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《广东海洋大学》 2013年
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近江牡蛎糖胺聚糖体内抗肿瘤活性、毒理评价及口服液的研制

蒋杨  
【摘要】:目的: 本文主要以新鲜的近江牡蛎全脏器为原料,酶解提取近江牡蛎糖胺聚糖(Crassostrea Rivularis glycosaminoglycan),进行其体内抗肿瘤活性、安全毒理学评价,以及牡蛎多糖口服液的研究。 方法: 1.体内抗肿瘤试验方法:采用动物体内移植性肿瘤筛选抗肿瘤药物的方法,选用S180肉瘤、艾氏癌腹水型(EAC)、L1210小鼠白血病三种瘤株,观察近江牡蛎糖胺聚糖对KM小鼠体内三种肿瘤细胞的影响作用。 2.安全毒理学评价: ①急性毒性试验:按照最大耐受剂量法,设定CG的剂量为21.50g/kg BW,灌胃于KM小鼠后,连续观察14d,记录中毒症状和死亡情况。②Ames试验:采用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌四种菌株TA97、TA98、TA100、TA102进行试验,设5个剂量组即5000、1000、200、40、8μg/皿,统计各组回复突变菌落数。③小鼠骨髓细胞微核试验:设置剂量为10、5、2.5g kg~(-1),计数每只动物中1000个嗜多染红细胞,记录含微核的嗜多染红细胞数,观察200个细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞(PCE/RBC)比值。④小鼠精子畸形试验:试验剂量10、5、2.5g kg~(-1),每只小鼠计数1000个精子,记录畸形精子的数量。 3.近江牡蛎多糖口服液的研制方法:①采用蜂蜜、柠檬酸作为甜味剂和酸味剂,利用酵母粉发酵除腥,设计正交试验,研究蜂蜜、柠檬酸、牡蛎多糖添加量三个因素对口服液口感的影响。②口服液相关指标的检测:利用阿利新蓝比色法测定糖胺聚糖的含量;利用《中华人民共和国药典》2010版规定进行装量检查;按照《中国药典》2010年版二部附录VI H pH值测定法测定pH;参照2003版《保健食品检验与评价技术规范》测定重金属和微生物的含量。 结果: 1.体内抗肿瘤试验: (1)对荷S180实体瘤小鼠的影响:①CG三个剂量组(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)与阴性对照组相比,均能降低小鼠的实体瘤重量。其中CG100mg/kg剂量组差异极显著(P0.01),抑瘤率最高达到44.66%;CG200mg/kg差异显著(P0.05)。CG100mg/kg能协同增强CTX的抑瘤效果。②对小鼠免疫器官的影响:CG各剂量组均能增加小鼠的脾指数, CG50mg/kg、100mg/kg剂量组能增加小鼠的胸腺指数,各剂量组与阴性对照组相比,无显著差异(P0.05);其中CG100mg/kg能拮抗CTX引起的脾指数和胸腺指数降低,修复CTX造成的免疫损伤。 (2)对荷白血病L1210腹水瘤小鼠的影响:CG各剂量组均能延长荷瘤小鼠的平均生命期,其中CG100mg/kg生命延长率最高达到12.45%;其中CG100mg/kg对CTX起到协同增敏作用,将小鼠的生命延长率从30.75%提高到50.27%。腹围测定的结果显示,CG各剂量组小鼠的腹围均少于阴性对照组,但无统计学意义,结果与生命延长率相比较有一定的相关性。 (3)对荷艾氏腹水癌EAC小鼠的影响:CG各剂量组均能延长荷瘤小鼠的平均生命期,且随剂量的增加其生命延长率也在增加, CG200mg/kg生命延长率最高达到18.66%;与生理盐水对照组比较,CG(100mg/kg、200mg/kg)差异显著(P0.05);合用组体现了协同增敏作用,将小鼠的生命延长率从47.92%提高到55.27%。腹围测定的结果显示,各用药组小鼠腹围均少于生理盐水对照组。 2.安全毒理学试验: (1)急性毒性试验结果表明,试验期间未观察到小鼠的死亡及中毒症状,经口最大耐受剂量大于21.50g/kg BW。 (2)Ames试验的结果表明,CG无致突变作用;小鼠骨髓细胞微核试验的结果表明,CG对骨髓嗜多染红细胞微核形成率无显著影响;小鼠精子畸形试验的结果表明,CG对小鼠精子畸形率无显著影响。三项遗传毒理学的试验结果皆呈阴性,表明近江牡蛎糖胺聚糖无明显遗传毒性。 3.近江牡蛎多糖口服液的研制:①通过正交试验优化,确定最佳口感配方为酵母粉(2%,30min),牡蛎多糖添加量5mg/mL,7%蜂蜜,0.15%柠檬酸;②口服液的质量标准:澄清透明的浅黄色、黄色液体,无腥味、有香甜味,较适口、酸甜适中,口感圆滑,糖胺聚糖浓度398μg/mL,pH4.5~5.5,镉(以Cd计)≤0.2mg/L,铅(以Pb计)≤0.2mg/L,菌落总数≤100CFU/mL,大肠菌群≤3CFU/mL。 结论: (1)近江牡蛎糖胺聚糖对S180肉瘤、艾氏癌腹水型(EAC)、白血病L1210三种瘤株均有一定的抑制作用,且与CTX联用能起到协同增强抗肿瘤作用的效果。 (2)近江牡蛎糖胺聚糖是一种安全无毒,可用于保健品开发的食品。 (3)近江牡蛎多糖口服液的配方合理,产品质量符合相关标准。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:TS254.9

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【参考文献】
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