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《广东海洋大学》 2018年
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马氏珠母贝棱柱层相关基质蛋白基因的克隆及功能研究

范闪闪  
【摘要】:贝壳基质蛋白(Shell Matrix Proteins,SMPs)是贝壳形成的主要参与者和功能执行者,在有机框架构建和矿物沉积过发挥重要作用。本课题组前期通过对马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)贝壳基质蛋白质组分析,获得了棱柱层SMPs。本研究对其中的5个SMPs基因进行全长克隆,并通过q RT-PCR、原位杂交(ISH)、RNAi和原核表达技术进行功能验证。结果如下:1、β-N-乙酰-己糖胺酶(Beta-hexosaminidase/Beta-N-acetylhexosaminidase,HEX)属于糖苷水解酶20家族(GH20),是几丁质代谢的关键水解酶。几丁质作为有机框架主要成分,其代谢在贝壳矿化中发挥重要作用。本研究克隆获得2个β-N-乙酰-己糖胺酶基因Pm HEX和Pm HEXL。Pm HEX全长3 813 bp,编码1 141个氨基酸;Pm HEXL全长2 760bp,编码774个氨基酸;二者均含有两个典型的GH20和GH20b结构域和一个碳水化合物结合结构域(CHB-HEX)。QRT-PCR分析表明Pm HEX和Pm HEXL在外套膜边缘区(ME)和套膜区(MP)均显著高表达,ISH检测显示Pm HEX和Pm HEXL均主要定位于边缘区外褶和套膜区的外侧上皮细胞。RNAi干扰后,Pm HEX在外套膜边缘区和套膜区的表达量均显著下调(P0.05);且贝壳棱柱层和珍珠层微观结构都出现不同程度的紊乱。因此,Pm HEX参与了贝壳棱柱层和珍珠层的形成。2、几丁质结合蛋白在与几丁质特异性结合、钙化调控等过程发挥重要作用。通过克隆获得马氏珠母贝几丁质结合蛋白(Chitin binding protein,CBP)Pm CBP基因全长序列6 367 bp,编码2 044个氨基酸,包含20个典型的Cht BD2结构域(CBDs),且Cht BD2结构域在物种间具有较高的保守性。QRT-PCR分析表明Pm CBP在外套膜套膜区表达量最高(P0.05);ISH分析显示Pm CBP基因主要分布于外套膜套膜区外侧上皮细胞。RNAi干扰后,Pm CBP在外套膜套膜区的表达量显著下调,且贝壳珍珠层结构生长紊乱。相关性分析发现Pm CBP的表达水平与壳重和壳长呈正相关(P0.05)。因此,Pm CBP参与了贝壳珍珠层的形成。3、本研究克隆获得马氏珠母贝含表皮生长因子样结构域的蛋白(Epidermal growth factor-like domain-containing protein,EGFCP)Pm EGFCP(PU12)基因全长1 394 bp,编码363个氨基酸,具有2个保守的表皮生长因子样结构域(Epidermal growth factor-like domain,EGF)、一个透明带结构域(Zona pellucida domain,ZP)。QRT-PCR分析表明Pm EGFCP在外套膜边缘区和套膜区著高表达(P0.05);ISH检测显示Pm EGFCP主要定位于边缘区外褶外侧和中褶内侧以及套膜区外侧上皮细胞。RNAi干扰后Pm EGFCP在边缘区的表达量显著下调,且贝壳棱柱层结构生长紊乱,珍珠层正常。因此,Pm EGFCP参与了贝壳棱柱层的形成。通过构建p ET32a-Pm EGFCP的原核表达载体,成功诱导表达了Pm EGFCP重组蛋白,Western blot检测其带有His标签,且与预测分子量大小一致。经复性浓缩冻干获得3mg的Pm EGFCP重组蛋白。4、本研究克隆获得马氏珠母贝没有功能注释的壳基质蛋白基因Pm-PNU7全长序列797 bp,编码145个氨基酸,具有特殊的“KGG”重复序列和富含天冬氨酸(Asp)序列“DDDDDDHDD”。QRT-PCR分析表明Pm-PNU7基因在外套膜边缘区和套膜区显著高表达(P0.05);ISH检测显示Pm-PNU7主要定位于边缘区外褶外侧和内侧上皮细胞、中褶内侧上皮细胞以及套膜区外侧上皮细胞。RNAi干扰后,Pm-PNU7在外套膜边缘区和套膜区的表达量均显著下调,贝壳棱柱层和珍珠层微观结构均出现不同程度的紊乱。因此,Pm-PNU7参与了贝壳棱柱层和珍珠层的形成。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S917.4

【参考文献】
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1 朱文杰;黄桂菊;张东玲;范嗣刚;刘宝锁;毕晓敏;喻达辉;;合浦珠母贝表皮生长因子样(EGF-like)基因的克隆与表达分析[J];水产学报;2015年05期
2 屈明博;刘田;陈磊;陈琦;杨青;;昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶研究进展[J];中国农业科学;2014年07期
3 陈展歌;陈锡贤;杨梦琳;蔡洪敏;李黄金;;昆明鼠肠激酶轻链的原核表达、复性与纯化[J];生物技术;2014年01期
4 张洁;陈志森;陈军;柯才焕;游伟伟;;杂色鲍后消化道生长相关基因HdEGF1的研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2013年04期
5 胡莹莹;王琦;陈瑛;;表皮生长因子及其作用机制[J];哈尔滨师范大学自然科学学报;2013年03期
6 王凡;胡阳春;韩锋;徐源;杨明;彭岗;严雄;隋建美;;表皮生长因子对脑损伤患者骨折愈合的影响[J];重庆医学;2012年26期
7 师尚丽;焦钰;杜晓东;张裕俊;;马氏珠母贝外套膜细胞的超微结构观察[J];广东农业科学;2012年08期
8 白志毅;汪桂玲;李家乐;;三角帆蚌外套膜表达的免疫相关基因筛选[J];淡水渔业;2011年05期
9 于冲;夏海华;曲晓军;;表皮生长因子的结构功能及其重组表达的国内外进展[J];黑龙江科技信息;2011年24期
10 施倩;刘鹏飞;刘田;杨青;徐晓勇;;含氟N,N'-二芳基异硫脲的合成及昆虫β-N-乙酰己糖胺酶抑制活性研究[J];现代农药;2011年01期
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1 黄荣莲;珍珠贝贝壳蛋白组学及胁迫环境下的应激调控网络[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
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1 梁金连;马氏珠母贝collagen Ⅵ(COLⅥ)基因的克隆和功能研究[D];广东海洋大学;2016年
2 王德清;合浦珠母贝几丁质酶基因与章鱼胺受体基因的克隆、表达与功能分析[D];上海海洋大学;2016年
3 刘晓丽;马氏珠母贝外套膜不同区域差异矿化基因的克隆及功能研究[D];广东海洋大学;2015年
4 董冰冰;马氏珠母贝珍珠层基质蛋白基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2015年
5 曹丽军;β-hex酶在沙红桃果实软化中作用的研究[D];西北农林科技大学;2015年
6 孔玮;合浦珠母贝外套膜细胞培养及其矿化功能的研究[D];清华大学;2015年
7 闫芳;马氏珠母贝珍珠层形成相关基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2014年
【共引文献】
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1 夏琳生;查安生;;中医药对慢性萎缩性胃炎COX-2及相关信号通路的干预研究[J];中国中西医结合消化杂志;2015年11期
2 王雪云;刘芳;蒋大伟;韩志霞;马金玉;李克宇;张彬;许兰菊;;鸡肠上皮细胞原代培养与鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2015年21期
3 卢雪梅;黄演婷;金小宝;朱家勇;;重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化[J];生物技术;2015年05期
4 朱文杰;黄桂菊;张东玲;范嗣刚;刘宝锁;毕晓敏;喻达辉;;合浦珠母贝表皮生长因子样(EGF-like)基因的克隆与表达分析[J];水产学报;2015年05期
5 田荣荣;闫芳;杜晓东;焦钰;黄荣莲;王庆恒;邓岳文;;马氏珠母贝CyPB基因的克隆与表达分析[J];中国农学通报;2015年08期
6 闫芳;罗少杰;田群莉;焦钰;邓岳文;;马氏珠母贝外套膜中央膜与边缘膜荧光定量PCR分析中内参基因的筛选[J];广东海洋大学学报;2014年06期
7 廖杰;邓子辉;王录焕;张金英;薛辉;;胃癌和贲门癌患者外周血表皮生长因子和瘦素水平变化及临床意义[J];解放军医学院学报;2014年08期
8 刘欣欣;罗凯娅;葛端阳;潘宝平;;青蛤抗菌肽基因的克隆及其在组织间的表达分析[J];四川动物;2013年01期
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1 郑哲;基于多组学分析的马氏珠母贝矿化相关基因研究[D];广东海洋大学;2017年
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1 范闪闪;马氏珠母贝棱柱层相关基质蛋白基因的克隆及功能研究[D];广东海洋大学;2018年
2 罗少杰;马氏珠母贝外套膜不同区域的DNA甲基化差异及功能研究[D];广东海洋大学;2017年
3 潘晓艳;三种珍珠贝(蚌)转录组对比分析及部分功能基因研究[D];广东海洋大学;2017年
4 王芹;三角帆蚌碳酸酐酶基因与珍珠颜色和珍珠形成相关初步研究[D];上海海洋大学;2017年
5 梁金连;马氏珠母贝collagen Ⅵ(COLⅥ)基因的克隆和功能研究[D];广东海洋大学;2016年
6 郝瑞娟;马氏珠母贝磺基转移酶基因的克隆及功能分析[D];广东海洋大学;2016年
7 曹龙;褶纹冠蚌Kunitz型和Serpin B型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆与表达[D];南昌大学;2016年
8 王珍珍;合浦珠母贝IGFBP5、IGF2BP1及matrilin-1基因的克隆和表达分析[D];上海海洋大学;2016年
9 刘晓丽;马氏珠母贝外套膜不同区域差异矿化基因的克隆及功能研究[D];广东海洋大学;2015年
【二级参考文献】
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1 王琦;何毛贤;;合浦珠母贝实时定量PCR内参基因的稳定性比较[J];南方水产科学;2013年06期
2 张洁;陈志森;陈军;柯才焕;游伟伟;;杂色鲍后消化道生长相关基因HdEGF1的研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2013年04期
3 刘凤翊;杨青;;通过RNA干扰研究亚洲玉米螟乙酰己糖胺酶的潜在靶标性[J];农药学学报;2013年02期
4 钮利喜;李娇;吉雪雪;李霞;李彦军;杨斌盛;;重组人肠激酶轻链的原核表达、纯化及活性分析[J];微生物学通报;2012年11期
5 姬秋彦;毕研伟;肖红剑;闫玲梅;高丹丹;李智华;;重组肠激酶催化亚基在毕氏酵母中的高密度发酵、纯化及活性鉴定[J];云南大学学报(自然科学版);2012年S2期
6 张春香;罗学刚;童锦禄;蒋声海;符玉梅;张涛;杨道文;吉春花;;牛肠激酶催化亚基工程菌培养条件的探索与鉴定[J];现代生物医学进展;2011年09期
7 张安国;李太武;苏秀榕;袁秀堂;;不同花纹文蛤外套膜的显微及亚显微结构的初步研究[J];水产科学;2011年03期
8 朱文赫;郭志刚;刘红建;郭祥瑞;孙德军;;具有自激活切割活性肠激酶轻链基因设计、表达及活性研究[J];中国生化药物杂志;2011年01期
9 谢彩霞;邢巨斌;鲍宝龙;;牙鲆epigen基因的克隆以及在变态过程中的表达[J];上海海洋大学学报;2010年05期
10 麻建军;张殿昌;崔淑歌;姜晶晶;蒲含林;江世贵;;合浦珠母贝组织蛋白酶L2基因的特征与组织表达分析[J];中国水产科学;2010年04期
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1 张岑;合浦珠母贝贝壳形成相关蛋白及基因的研究[D];清华大学;2006年
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1 董冰冰;马氏珠母贝珍珠层基质蛋白基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2015年
2 滕子楠;斑马鱼chitinase-3基因的功能分析及其在早期胚胎免疫中的作用[D];中国海洋大学;2014年
3 闫芳;马氏珠母贝珍珠层形成相关基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2014年
4 郑哲;马氏珠母贝珍珠质形成microRNA的筛选和功能研究[D];广东海洋大学;2013年
5 李璐;合浦珠母贝α-淀粉酶基因结构、SNP筛选、生长关联与生态响应研究[D];上海海洋大学;2013年
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7 刘芳兰;不同植核手术对池蝶蚌外套膜和珍珠囊中钙调蛋白表达的影响[D];南昌大学;2012年
8 陶志英;褶纹冠蚌cDNA文库构建与TIMP基因的表达[D];南昌大学;2012年
9 汪欢;马氏珠母贝皮连蛋白基因和Toll样受体基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2012年
10 王晓菲;长牡蛎Calbin和Tyrosinase基因的克隆及其在幼虫生长发育中的表达分析[D];河北大学;2011年
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9 陈小宏;;马氏珠母贝育苗的几项技术探讨[J];水产科技;1994年04期
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6 王素华;励建荣;吉宏武;邵海燕;章超桦;;响应面法优化马氏珠母贝肉酶解工艺参数[A];“科技创新与食品产业可持续发展”学术研讨会暨2008年广东省食品学会年会论文集[C];2008年
7 岑妍慧;林江;;马氏珠母贝外套膜组织细胞体外培养技术的改进[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
8 王亚男;王辉;朱晓闻;罗明明;;温度、盐度对马氏珠母贝稚贝生长和存活的联合效应[A];中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集[C];2011年
9 王辉;王亚男;罗明明;朱晓闻;杜晓东;刘志刚;;温度、盐度对马氏珠母贝鳃Hsp70表达量的联合效应[A];中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集[C];2011年
10 陈秀丽;;温度对马氏珠母贝氮磷排放和礁膜对氮磷吸收的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
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1 记者 韩倩;放流500万只马氏珠母贝原种贝苗[N];北海日报;2010年
2 记者 袁琳 通讯员 毕朝斌;北部湾首次放流原种贝苗[N];广西日报;2010年
3 康存栋;为近海渔业开发提供强力支撑[N];中国渔业报;2008年
4 本报记者 罗伟;看今朝合浦果珠还[N];北海日报;2011年
5 周元;海南珍珠养殖能否漂亮翻身?[N];海南日报;2006年
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1 郭健;基于硅藻传递的珍珠贝硒蛋白提取及对心肌细胞抗氧化活性研究[D];东华大学;2015年
2 纪丽丽;基于食源藻传递的咪唑羧酸配合物对珍珠层致色研究[D];东华大学;2014年
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1 范闪闪;马氏珠母贝棱柱层相关基质蛋白基因的克隆及功能研究[D];广东海洋大学;2018年
2 刘雅;马氏珠母贝低温适应性分子机制的初步研究[D];广东海洋大学;2018年
3 吴羽媛;马氏珠母贝肿瘤坏死因子受体及其相关因子基因的克隆与功能研究[D];广东海洋大学;2018年
4 雷超;马氏珠母贝类胡萝卜素代谢相关基因的筛选及SNP分析[D];广东海洋大学;2018年
5 白成;马氏珠母贝四个家系遗传及抗氧化力差异研究[D];广东海洋大学;2014年
6 董伟未;马氏珠母贝幼虫精养殖密度及眼点期附苗器选择研究[D];海南大学;2016年
7 郭妍妍;马氏珠母贝多糖的结构分析及体外抗氧化活性的研究[D];广东海洋大学;2015年
8 李乐;不同微藻生长与颜色的关系及对马氏珠母贝生理能量学影响的研究[D];海南大学;2017年
9 郝记明;酶法水解马氏珠母贝肉制备血管紧张素转换酶抑制肽的研究[D];中国农业大学;2005年
10 邓志程;马氏珠母贝全脏器免疫活性肽的制备及其免疫活性的研究[D];广东海洋大学;2015年
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