收藏本站
《广东海洋大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

金钱鱼胰岛素样生长因子(IGF)的克隆及雌二醇对其表达的影响

张克伟  
【摘要】:胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)是由肝脏分泌的一种肽类激素,可促进细胞的分化和有丝分裂,对动物生长具有非常重要的作用。影响IGF合成和分泌的因素有很多,在哺乳动物,雌二醇(E2)也可以通过雌激素受体(Estrogen Receptors,ERs)调节IGF的合成与分泌。本研究克隆了两种包含ORF的金钱鱼IGF基因c DNA序列((IGF-1和IGF-2);采用RT-PCR方法检测了IGFs在11种组织(垂体、胃、下丘脑、性腺、肾脏、肝脏、肠、脾、鳃、心和肌肉)中的表达;应用荧光定量PCR检测了金钱鱼胚胎9个不同发育阶段(4细胞期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、眼囊形成期、尾牙期、晶体形成期和肌肉效应期),以及性腺不同发育时期(II期、II期和IV期)IGFs的表达水平,检测了注射雌二醇(E2,4ug/g体重)对垂体GH、肝脏IGFs、ERs和GHRs mRNA表达的影响,以及E2、广谱型雌激素受体拮抗剂(Fulvestrent)、α型雌激素受体拮抗剂(MPP)、β型雌激素受体拮抗剂(PHTPP)离体(0.1、1和10μM)孵育对肝脏IGFs、ERs和GHRs mRNA表达的影响。主要结果如下:1、金钱鱼IGF基因克隆及序列分析克隆获得金钱鱼两种IGF亚型,其中IGF-1的开放阅读框(Open reading frame,ORF)为561bp,编码个186氨基酸,包含15个结合蛋白结合位点、四个poly核酸结合位点、一个信号肽区域和一个家族活性肽区域;IGF-2的ORF为648bp,编码215个氨基酸,包含14个结合蛋白结合位点、五个poly核酸结合位点、一个信号肽区域和一个家族活性肽区域。两种IGF氨基酸序列同源性比对表明,金钱鱼IGF具有较高的保守性。进化树分析发现,金钱鱼IGF-1和IGF-2与鲈形目中花鲈(Lateolabrax maculatus)的亲缘关系最近,分别达95%和91%。2、金钱鱼类IGF基因的时空表达在所检测的11种组织中,IGF-1 mRNA在雌、雄金钱鱼肝脏中高表达,而IGF-2mRNA在雌、雄金钱鱼所有组织中均有表达;在胚胎发育各个发育阶段均能检测到IGF-1 mRNA表达,且随胚胎发育表达水平持续上升,而IGF-2mRNA在受精后至囊胚期表达极低,原肠胚和神经胚期表达上调,眼囊形成期表达开始下调。雌、雄鱼肝脏中IGF-1表达随性腺成熟逐渐升高,而IGF-2mRNA的表达呈相反趋势。3、腹腔注射E2对金钱鱼GH/IGF mRNA表达的影响腹腔注射4ug/g体重E2 6h后,雌性金钱鱼垂体GH mRNA的表达显著上调,但对雄鱼GH mRNA的表达无显著影响;雌鱼IGF-1mRNA显著上调,而IGF-2mRNA显著下调,雄鱼肝脏中IGFs mRNA均显著上调。4、E2离体孵育对肝脏IGFs、ERs和GHRs mRNA表达的影响不同剂量的(0.1、1和10μM)E2离体孵育金钱鱼肝脏碎片6 h,发现E2以明显剂量依存效应显著促进雌鱼IGF-1和ERα,抑制IGF-2和ERβ1 mRNA的表达,而对ERβ2和GHRs mRNA的表达无显著影响;在雄鱼,E2以明显剂量依存效应显著促进IGFs,ERα,抑制ERβ1 mRNA的表达,但对ERβ2和GHRs mRNA无显著影响。5、雌激素受体拮抗剂离体孵育对肝脏IGFs、ERs和GHRs mRNA表达的影响广谱型雌激素受体拮抗剂Fulvestrent能明显抑制雌、雄鱼肝脏中IGFs和ERs mRNA的表达(P0.05),对GHRs无显著作用。α型雌激素受体拮抗剂MPP显著抑制雌鱼肝脏中IGF-1和ERα、促进IGF-2和ERβ1 mRNA的表达(P0.05),抑制雄鱼IGFs和ERα、促进ERβ1 mRNA的表达。β型雌激素受体拮抗剂PHTPP抑制雌鱼肝脏中IGFs和ERβ,促进ERαmRNA的表达,但促进雄鱼IGF-2和ERαmRNA的表达,抑制IGF-1和ERβmRNA的表达。结果表明,IGF-1、IGF-2在金钱鱼生长、胚胎发育及性腺发育中发挥重要作用。E2可通过GH/IGF轴调控IGF的表达,也可通过ER调控IGF的表达。此外,E2对雌、雄鱼IGF-1的调控作用通过ERα和ERβ共同介导,而E2对雌、雄鱼IGF-2的调控通过不同通路,雌鱼通过ERβ1介导,而雄鱼通过ERα介导。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S917.4

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 马细兰;张勇;陈勇智;周立斌;;性类固醇激素E_2、MT对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌、雄生长差异的影响[J];海洋与湖沼;2015年06期
2 林权卓;沈卓坤;杨宪宽;王树启;赵会宏;;双棘黄姑鱼IGF2基因克隆及其在卵巢发育中的作用研究[J];广东农业科学;2015年03期
3 郁建锋;李建林;徐建荣;卢祥云;柏洁;顾志良;;鳡胰岛素样生长因子1基因的克隆及其组织特异性表达分析[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2012年03期
4 高风英;卢迈新;黄樟翰;朱华平;可小丽;;荷那龙罗非鱼两种胰岛素样生长因子基因(IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ)的克隆、序列分析及组织表达特征[J];农业生物技术学报;2012年02期
5 张俊玲;施志仪;程琦;翟万营;;IGF-Ⅰ及其受体基因在牙鲆胚胎发育过程中的表达图式[J];中国水产科学;2011年06期
6 赵会宏,刘晓春,刘付永忠,王云新,林浩然;斜带石斑鱼雌鱼卵巢发育与血清性类固醇激素的生殖周期变化[J];中山大学学报(自然科学版);2003年06期
7 华益民,林浩然;草鱼IGF-ⅠcDNA的克隆和在原核生物中的表达[J];动物学报;2001年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 钟欢;GH/IGF轴相关基因在不同倍性鲫鲤中的表达及与生长的相关性研究[D];湖南师范大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 马文阁;黄颡鱼GH/IGF生长轴基因的序列特征和两性表达差异分析[D];华中农业大学;2016年
2 吴波;雌雄金钱鱼生长性能、消化酶活性及生长激素基因表达的研究[D];广东海洋大学;2013年
3 钱焜;花鲈类胰岛素生长因子及结合蛋白基因的克隆与表达调控[D];中国海洋大学;2013年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗明坤;赵金良;Thammaratsuntorn Jeerawat;李传阳;魏继海;赵永华;;尼罗罗非鱼卵巢发育过程中性类固醇激素与卵黄蛋白原含量变化及Vtg mRNA表达特征[J];中国水产科学;2015年06期
2 WEN Haishen;QI Qian;HU Jian;SI Yufeng;HE Feng;LI Jifang;;Expression Analysis of the Insulin-Like Growth Factors Ⅰ and Ⅱ During Embryonic and Early Larval Development of Turbot(Scophthalmus maximus)[J];Journal of Ocean University of China;2015年02期
3 林权卓;沈卓坤;杨宪宽;王树启;赵会宏;;双棘黄姑鱼IGF2基因克隆及其在卵巢发育中的作用研究[J];广东农业科学;2015年03期
4 易少奎;高泽霞;赵鸿昊;赵玉华;王卫民;;团头鲂生长相关基因在不同发育时期生长轴组织的表达分析[J];水生生物学报;2015年01期
5 黄文;杨宪宽;徐新;肖玲;李水生;赵会宏;张海发;张勇;林浩然;;激素诱导斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)雄性化的研究[J];海洋与湖沼;2014年06期
6 汪娣;田永胜;齐文山;温海深;陈松林;;温度对半滑舌鳎生长及性类固醇激素水平的影响[J];水产学报;2014年11期
7 周春雪;蒋霞云;陈杰;邹曙明;;草鱼胰岛素样生长因子1受体基因cDNA全序列的克隆及功能[J];中国水产科学;2014年03期
8 侯志帅;温海深;尹相菡;;壳聚糖-HCG缓释制剂对鱼类生殖内分泌机能的影响[J];水生生物学报;2014年01期
9 孙鹏;吴志昊;尤锋;李军;;养殖牙鲆性类固醇激素的周年变化[J];海洋渔业;2013年04期
10 陈圣毅;刘新富;徐永江;刘芝亮;柳学周;史宝;王妍妍;;七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析[J];水产学报;2013年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 张克伟;金钱鱼胰岛素样生长因子(IGF)的克隆及雌二醇对其表达的影响[D];广东海洋大学;2018年
2 张宏叶;河川沙塘鳢GH/IGF轴相关基因克隆、表达分析及生长性状相关SNP位点筛查[D];南京师范大学;2018年
3 胡沈玉;黄姑鱼IGF家族相关基因克隆及在不同赖氨酸水平下表达[D];浙江海洋大学;2018年
4 王春蕾;花鲈IRF3基因表达与功能分析[D];上海海洋大学;2017年
5 冯静;白浅灰链霉菌对聚乙烯降解效果研究及降解酶的基因克隆[D];四川师范大学;2016年
6 常会婷;军曹鱼类胰岛素生长因子-I的克隆、表达及其原核表达载体构建[D];广东海洋大学;2015年
7 张沛;花鲈生长代谢相关基因克隆与盐度调控生理机制[D];中国海洋大学;2015年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙慧玲;潘玉琴;王书奎;;IGF2基因组印记作用与肿瘤发生关系的研究进展[J];临床检验杂志;2014年02期
2 徐薇;庄志雄;杨建平;杨琳清;许玉玲;张文娟;曾怡;;细胞复制衰老过程中IGF2R基因表达及H3组蛋白修饰的变化[J];四川大学学报(医学版);2014年01期
3 杨慧荣;赵会宏;陈彦珍;;胰岛素样生长因子IGF系统与鱼类性腺的研究进展[J];动物学杂志;2013年02期
4 苏胜彦;董在杰;袁新华;梁政远;曲疆奇;张建桥;刘伟;马良骁;徐跑;;鲤IGF2b基因内含子的克隆、基因组序列分析及慢病毒载体构建[J];中山大学学报(自然科学版);2012年02期
5 高风英;卢迈新;黄樟翰;朱华平;可小丽;;荷那龙罗非鱼两种胰岛素样生长因子基因(IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ)的克隆、序列分析及组织表达特征[J];农业生物技术学报;2012年02期
6 张俊玲;施志仪;付元帅;程琦;;牙鲆变态中IGF-I基因表达及甲状腺激素对其的调节作用[J];水生生物学报;2011年02期
7 张营;郁建锋;杨丽;王星果;顾志良;;家鸽Caveolin-1基因全长cDNA的克隆、序列和组织表达分析[J];动物学研究;2010年05期
8 张俊玲;施志仪;程琦;贾亮;;牙鲆变态中两种HSP90基因的不同表达及其与甲状腺激素的关系[J];水产学报;2010年10期
9 薛茂云;胡承俊;张营;郁建锋;卢祥云;徐建荣;顾志良;;松江鲈β-肌动蛋白基因全长cDNA的克隆和序列分析(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年06期
10 陈雪峰;杨国梁;俞菊华;唐永凯;李建林;李红霞;;吉富罗非鱼IGF2基因分离及其单核苷酸多态性与体型、增重相关性[J];动物学杂志;2010年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张俊娣;GnRH拮抗剂方案对血清及卵泡液中IGF-Ⅰ,IGFBP-Ⅰ及性激素水平的影响[D];河北医科大学;2015年
2 郭春燕;鸡胚胎外周IGFs水平变化规律及IGF-2基因多态性与中后期发育关联性的研究[D];扬州大学;2007年
3 彭凤兰;金鱼胰岛素样生长因子2基因克隆与组织表达[D];湖南师范大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 奈嫚嫚;刘琰;周仲元;徐一鸣;李根霞;;VEGF和IGF-Ⅰ在子宫内膜异位症患者血清中的表达及临床意义[J];现代生物医学进展;2017年02期
2 刘莉;邓小艳;胡雅君;邓晶;罗菁;;稽留流产患者绒毛凋亡情况和IGF-Ⅱ表达情况分析[J];中国优生与遗传杂志;2016年04期
3 蔡林刚;李启驹;;结直肠癌发病研究进展:胰岛素抵抗和IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ水平的变化与结直肠癌[J];中国普外基础与临床杂志;2015年04期
4 叶英;;IGF-Ⅱ、PCNA在子宫肌瘤患者诊断中的意义[J];中国当代医药;2013年08期
5 秦文;庄丽维;李滨;凌霄华;王立国;于欣;;IGF-Ⅰ调节血脂异常在结直肠腺瘤发生和恶变中的作用[J];现代生物医学进展;2013年11期
6 于靳;周林玉;;IGF-Ⅰ及其受体在泌尿系肿瘤中的研究进展[J];医学综述;2012年06期
7 范蕊;马楠;;子宫内膜异位症患者血清中VEGF和IGF-Ⅰ的表达及其相关性[J];中国妇幼保健;2012年21期
8 范彦夫;张志杰;张志英;包玉双;任秀乾;齐建祥;韩秀红;杜淑华;邵伟然;;急性冠状动脉综合征患者IGF轴的改变[J];齐齐哈尔医学院学报;2012年13期
9 马晖;吴凯;米沙;;IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR在肾细胞癌中的表达和临床意义[J];中国肿瘤外科杂志;2012年06期
10 周飞;程小尧;王滟;迟殊;;IGF-Ⅰ与妊娠期高血压疾病的关系[J];四川医学;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周明亮;綦松智;张翔宇;王琪;吴登俊;杨平贵;;凉山半细毛羊IGF-Ⅰ基因的表达规律研究[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
2 丁玉华;李德发;尹靖东;朴香淑;;色氨酸对猪原代肝细胞IGF-Ⅰ分泌及表达的调控[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(上册)[C];2004年
3 谭琳蓥;刘慧荣;吴焕淦;江彬;黄文燕;张必萌;王晓梅;;IGF与肠纤维化的关系及针灸对其调节的研究[A];全国针法灸法临床与科研学术研讨会暨脊柱病研究新进展论文汇编[C];2005年
4 刘文生;苏莲娇;李美娟;唐蕾;李林;潘庆;;黄颡鱼IGF-Ⅰ基因cDNA的克隆及原核表达[A];2014年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2014年
5 邓志宏;;豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜IGF—1/IGF—2表达水平的动态变化[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
6 李源;王金玉;王慧华;侯启瑞;施会强;;京海黄鸡IGFⅡ基因第二外显子多态性的分析及对繁殖性能的影响[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 隋春华;陈奕;余娇;赵丽娟;陈鑫;陆颖理;;2型糖尿病患者IGF-Ⅱ、C肽、骨密度变化的临床研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
8 黄燕华;冯定远;;不同纤维素酶对鹅血清生化指标、代谢激素和不同组织IGF-Ⅰ含量的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
9 曹果清;王效京;王松柏;杨晓奋;贾静敏;高鹏飞;郭晓红;李步高;;IGF-Ⅰ基因第1内含子微卫星多态性对山西白猪体重和体尺性状的影响[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
10 方翟;吴建平;杨联;徐建峰;张利平;;IGF基因多态性及其与绵羊生产性能相关性研究[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 亓玉青;IGF-Ⅰ、醛固酮对成纤维细胞的作用及对弹性蛋白表达的调节及其机制探讨[D];天津医科大学;2015年
2 荣敏;水貂IGF-Ⅰ基因的克隆、表达、功能检验及多态分析[D];中国农业科学院;2010年
3 李彦;模拟微重力环境中IGF-Ⅰ对人牙周膜干细胞骨向分化的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 高飞;胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)在前列腺癌非激素依赖形成中的作用及其机制研究[D];重庆医科大学;2011年
5 李明玉;硬骨鱼类IGF信号通路两个重要基因的结构和功能研究[D];中国海洋大学;2010年
6 卢强;EGCG的抗前列腺癌作用与IGF信号通路系统的关系及其机制研究[D];中南大学;2010年
7 赵天宇;IGF-Ⅰ对肝硬化大鼠肠粘膜屏障保护作用的研究[D];大连医科大学;2016年
8 周明亮;绵羊IGFBP家族基因克隆和IGF系统基因的时空表达谱及IGF-Ⅰ与体重性状的相关分析研究[D];四川农业大学;2009年
9 张金玉;牛和鹿IGF-Ⅰ基因可变剪接类型及不同转录子表达规律研究[D];吉林大学;2012年
10 吴瑞瑾;IGF-Ⅱ与MMP-9在原因不明不孕症患者子宫内膜的表达及其性激素调控[D];浙江大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张克伟;金钱鱼胰岛素样生长因子(IGF)的克隆及雌二醇对其表达的影响[D];广东海洋大学;2018年
2 张秀杰;IGF-Ⅰ和Ki-67在乳腺癌组织中的表达及其临床意义[D];泰山医学院;2013年
3 宋晓华;IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ在胃癌中的表达及临床意义[D];青岛大学;2008年
4 杨巍;牛初乳中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的分离与纯化[D];天津商业大学;2008年
5 安琪儿;五种IGF信号通路相关基因的转基因斑马鱼的构建[D];中国海洋大学;2014年
6 郑孝亮;大黄鱼IGF-Ⅰ基因的克隆及原核表达研究[D];浙江海洋学院;2012年
7 李莎莎;慢性阻塞性肺疾病患者IGF-Ⅰ水平变化及其与肺功能、骨密度的关系[D];南昌大学;2016年
8 褚冰莹;《IGF规则》中介词短语的汉译实践报告[D];大连海事大学;2016年
9 高伟;IGF-Ⅱ在乳腺癌中的表达及其与细胞增殖的关系[D];大连医科大学;2008年
10 贾慧英;辛伐他汀对激素性骨质疏松预防效果的评价及其对IGF-Ⅰ的影响[D];山西医科大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026