收藏本站
《广东海洋大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscB基因的功能研究及vscD基因的克隆表达

常云胜  
【摘要】:溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)作为海洋水生经济动物的主要病原之一,给水产养殖产业造成了严重危害。因此,需对溶藻弧菌病菌进行有效的防控。Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)作为溶藻弧菌的毒力因子与其致病性关系密切,Vsc B蛋白和Vsc D蛋白是Ⅲ型分泌系统重要组成部分,可能在溶藻弧菌侵染宿主的过程发挥重要作用。本实验以溶藻弧菌T3SS的vsc B和vsc D基因作为研究对象,分别克隆了vsc B和vsc D基因,结果发现,vsc B基因长为429 bp,编码142个氨基酸,理论分子量为16.4k Da,p I值为5.48;vsc D基因长1302 bp,编码了433个氨基酸,分子量为47.9k Da,理论p I值为4.98。通过氨基酸序列同源性比对结果显示,溶藻弧菌的Vsc B与副溶血弧菌的蛋白相似度最高,达到91%,而溶藻弧菌的Vsc D与魔鬼弧菌(Vibrio diabolicus)的蛋白相似度最高,达到97%。同时分别构建了p ET-28a-vsc B和p ET-32a-vsc D原核表达载体,分别对其表达产物进行了可溶性检测,结果显示,Vsc B蛋白主要以包涵体的形式存在,而Vsc D主要存在于上清中。分别对Vsc B蛋白和Vsc D蛋白进行western-blot分析,证实两蛋白均在大肠杆菌中成功表达。利用Overlap PCR以及同源重组技术,结合氯霉素(Cm)正向筛选和vmt基因对L-阿拉伯糖敏感性,构建了目的基因vsc B无标记基因框内缺失株,同时构建了其回补株。并分别对缺失株、回补株和野生株的生物学表型进行了比较研究。结果发现,溶藻弧菌在缺失vsc B基因的情况下,其生长曲线、胞外酶活性及生物膜生成能力与野生株和回补株相比并没有明显变化;vsc B缺失株的泳动能力相比野生株明显减弱;通过LD50检测,发现其毒力比野生株降低了23.2倍,将缺失株△vsc B进行回补后,其毒力基本恢复至原有水平。可见,vsc B基因与溶藻弧菌的致病能力相关。以缺失株△vsc B作为免疫原,通过腹腔注射对石斑鱼进行了免疫,在免疫一个月后,再用溶藻弧菌野生株对石斑鱼进行攻毒。结果发现,受免疫的石斑鱼抗病能力明显增强,相对免疫保护率达到77.6%。表明缺失株△vsc B可作为防治溶藻弧菌病的减毒活疫苗,具有一定的应用前景。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S941.42

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘文竹;李红月;范学亭;周永灿;王世峰;谢珍玉;;环境因素对溶藻弧菌HN08155生物膜形成的影响[J];海南大学学报(自然科学版);2015年04期
2 崔俊生;姜盼;孙冰清;陶敏捷;薛亚飞;丁云竹;吴金节;胡青海;;鸭疫里氏杆菌CH3株ompA基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究[J];中国兽医科学;2015年11期
3 曾德乾;冯娟;徐力文;苏友禄;郭志勋;;海水养殖鱼哈维弧菌分离株的耐药谱型分析[J];中国水产科学;2015年01期
4 庞欢瑛;周泽军;丁燏;黄郁葱;吴灶和;简纪常;;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析[J];生物技术通报;2014年06期
5 庞欢瑛;周泽军;丁燏;黄郁葱;吴灶和;简纪常;;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性[J];广东海洋大学学报;2014年03期
6 高玉龙;冯娟;苏友禄;徐力文;郭志勋;;广东阳江市闸坡网箱养殖区弧菌耐药性分析[J];海洋环境科学;2014年01期
7 陈振鸿;王丽;张义全;冯娇;杨瑞馥;常德;安莉;刘长庭;周冬生;;副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用[J];南方医科大学学报;2014年01期
8 房沙沙;林壮炳;邱礽;王劭雯;刘晓;;粤东养殖区分离的2株海洋弧菌及其胞外产物对皱纹盘鲍致死毒性的初步分析[J];海洋科学;2013年08期
9 巩华;黄志斌;;弧菌病疫苗研究开发及其使用效果影响因素[J];广东饲料;2012年01期
10 谢翎;陈红梅;尹翀;项小燕;黄勃;;大肠杆菌DH5α菌株感受态制备及转化率变化研究[J];生物学杂志;2011年04期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 曹诗洋;鼠疫菌Ⅲ型分泌系统蛋白YscI-YscF相互作用的研究以及蛋白质分泌组新毒力因子的鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2017年
2 张智慧;模型动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗的免疫应答[D];华东理工大学;2013年
3 杨慧盈;一、鼠疫菌毒力相关蛋白与人蛋白相互作用的初步研究 二、鼠疫菌Ⅲ型分泌系统内蛋白相互作用及LcrG调控的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
4 钱荣华;溶藻弧菌主要毒力相关基因的克隆、表达及其免疫原性研究[D];浙江大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 孙尚琛;超声波介导质粒pUC19转化大肠杆菌DH5α感受态细胞转化方法及机制的研究[D];兰州理工大学;2016年
2 张燕飞;溶藻弧菌双组份调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其交叉免疫保护性研究[D];广东海洋大学;2015年
3 陈臻;细菌V型分泌系统中BamA POTRA3-5-BamB蛋白复合物结构和功能研究[D];安徽大学;2015年
4 周泽军;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的功能研究[D];广东海洋大学;2013年
5 贺红红;溶藻弧菌双精氨酸蛋白转运系统和六型分泌系统的研究[D];华东理工大学;2011年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 华颖;孙琦;王湘雨;杜艳丽;邵娜;张其威;赵卫;万成松;;肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建[J];南方医科大学学报;2015年11期
2 张真真;董宏标;段亚飞;李卓佳;文国樑;郑忠明;张家松;;有机碳驱动的人工基质表面菌群结构组成及其动态变化[J];海洋环境科学;2015年05期
3 胡雪鹤;刘彩红;阎浩;祁超;;胸膜肺炎放线杆菌Δlip40回复突变株的构建及鉴定[J];华中师范大学学报(自然科学版);2015年04期
4 胡兴娟;沈飚;江玲丽;王莲芳;滕跃;朱竹君;;海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP检测方法的建立[J];河南农业科学;2014年10期
5 郑风荣;陈皓文;;2012年和2013年中国海洋微生物学成果分析[J];广西科学院学报;2014年02期
6 张丽霞;贾海燕;;一种简便高效大肠杆菌感受态细胞制备方法[J];江苏农业科学;2013年12期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 赵向娜;鼠疫耶尔森氏菌噬菌体Yep-phi基因组研究及其受体鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年
2 刘玉林;斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白的鉴定及定位研究[D];华中农业大学;2012年
3 柯跃华;鼠疫菌蛋白YpkA和人蛋白VASP的相互作用和功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 常云胜;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscB基因的功能研究及vscD基因的克隆表达[D];广东海洋大学;2018年
2 宋大伟;溶藻弧菌T3SS效应蛋白Va1686基因克隆及其生物学功能研究[D];广东海洋大学;2018年
3 方雨诗;水稻细菌性褐条病菌RS-2 Ⅳ型分泌系统致病机制的研究[D];浙江大学;2017年
4 陈树河;H_2S在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)抗氧化系统中的作用及其与NO的相互调节[D];广东海洋大学;2017年
5 聂利波;枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建[D];河南科技大学;2017年
6 邱明生;溶藻弧菌HY9901Ⅲ型分泌系统效应蛋白的功能研究[D];广东海洋大学;2016年
7 周维;体外诱导哈维氏弧菌对喹诺酮类药物耐药机制的研究[D];广东海洋大学;2016年
8 李静;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统“针状样”毒力装置相关基因功能的研究[D];广东海洋大学;2016年
9 程海燕;溶藻弧菌毒力相关基因toxR、acfA的功能研究[D];广东海洋大学;2014年
10 薛丽丽;溶藻弧菌摄铁系统相关基因的克隆、表达及功能分析[D];广东海洋大学;2014年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁海兰;苏建;胡鲲;曹海鹏;杨先乐;;环境因子对水霉菌生物膜形成的影响[J];微生物学通报;2014年09期
2 卢凤英;苗双;倪欣涛;屠晶;俞慧;姜盼;潘玲;胡青海;;鸭疫里默氏杆菌TonB依赖性受体TbdR2基因缺失株的构建[J];中国家禽;2013年16期
3 苗双;卢凤英;屠晶;倪欣涛;胡青海;;一株鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的鉴定[J];中国兽医科学;2013年07期
4 贾春红;李淑芳;张继东;;3株方斑东风螺病原性弧菌对35种常用抗菌药物的敏感性试验[J];广东海洋大学学报;2013年03期
5 邓传燕;李色东;陈贺;黄郁葱;;凡纳滨对虾发光病病原的分离鉴定及防治措施[J];江西水产科技;2013年02期
6 周永强;李登峰;彭姣;Ester Johanna Shikongo;陈炯;刘联国;顾晓英;;养殖三疣梭子蟹体内哈维氏弧菌的分离与致病性鉴定[J];应用海洋学学报;2013年02期
7 王春艳;阎斌伦;;连云港市赣榆县水产养殖环境中哈氏弧菌耐药性研究[J];淮海工学院学报(自然科学版);2013年01期
8 陈政强;姚志贤;林茂;常建波;;半滑舌鳎病原菌轮虫弧菌(Vibrio rotiferianus)的分离与鉴定[J];生物技术通报;2012年06期
9 王瑞旋;耿玉静;冯娟;王江勇;;杂色鲍哈维弧菌耐药质粒的鉴定和分析[J];南方水产科学;2012年02期
10 张晓君;毕可然;阎斌伦;秦蕾;梁立国;;矛尾复鰕虎鱼病原哈氏弧菌的鉴定及特异性检测方法的建立[J];水产科学;2011年12期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张雪利;红笛鲷重组激活基因克隆及表达分析[D];广东海洋大学;2012年
2 辛瑞晓;哈维氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表达及免疫原性的研究[D];中国海洋大学;2011年
3 王妍妍;Cpx双组分调控系统在鳗弧菌应对环境压力和致病性中的作用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王若纯;刘锦杨;张凯雯;王军;张耀东;;关于溶藻弧菌在青岛水域分布、对人体影响及反制措施的研究[J];地球;2017年09期
2 徐先栋;谢珍玉;王世锋;宣雄智;周永灿;;致病溶藻弧菌脂多糖对点带石斑鱼毒性和免疫原性的影响[J];海洋科学;2010年03期
3 陈强;鄢庆枇;马甡;;溶藻弧菌致病性研究进展[J];海洋科学;2006年08期
4 陈偿,胡超群,张吕平,沈琪,陈晓燕,任春华;用RAPD技术对养殖环境溶藻弧菌遗传多样性的研究[J];热带海洋学报;2002年04期
5 聂忠学,张谷若,聂晶,温同安;溶藻弧菌的生化特征与中毒表现[J];贵州医药;1995年04期
6 赵晓娟;汪琦;王紫薇;刘莉;韩笑;曹佳悦;曾静;;海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较[J];中国食品卫生杂志;2017年06期
7 王蓓;黄郁葱;汤菊芬;;溶藻弧菌生物被膜的特性与相关基因的研究[J];安徽农学通报(下半月刊);2009年08期
8 陈寅儿,金珊,王国良;鲈鱼溶藻弧菌病的血液生理生化指标研究[J];台湾海峡;2005年01期
9 董海新,鞠爱萍;溶藻弧菌引起肠道感染1例[J];济宁医学院学报;2001年04期
10 谢扬;李鹏;李肖莉;雷宝明;;溶藻弧菌急性胃肠炎3例报告[J];中国人兽共患病学报;2007年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 罗鹏;苏婷;胡超群;任春华;;溶藻弧菌的普通溶血现象及相关基因定位[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 张建城;徐永平;曹振辉;李振;宋亚雄;徐乐;王丽丽;尹婷慧;;两株分离的溶藻弧菌噬菌体及其在海参疾病预防中的应用[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
3 吴灶和;曹剑香;简纪常;鲁义善;;溶藻弧菌外膜蛋白对凡纳滨对虾免疫功能的影响[A];中国水产学会第五届青年学术年会摘要集[C];2004年
4 叶央芳;夏梦洁;母昌考;李荣华;王春琳;;三疣梭子蟹对溶藻弧菌感染的急性代谢反应[A];第十九届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];2016年
5 陈立明;庞欢瑛;鲁义善;吴灶和;简纪常;;三种弧菌交叉抗原的免疫效果研究[A];中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编[C];2013年
6 王蓓;吴灶和;简纪常;鲁义善;蔡双虎;汤菊芬;;8溶藻弧菌HY9901生物被膜的特性与相关基因的研究[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
7 邬长祥;吴灶和;简纪常;鲁义善;;不同地区溶藻弧菌的分子分型及毒力基因的分布特征研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8 汤学敏;郑江;鄢庆枇;黎中宝;;灭活溶藻弧菌适配子的SELEX筛选研究[A];2012年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2012年
9 罗鹏;刘秋婷;田雨顺;胡超群;;溶藻弧菌噬菌体VP670基因组及内溶素/穿孔素基因功能研究[A];2017年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2017年
10 丁燏;简纪常;吴灶和;;凡纳滨对虾高位池优势菌群的分离纯化和部分生物学特性的研究[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 钱荣华;溶藻弧菌主要毒力相关基因的克隆、表达及其免疫原性研究[D];浙江大学;2007年
2 孙星;养殖文蛤溶藻弧菌、颉颃菌的筛选与鉴定及其颉颃物质的研究[D];南京农业大学;2012年
3 高霞婷;溶藻弧菌群体感应系统转录因子的筛选和鉴定[D];华东理工大学;2017年
4 张建城;溶藻弧菌噬菌体特性及其防控刺参感染的研究[D];大连理工大学;2017年
5 盛丽莉;病原细菌溶藻弧菌和铜绿假单胞菌中致病相关系统的调控机制[D];华东理工大学;2012年
6 贾爱荣;大菱鲆4种免疫相关基因的克隆、表达分析及溶藻弧菌溶血素的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 刘越;生物功能化碳纳米管的合成、表征及分析应用[D];南开大学;2009年
8 芮浩鹏;从鱼到人:主要病原性弧菌的致病机理研究[D];华东理工大学;2011年
9 刘剑飞;溶藻弧菌Quorum Sensing信号分子N-acyl homoserine lactones的检测及其功能调控研究[D];青岛大学;2017年
10 顾丹;溶藻弧菌中σ~E和群体感应系统介导的毒力调控机制[D];华东理工大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 常云胜;溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscB基因的功能研究及vscD基因的克隆表达[D];广东海洋大学;2018年
2 宋大伟;溶藻弧菌T3SS效应蛋白Va1686基因克隆及其生物学功能研究[D];广东海洋大学;2018年
3 林源;溶藻弧菌FadR蛋白结构和功能的研究[D];福建农林大学;2015年
4 刘望;Qrr1-5对溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶合成机制的研究[D];陕西科技大学;2018年
5 杨金芳;溶藻弧菌Qrr1-5的分子克隆及其生理功能的鉴定[D];陕西科技大学;2017年
6 刘阳;副溶血弧菌和溶藻弧菌快速检测体系的建立与应用[D];福建农林大学;2012年
7 刘春晓;溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾常用免疫指标、脂肪酸含量及基因表达差异的影响[D];广东海洋大学;2014年
8 魏霜;溶藻弧菌及其毒力相关基因的检测[D];暨南大学;2013年
9 刘文竹;tssJ基因对溶藻弧菌运动性和生物膜形成的影响[D];海南大学;2015年
10 修鹏远;海洋芽孢杆菌源脂肽CLPs抑制溶藻弧菌运动性分子机制研究[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2017年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026