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《广东海洋大学》 2010年
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不同脱毒方法对红江橙种性变异及脱黄龙病毒效果的影响

周海霞  
【摘要】: 柑桔黄龙病的肆虐流行导致红江橙濒临毁灭,同时红江橙的嵌合特性也导致红江橙果实性状不稳定,严重影响了红江橙的发展。为此,建立一整套柑橘无病毒苗木繁育体系和明确红江橙在组培过程中是否会发生分离是亟待解决的问题。 利用组织培养培育红江橙的败育胚以得到无毒苗;取成年感病茎尖和健康的红江橙的茎尖为试材,进行微芽嫁接得到无毒苗;采用离体茎段培养对红江橙进行快繁以及种质保留;对带毒材料和嫁接成活植株进行聚合酶链式反应(PCR)检测;用SSR分子标记技术鉴定红江橙茎段在组培过程中是否发生分离。主要的结果表明如下: 1.本试验设想根据败育胚保持母本的特性,通过胚性愈伤组织培育出无毒苗。但经PCR检测,通过败育胚所得幼苗为橙,用败育胚培养无毒苗的设想不可行。 2.红江橙离体茎段材料用1/200消佳净浸泡10min后,用无菌水冲洗数次,70 %酒精处理1min,0.1%HgCl2处理15min,效果最佳,成功率达90 %以上。 3.通过改进的方法提高了茎尖嫁接成活率,倒“T”型法的嫁接成活率最低,只有10%,其次为横压法,为10.4%,成活率最高的为三角形法,成活率达到了28.6%,点插法成活率为20%. 4.诱导红江橙离体茎段出芽的最佳激素组合为: MT+6-BA1.0mg.L-1+IBA0.5 mg.L-1+GA30.5mg.L-1 ;败育胚通过胚性愈伤组织得无毒苗的激素组合为: MT+IAA0.2mg.l-1+6-BA0.5mg.l-1+ZT0.5mg.l-1。 5.在试验中技术鉴定发现红江橙在组培过程中继续发生分离,依靠组织培养对红江橙进行快繁以及种质保留是不可行的。 6.根据黄龙病病原的核苷酸序列设计PCR引物。脱毒前利用PCR对感病的红江橙进行检测。结果扩增到特异性电泳区带,这与设计的扩增片断一致,证明是感染黄龙病病原的植株。 7.对嫁接成活苗进行了PCR未检测到黄龙病的病原,说明茎尖嫁接脱除黄龙病病原是有效的,可以为无病毒苗木的繁殖提供健康的接穗材料。 本试验得出的结论,一是利用败育胚培育红江橙的无毒苗不可行;二是通过红江橙离体茎段保存红江橙的种质或进行快繁也不可行;三是在微芽嫁接中,点插法以及三角形法值得进行推广;四是利用微芽嫁接可以达到红江橙脱黄龙病病毒;五是采用正确的外植体消毒处理可以使污染率最大程度的降低。
【学位授予单位】:广东海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S666.4

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【参考文献】
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