针刺和神经干细胞联合治疗实验性脑性瘫痪的机制研究

【摘要】：目的: 探讨针刺和神经干细胞(Neural stem cell, NSC)联合治疗对缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)幼鼠肢体运动功能、学习和记忆能力、脑组织凋亡基因bax及抗凋亡基因bcl-2的蛋白表达和病理形态学的影响,并对针刺联合NSC疗法治疗实验性脑性瘫痪(Cerebral palsy,CP)的机制进行探索,为临床小儿CP的治疗提供实验依据。 内容和方法: 1、实验动物及分组:7日龄SPF级SD幼鼠68只(体重:12g～20g),随机选取12只作为①正常对照组;HIBD成功模型随机分成以下4组:②模型组;③单纯针刺组;④单纯NSC组;⑤针刺+NSC组,每组12只。 2、治疗阶段:包括针刺治疗和NSC治疗,其中NSC采用幼鼠尾静脉注射。 3、行为学检测:包括悬吊试验、斜坡试验和Y迷宫试验。 4、取材:术后21天对正常组和实验组幼鼠断颈取材,用HE染色法观察其海马组织病理形态学改变,并计数海马组织正常神经细胞数目;用TUNEL法检测其脑皮质神经细胞凋亡情况并测出凋亡神经细胞数目;免疫组化法检测其脑组织bcl-2、bax基因的蛋白质表达。 5、数据整理,统计学分析。 结果: 1、行为学检测:悬吊试验、斜坡试验、Y迷宫试验中,③单纯针刺组和④单纯NSC组与②模型组相比,各项均数差异均无统计学意义(p 0.05),表明单纯针刺和单纯NSC均不能明显改善幼鼠的肢体运动功能和学习记忆能力;⑤针刺+NSC组与②模型组相比,各项均数差异有统计学意义(p 0.05),表明针刺联合NSC能显著提高幼鼠的肢体运动功能和学习记忆能力(智力水平)。 2、bcl-2基因和bax基因的蛋白质表达:⑤针刺和NSC组与②模型组相比,均数差异均有统计学意义(p 0.05),表明针刺联合NSC能够明显促进抗凋亡基因bcl-2的蛋白质表达、抑制凋亡基因bax的蛋白质表达;③单纯针刺组及④单纯NSC组与②模型组相比差异均无统计学意义(p 0.05)。 3、脑组织肉眼观察:取材可见②模型组左侧脑组织出现大面积坏死,空泡,右侧脑组织组织结构正常;③单纯针刺组、④单纯NSC组、⑤针刺+NSC组左侧脑组织都出现了不同程度的坏死和空泡区域,但程度都比②模型组较轻,其中⑤针刺+NSC组比③单纯针刺组和④单纯NSC组左侧脑组织损伤程度更轻。 4、脑组织HE切片:与②模型组相比,③单纯针刺组、④单纯NSC组、⑤针刺+NSC组幼鼠海马变性神经细胞数量减少,病理形态学明显改善,其中⑤针刺+NSC组海马变性神经细胞数目最少,脑组织病变程度最轻。 5、神经细胞计数:(1)海马正常神经细胞数目:②模型组与①正常组相比,均数更少,差异有统计学意义(p 0.05),表明HIBD后幼鼠海马正常神经细胞数目显著减少;③单纯针刺组和④单纯NSC组与②模型组相比,均数差异均无统计学意义(p 0.05),表明单纯针刺治疗和单纯NSC治疗都不能明显提高HIBD后幼鼠海马正常神经细胞数目;⑤针刺+NSC组与模型组相比,均数更多,差异有统计学意义(p 0.05),表明⑤针刺+NSC组可明显提高HIBD后幼鼠海马正常神经细胞数目。(2)脑皮质组织细胞凋亡:③单纯针刺组和④单纯NSC组与③模型组相比,均数差异均无统计学意义(p 0.05),表明单纯针刺和单纯NSC都不能明显抑制幼鼠脑皮质神经细胞凋亡;⑤针刺+NSC组与②模型组相比,均数差异有统计学意义(p 0.05),表明针刺联合NSC治疗可明显抑制幼鼠脑皮质神经细胞的凋亡。 结论: 1、单纯针刺或单纯NSC都不能明显改善缺血缺氧性脑瘫模型幼鼠肌力、随意运动、学习记忆能力(智力)。 2、针刺和NSC联合治疗对缺血缺氧性脑瘫模型幼鼠的肌力增长、随意运动的恢复、学习和记忆能力(智力)的改善有明显效果。 3、针刺和NSC联合治疗对缺血缺氧性脑瘫模型幼鼠脑组织细胞凋亡基因bax的蛋白质表达有明显的抑制作用、对抗凋亡基因bcl-2的蛋白质表达有明显的促进作用。

【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R246.6;R742.3