究[D];浙江大学;2009年
4 周晓明;生物材料低温保存中若干机械工程问题的理论和实验研究[D];电子科技大学;2010年
5 赵宁;有机双光子材料的合成及其在生物荧光探针和光聚合中的应用[D];山东大学;2010年
6 何滔;条石鲷早期发育及相关酶活性的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
7 柴局;内蒙古绒山羊精液冷冻保存的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
8 徐永江;星鲽生殖生理和内分泌特征研究[D];中国海洋大学;2011年
9 张芳;微藻油脂合成调控及膜分散原位萃取研究[D];浙江大学;2011年
10 杨戈尔;低温冷冻过程中胞内冰晶生长机制与应用研究[D];上海交通大学;2011年
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1 陈秀荣;氰戊菊酯对草鱼CYP3A活性的影响及组织毒理学研究[D];华中农业大学;2010年
2 闫建林;饲料中低蛋白和低脂肪对黄鳝性逆转的影响[D];华中农业大学;2010年
3 刘长河;不同保存方案对山羊精液液态保存的影响[D];山东农业大学;2010年
4 张育军;安徽白山羊精液冷冻保存技术研究[D];安徽农业大学;2010年
5 黄佩龙;羊软骨细胞玻璃化冻存的研究[D];浙江农林大学;2010年
6 邸炜鹏;氨海水与5-羟色胺对栉孔扇贝解剖卵体外促熟作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 金国雄;条斑星鲽雄鱼繁殖内分泌机理初步研究[D];中国海洋大学;2010年
8 韩松;金乌贼(Sepia esculenta)繁殖行为及交配模式的分子鉴定[D];中国海洋大学;2010年
9 杨戈;新型低温保存装置性能的实验研究[D];浙江大学;2010年
10 陈路清;降胆固醇双歧杆菌的体外筛选[D];浙江大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋博,郑履康,邓丽霞,张桥;单细胞凝胶电泳检测精子DNA损伤方法初探[J];癌变.畸变.突变;2001年02期
2 金龙金,楼哲丰,董杰影,陈锡文;汞、镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用[J];癌变.畸变.突变;2004年02期
3 魏磊;提高猪人工授精效果的综合技术探讨[J];安徽农业科学;2004年03期
4 李林林;吴华莉;刘东;张德福;马恒东;;猪精液冷冻技术研究进展[J];安徽农业科学;2006年11期
5 李文烨;李青旺;江忠良;张树山;;单细胞电泳技术检测低温保存猪精子的DNA损伤[J];安徽农业科学;2007年09期
6 陈大元,石其贤,宋祥芬,赵学坤,段崇文,何光昕,叶志勇,张安居,冯文和;大熊猫与金黄地鼠体外异种受精的研究[J];动物学报;1989年04期
7 沈亦平,马丽君,张锡元,吴熙载;合浦珠母贝的配子发生[J];动物学报;1992年02期
8 陈松林,刘宪亭,鲁大椿,章龙珍,傅朝君,方建平;鲢、鲤、团头鲂和草鱼精液冷冻保存的研究[J];动物学报;1992年04期
9 洪水根,陈细法,周时强,黄加祺;长毛对虾精子发生的研究——Ⅰ.精子的形态结构[J];动物学报;1993年03期
10 上官步敏,李少菁;锯缘青蟹精子超微结构的研究[J];动物学报;1994年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 孔晓瑜;刘亚军;喻子牛;宋林生;;栉孔扇贝和海湾扇贝线粒体16S rRNA基因片段的比较研究[A];贝类学论文集(第Ⅸ辑)[C];1999年
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1 陈亚明;绵羊精液超低温冷冻程序及稀释液优化方法的研究[D];甘肃农业大学;2002年
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1 周佳勃;猪精液冷冻及室温保存技术研究[D];东北农业大学;2000年
2 李纯;海洋经济动物精子超低温保存的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
3 马毅;波尔山羊除精浆冷冻精液机理的研究[D];西北农林科技大学;2002年
4 霍立军;长期液态保存的公猪精液中精子的活率、线粒体活性、获能和顶体完整性检测[D];东北农业大学;2002年
5 李刚;猪精液冷冻保存技术研究[D];西北农林科技大学;2005年
6 范丽君;线粒体和DNA完整性在中华绒螯蟹精子质量评价中的应用[D];华东师范大学;2006年
7 谢文燕;畸形精子症精液的处理方法及精子形态对辅助生殖技术治疗结局影响的研究[D];汕头大学;2007年
8 林琼林;冷冻对人精子核DNA完整性的影响及抗氧化剂改善冻融人精子质量的研究[D];汕头大学;2007年
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1 刘辉,王丽琴,崔定中,韩筠,王爱国;绵羊精子发生的季节变化[J];新疆农业科学;1993年05期
2 张贵学;贺桂馨;张大鹏;;长期输精管结扎对兔精子发生的影响[J];东北农业大学学报;1993年02期
3 陆雅君;潘雅玲;;东方次睾吸虫电镜研究 Ⅲ、精子和精子发生[J];上海交通大学学报(农业科学版);1990年01期
4 赵云龙,堵南山,赖伟;日本沼虾精子发生的研究[J];动物学报;1997年03期
5 洪水根,李祺福,郭永刚,倪子绵,黄加祺,周时强;斑节对虾精子发生的超微结构[J];动物学报;1998年01期
6 王艺磊,张子平,李少菁;甲壳动物精子学研究概况Ⅱ.精子发生与精子的生化组成[J];动物学杂志;1998年04期
7 洪万树,翁幼竹,林君卓,方永强,戴燕玉;鲻鱼精子发生和形成的超微结构研究[J];海洋学报(中文版);2001年05期
8 张静,侯林,吕红丽,姚锋,王伟,高岩;双壳类精子发生的研究[J];东海海洋;2003年04期
9 李根亮;康现江;曹刚;穆淑梅;葛少钦;;低温及胰酶加Ca~(2+)对中华绒螯蟹精子顶体反应的诱导[J];海洋水产研究;2008年01期
10 管卫兵;宣富君;戴小杰;朱江峰;;东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成[J];中国水产科学;2009年02期
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1 洪水根;倪子绵;薛如;孙涛;刘桂杰;韩俊雁;;中国鲎精子发生的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 何莹;侯林;杨万喜;;Myosin Va在中华绒螯蟹精子发生过程中的空间分布与表达[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
3 王彦平;王亮;李俊杰;周光斌;朱士恩;;冷冻对精子超活化水平的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
4 袁秀堂;周一兵;;墨西哥湾扇贝精子发生的超微结构和细胞化学[A];贝类学会第七次会员代表大会暨第十一次学术讨论会摘要[C];2003年
5 马全红;郭睿;王海坤;王会珍;葛晔华;马静;陈咏梅;韩代书;;一个在小鼠精子发生后期特异表达基因(SRG-L)的克隆及分析[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
6 彭彬;张仁东;邓显忠;万勇;杨正伟;;弥猴输精管结扎对精子发生的影响——体视学定量研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
7 张明凤;赵云龙;;隆线溞精子发生及成熟精子的超微结构[A];中国动物学会甲壳动物学分会、中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2004年
8 孙广峰;王达利;魏在荣;罗志军;聂开瑜;金文虎;;游离皮片移植修复阴囊撕脱伤对精子发生影响的实验研究及临床观察[A];中国药理学会第七届全国生殖药理学术交流会论文摘要汇编[C];2011年
9 桂耀庭;唐爱发;余振东;张立兵;张键荣;李贤新;蔡志明;;精子发生相关基因的筛选和功能研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
10 王玉凤;朱朝兵;;罗氏沼虾精子发生超微结构的研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
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1 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市人类精子库 杜宏伟 上海市男科学研究所 李铮;人体最激情的舞者——精子[N];东方早报;2011年
2 刘长亮;“附睾炎致不孕”内幕揭秘[N];农村医药报(汉);2008年
3 易善永;治疗不孕为何还要先避孕[N];健康报;2006年
4 段恩奎;人造精子用于临床不能过于乐观[N];科技日报;2006年
5 杨孝文;揭开海马的繁衍生息之谜[N];中国渔业报;2007年
6 省畜牧局高级畜牧师 王学君;采精公猪常见问题的解决办法(下)[N];河南科技报;2006年
7 ;前列腺炎导致不育怎么办?[N];乐山日报;2006年
8 证券时报记者 刘莎莎;好当家10万亩海域将底播投苗[N];证券时报;2007年
9 冯桃莉;避孕套能治不孕症?[N];大众卫生报;2004年
10 潘文;对人工精子的临床前景不能过于乐观[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李慕军;不同类型精子发生障碍全基因组甲基化差异分析与重要功能基因的表达验证[D];广西医科大学;2012年
2 邢俊;VAMP4在精子运动中的功能研究[D];南京医科大学;2009年
3 刘边疆;人类精子中电压依赖性阴离子通道蛋白的基础和临床研究[D];南京医科大学;2011年
4 葛少钦;十足目甲壳动物精子发生及顶体反应过程中碱性蛋白和乙酰化H4蛋白的变化[D];河北大学;2008年
5 沙家豪 ;人类睾丸cDNA array制备及睾丸发育/精子发生相关基因表达谱系构建[D];南京师范大学;2003年
6 周作民;人睾丸发育/精子发生相关基因的研究[D];南京师范大学;2003年
7 邱为民;小鼠znf230和人TCP11基因的克隆和功能研究[D];四川大学;2004年
8 刘顺利;鼠精子纤维鞘蛋白FSCB的磷酸化在获能和超活化中的作用研究[D];第三军医大学;2012年
9 马静;Smads在肾阳虚大鼠精子发生中的作用及温阳生精汤对Smads表达的影响[D];第四军医大学;2005年
10 方弟安;红螯光壳螯虾(Cherax quadricarinatus)三个与精子发生相关基因的研究[D];华东师范大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑娇;栉江珧精子的超低温冷冻保存及精子质量检测方法的研究[D];广东海洋大学;2012年
2 晏正碧;稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子发生的初步研究[D];西南大学;2011年
3 鲁可可;人类hUFP基因初步研究[D];南京医科大学;2004年
4 袁娲;NORPEG基因不同转录本在人睾丸中的表达研究[D];南京医科大学;2005年
5 曹志国;睾丸特异蛋白GGN1与GGNBP2的相互作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 张士芳;体外获能马鹿精子酪氨酸磷酸化蛋白的分布与表达[D];东北林业大学;2010年
7 张立飞;4种十足目甲壳动物精子发生的比较研究[D];浙江大学;2003年
8 任艳玲;孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究[D];东北林业大学;2006年
9 余周;细胞凋亡抑制因子survivin在精子发生过程中的作用研究[D];重庆医科大学;2007年
10 杨立;“生精宝”对小鼠少精子症模型的作用及机理探讨[D];昆明医学院;2008年
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