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《广州医学院》 2011年
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MicroRNA-26对大鼠心脏重构的调控作用

张振辉  
【摘要】:【背景】 心脏重构(cardiac remodeling)是心脏在受到损伤或血液动力学改变等应激反应时,由于基因表达和蛋白调控的失常,导致心脏的结构和功能发生变化的病理过程。持续的心脏重构最终将导致心力衰竭(心衰,heart failure),并且是临床患者心律失常和猝死的重要原因。目前逆转心脏重构的手段仍较缺乏,之前的研究主要集中在心脏重构发病的神经体液和信号转导通路的翻译后调控,对于转录后调控的机制研究较少。微小RNA(microRNA, miRNA)是一类长度约19~25 nt的单链非编码RNA分子,通过与靶基因的结合,抑制或降解靶基因的mRNA,实现转录后水平的负调控。研究表明,在心脏重构过程中,许多miRNA的表达水平发生改变。其中,miRNA的表达谱芯片的结果显示,miR-26在心脏重构动物模型心肌组织中的表达下调,因此,我们假设:通过功能获得和缺失(gain-and loss-of-function)实验,在心脏细胞中上调或下调miR-26的表达,可能会引起心脏细胞的表型发生变化;另外,结合生物信息学软件的预测,GSK3β很可能是miR-26的靶基因之一,而GSK3β是心脏重构/心衰发病过程中的重要信号转导通路,miR-26可能会通过调控GSK3β的表达,进而影响心脏重构。为此,我们通过建立心脏重构大鼠动物模型和细胞模型,首先明确miR-26在心脏重构中的表达特征,进而通过体外实验,阐明miR-26的表达变化对心脏肥大和纤维化的影响,并验证miR-26是否以GSK3β为靶点,为进一步阐明心脏重构/心衰的发病机制和寻找新的治疗靶向提供实验依据。 一、研究目的 1.阐明miR-26在大鼠心脏重构动物模型和细胞模型中的角色; 2.通过细胞实验,明确miR-26、GSK3β和心脏重构三者之间的关系。 二、研究方法 1.腹主动脉缩窄法(transverse abdominal aortic constriction,TAAC)建立大鼠压力过负荷心脏重构模型,用动物心脏彩超、QPCR和western blot检测、病理组织切片染色等方法证实压力过负荷心脏重构模型建立成功。 2. QPCR法检测TAAC大鼠心肌组织和血浆miR-26的表达水平。 3.体外分离培养新生SD大鼠原代心肌细胞(CM)和心脏成纤维细胞(CF),QPCR法检测正常培养和AngiotensinⅡ刺激后,CM和CF miR-26的表达水平。 4. CM和CF转染miR-26 mimics和inhibitor后,QPCR法检测miR-26的表达变化。 5. CM和CF先转染miR-26 mimics再用AngiotensinⅡ诱导,或CM和CF单独转染miR-26 inhibitor,QPCR和western blot法检测CM肥大基因、CF胶原mRNA和protein的变化,氚标亮氨酸掺入法检测CM蛋白合成速率,免疫细胞化学法检测CM细胞形态学变化。 6.对于TAAC大鼠心肌组织、AngiotensinⅡ刺激后的CM和CF ,用QPCR和western blot法检测GSK3β表达量和活性的变化,以及磷酸化水平的改变。 7.对于转染miR-26 mimics和inhibitor后的CM和CF,用QPCR和western blot法检测GSK3β表达量和活性的变化,以及磷酸化水平的改变。 8.双荧光素酶报告基因系统验证miR-26的靶基因GSK3β。 9.对于CM和CF,转染GSK3β的小分子干扰RNA(siRNA),然后用AngiotensinⅡ刺激细胞,检测GSK3β表达量和活性的变化,以及对CM肥大和CF胶原纤维合成的影响。 10.对于CM和CF,转染GSK3β过表达质粒,检测GSK3β表达量和活性的变化,以及对CM肥大和CF胶原纤维合成的影响。 三、结果 1.用TAAC法成功建立大鼠压力过负荷心脏重构模型。 2. TAAC心脏重构大鼠的心肌组织和血浆中miR-26a和miR-26b的水平均较对照组(Sham)下调(P﹤0.05)。 3.用AngiotensinⅡ刺激后,CM和CF细胞中miR-26a和miR-26b的水平均较对照组下调(P﹤0.05)。 4. MiR-26在正常培养的CM中的表达水平明显比在CF中高(P﹤0.05)。 5. CM和CF转染miR-26 mimics后,miR-26a和miR-26b的表达量升高明显(P﹤0.01);CM和CF转染miR-26的inhibitor后,miR-26a和miR-26b的表达量下降(P﹤0.05)。 6.用AngiotensinⅡ刺激转染miR-26 mimics后的CM和CF,肥大基因和胶原表达减少(P﹤0.05),蛋白合成速率减慢(P﹤0.05),细胞表面积缩小(P﹤0.05)。 7. CM和CF转染miR-26 inhibitor后,肥大基因和胶原表达增加(P﹤0.05),P-tau蛋白表达量增加,骨架蛋白α-actin表达增加,蛋白合成速率加快(P﹤0.01),细胞表面积增大(P﹤0.01)。 8. TAAC心脏重构大鼠心肌组织GSK3βmRNA和protein的表达量均增加(P﹤0.05),且伴随GSK3β的活性增强。 9.用AngiotensinⅡ刺激后,CM和CF的GSK3βmRNA表达量均增加(P﹤0.05)。 10. CM和CF转染miR-26 mimics后,GSK3βmRNA和protein的表达量减少(P﹤0.05),而转染miR-26 inhibitor后,GSK3βmRNA和protein的表达量增加(P﹤0.05)。 11.转染miR-26 mimics,能抑制293T细胞中GSK3β3’UTR报告基因载体荧光素酶的表达,使其荧光素酶活性下降(P﹤0.01);转染miR-26 inhibitor,能增加CM和CF细胞中GSK3β3’UTR报告基因载体荧光素酶的表达,使其荧光素酶活性增强(P﹤0.05);证实GSK3β是miR-26的靶基因。 12.用AngiotensinⅡ刺激转染siGSK3β后的CM和CF,肥大基因或COL3的表达量下降(P﹤0.05)。 13. CM和CF转染GSK3β过表达载体后, GSK3βmRNA和protein的表达量增加(P﹤0.05),且GSK3β的活性也增加,伴随肥大基因和胶原的表达量增加。 四、结论 1. miR-26在大鼠心脏重构模型中表达下调。 2. miR-26可以通过抑制其靶点GSK3β调控心脏重构过程。
【学位授予单位】:广州医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R363

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 陈焱;王云英;张蓝宁;常惠;张琳;宋振;余志斌;;心肌细胞肥大程度与收缩功能的变化[J];生理学报;2010年06期
2 顾东风 ,黄广勇 ,吴锡桂 ,段秀芳 ,何江 ,Paul K Whelton ,Stephen Mac Mahon;中国心力衰竭流行病学调查及其患病率[J];中华心血管病杂志;2003年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张兆琨;;辨证分型论治对冠心病慢性心力衰竭预后的影响[J];中医药临床杂志;2010年10期
2 钱晓东;周亚峰;蒋廷波;宋建平;杨向军;;慢性心力衰竭并发心脏骤停89例临床分析[J];安徽医药;2009年12期
3 万秀英;孙久林;陈少军;;健心汤和生脉注射液治疗充血性心力衰竭180例临床观察[J];北京中医;2007年07期
4 刘会红;万秀英;李红英;陈少军;孙久林;;益气活血利水法治疗慢性充血性心力衰竭148例[J];北京中医药;2011年10期
5 陈婵;赵慧辉;王娟;张鹏;王伟;;357例冠心病心力衰竭患者人口学信息与中医证候分布特点的研究[J];北京中医药;2012年03期
6 何平;;厄贝沙坦联用比索洛尔对42例慢性充血性心力衰竭左室重构和心功能的影响[J];重庆医学;2010年01期
7 李露;常静;;β受体阻滞剂预防心力衰竭患者心脏性猝死的研究进展[J];重庆医学;2012年17期
8 刘建波;蒋科;;预见性护理在慢性心力衰竭患者中的应用[J];当代护士(学术版);2007年04期
9 熊钰;;不同年龄阶段老年CHF患者血流动力学特征比较与护理[J];当代护士(学术版);2009年07期
10 尹红;;综合护理干预对慢性心力衰竭患者生活质量的影响[J];当代护士(学术版);2010年07期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 陈伟强;赵华云;王文会;贺青军;罗智敏;;益气舒心丸对慢性心衰疗效的影响[A];2011·中国医师协会中西医结合医师大会论文集[C];2011年
2 于晓东;;左西孟旦治疗失代偿性心衰临床疗效评价[A];第二十五届航天医学年会暨第八届航天护理年会论文汇编[C];2009年
3 王秀红;相有章;宋术亮;王林;管淑芬;屈福荣;;心衰患者心钠素水平与心脏大小及心脏功能关系的研究[A];山东预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
4 袁洪雷;马晓昌;冯新庆;;血液超滤对于心力衰竭的临床治疗进展[A];第一届全国中西医结合心血管病中青年医师论坛论文汇编[C];2008年
5 ;第三部分 心血管病防治研究[A];中国心血管病报告2010[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭小闪;核素心肌灌注显像在代谢综合征及评价室壁运动的临床应用[D];山西医科大学;2011年
2 郭艳琳;下丘脑室旁核CRH神经元激活在慢性充血性心力衰竭中的交感兴奋作用及机制研究[D];山西医科大学;2011年
3 古小松;白藜芦醇激活SIRT1途径改善心衰[D];第二军医大学;2011年
4 姚耿圳;慢性心力衰竭中西医结合临床路径的构建与评价研究[D];广州中医药大学;2011年
5 牛平平;暖心胶囊治疗慢性心衰的临床与实验机制研究[D];广州中医药大学;2011年
6 汪和贵;β-AR亚型对慢性心衰心室肌细胞IKr的调控及机制[D];南京医科大学;2011年
7 张雪莲;基于纤维蛋白胶支架材料的可注射组织工程化心肌的研究[D];新疆医科大学;2011年
8 周炳元;超声心动图多参数记分(EMPS)评估左心室整体功能的可行性及其预后价值[D];苏州大学;2011年
9 孙萍;朱宗元教授心系疾病学术思想继承及治疗气虚血瘀型冠心病慢性心衰临床研究[D];北京中医药大学;2012年
10 王娟;慢性心力衰竭中医证候生物学诊断模式及代谢组学研究[D];北京中医药大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 洪烨晶;慢性心力衰竭常见中医证型与尿酸及左室重量指数的相关性研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 王东;芪红汤治疗慢性心力衰竭气虚血瘀型疗效及对血浆内皮素、脑钠肽的影响[D];新疆医科大学;2010年
3 刘斌;同型半胱氨酸诱导实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及核因子-κB表达的研究[D];泰山医学院;2010年
4 韩钟伟;宣化三焦法治疗慢性心力衰竭的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
5 杨桂秋;心力衰竭疾病评估模型研究[D];浙江大学;2011年
6 黄睿臻;保心汤治疗慢性心力衰竭(气虚水泛型)临床研究[D];成都中医药大学;2010年
7 朱川萌;肼苯达嗪联合硝酸异山梨酯对压力负荷慢性心力衰竭大鼠的影响[D];广西医科大学;2011年
8 刘晓建;重组人脑利钠肽和米力农治疗慢性心衰急性发作期的对比研究[D];山西医科大学;2011年
9 王玉玲;住院重度慢性心力衰竭患者中贫血及肾功能情况调查[D];吉林大学;2011年
10 刘程程;cTnI、BNP及入院时收缩压水平在急性心衰监测中的意义及其对判断预后的价值[D];吉林大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 刘力生;王文;姚崇华;;2009年基层版《中国高血压防治指南》(摘录)[J];中国医学前沿杂志(电子版);2010年01期
2 全国血压抽样调查协作组;中国人群高血压患病率及其变化趋势[J];高血压杂志;1995年S1期
3 上海市心力衰竭调查协作组;上海市1980、1990、2000年心力衰竭住院患者流行病学及治疗状况调查[J];中华心血管病杂志;2002年01期
4 吴兆苏,姚崇华,赵冬,吴桂贤,王薇,刘静,曾哲淳,吴英恺;我国多省市心血管病趋势及决定因素的人群监测(中国MONICA方案)Ⅰ.发病率和死亡率监测结果[J];中华心血管病杂志;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王兆禹,罗珊珊,李琳,王雨平,刘艳红,程小床,李佐才;高血压病中医辨证分型与心脏重构性变化[J];安徽中医临床杂志;2000年06期
2 Santoro G.;Pascotto M.;Caputo S. et al.;杜媛;;儿童与年轻成人的经导管房间隔缺损封堵术后心脏重构相似[J];世界核心医学期刊文摘(心脏病学分册);2006年11期
3 樊雨良,秦惠勋,陆遥,王美雯,许勇锋,刘沁,候玲毅,查惠芳,卓霞;尿毒症性心脏损害患者心脏重构的声像检查及临床研究(附68例病例报告)[J];中国心血管杂志;1998年06期
4 王兆禹,张开宁,李佐才,李琳,程小糜;高血压病患者左室重构与功能变化的关系[J];高血压杂志;2000年01期
5 都健,张峻,刘国良;血管加压素在腹主动脉-下腔静脉分流术后大白鼠心脏重构中的作用[J];中国实用内科杂志;2000年08期
6 陈碧莲 ,谢秀梅 ,孙明 ,余国龙 ,廖锦堂 ,张波;轻度高血压病患者血管及心脏重构的研究[J];中国现代医学杂志;2003年02期
7 沈文俊,马端;基质金属蛋白酶与充血性心力衰竭时心脏重构[J];临床心血管病杂志;2004年06期
8 骆丽菊;;老年高血压患者血压晨峰与心脏重构的关系探讨[J];心脑血管病防治;2007年04期
9 吴瑰丽;;缬沙坦对扩张型心肌病患者疗效观察[J];心脑血管病防治;2006年03期
10 李小波;陈绍良;;N-乙酰半胱氨酸对高血压心脏重构的影响[J];国际心血管病杂志;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 钟诗龙;伍虹;杨敏;刘晓颖;郑志伟;林秋雄;符永恒;麦丽萍;周志凌;余细勇;;用权重基因共表达网络分析识别心脏重构关键节点基因[A];共铸医药学术新文明——2012年广东省药师周大会论文集[C];2012年
2 钟诗龙;余细勇;郑志伟;杨敏;符永恒;林秋雄;;权重基因共表达网络分析发现心肌梗死后心脏重构的关键调控通路与基因[A];第十二次全国临床药理学学术会议会议论文集[C];2010年
3 钟诗龙;余细勇;郑志伟;杨敏;符永恒;;权重基因共表达网络分析发现心肌梗死后心脏重构的关键调控通路与基因[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
4 白文娟;唐红;;心房颤动对左心瓣膜置换术后心脏重构的影响[A];庆祝中国超声诊断50年暨第十届全国超声医学学术会议论文汇编[C];2008年
5 张懋贞;林继先;张亚臣;李毅刚;荣烨之;;探讨药物对逆转心脏重构和改善心肌细胞活力的影响[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
6 刘倩;王珂;;脂肪干细胞在大鼠急性心肌梗死模型中改善心脏重构和功能的作用[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
7 黄翯;单江;潘晓宏;王会平;钱力波;夏强;傅国胜;;卡维地洛逆转糖尿病心脏重构与下调TGF-β1有关[A];2006年浙江省心血管病学学术年会论文汇编[C];2006年
8 宋光远;杨跃进;惠汝太;张洪亮;裴汉军;赵振燕;王喜梅;李建军;吴永健;;心肌重构相关基因的过早表达将导致链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠急性心肌梗死后心脏重构的加速[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
9 胡忠良;文继舫;;TGIF基因转染对胃癌细胞蛋白表达谱的影响[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
10 闫晓明;李勇杰;关云谦;张愚;;人重组NT-3基因体外转染胚胎干细胞及其表达[A];中国医师协会神经外科医师分会第二届全国代表大会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通讯员刘宁春 记者杨丽佳;一基因有抵抗心梗后心室重构“潜质”[N];健康报;2009年
2 王学东;心梗后如何保养[N];大众卫生报;2010年
3 庄愉;达芦生坦 治疗心血管疾病新希望[N];医药经济报;2002年
4 张中桥;四军医大西京医院成功建立胃癌GC9811P-GFP细胞株[N];中国医药报;2006年
5 上海瑞金医院教授 钱文琪;浅谈心力衰竭的药物治疗[N];光明日报;2000年
6 上海瑞金医院教授 钱文琪;心力衰竭的药物治疗[N];中国劳动保障报;2000年
7 吴一福;四军医大构建HBV全基因克隆质粒细胞系[N];中国医药报;2006年
8 记者 白毅;磷酸川芎嗪对模型动物扩心病疗效显著[N];中国医药报;2010年
9 冯世容;CD95基因转染可提高胰腺癌对化疗药物敏感性[N];中国医药报;2001年
10 张中桥;反义技术抑制COX-2过表达可逆转膀胱癌细胞恶性表型[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张振辉;MicroRNA-26对大鼠心脏重构的调控作用[D];广州医学院;2011年
2 王丹;慢性AngⅡ刺激诱导大鼠心脏重构的炎症机制研究[D];华中科技大学;2012年
3 黄翯;卡维地洛对糖尿病大鼠心脏的保护作用及机制研究[D];浙江大学;2006年
4 高阳;心脏重构过程心室应变与生存蛋白的相关性研究[D];中南大学;2009年
5 尚福军;活性氧调控炎性细胞因子表达与高血压心脏重构的关系及辛伐他汀干预研究[D];第四军医大学;2007年
6 谢雄伟;激活Notch信号的骨髓间充质干细胞心肌移植治疗心梗模型鼠的实验研究[D];中南大学;2009年
7 闫振成;PPARs在代谢综合征心血管损害中作用的临床和实验研究[D];第三军医大学;2004年
8 徐健;氯沙坦联合辛伐他汀对心力衰竭大鼠心脏重构的作用及其机制探讨[D];安徽医科大学;2008年
9 崔继福;转染VEGF基因骨髓间充质干细胞移植改善心肌梗死后心脏重构[D];第二军医大学;2005年
10 张晓伟;调节心脏组织免疫微环境抑制阿霉素所致心脏异常重构及心功能障碍[D];北京协和医学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘善红;Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ直接介导血管紧张素Ⅱ所致的心脏重构[D];华中科技大学;2010年
2 赵春辉;高血压病患者左房左室重构的关系及参与因素[D];昆明医学院;2004年
3 潘昱;高血压病合并心律失常患者血清脂联素与心脏重构的研究[D];吉林大学;2008年
4 黄志刚;IL-10对血管升压素诱导SD大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其与心脏重构关系的研究[D];第四军医大学;2006年
5 蒋林哲;法洛氏四联症根治术后心脏重构、左心室功能及血液动力学变化的研究[D];延边大学;2007年
6 李小波;N-乙酰半胱氨酸对高血压心脏重构的影响[D];南京医科大学;2007年
7 李正在;高血压患者抗α_1-肾上腺素能受体抗体与心脏重构的临床观察[D];华中科技大学;2007年
8 刘倩;脂肪干细胞在大鼠急性心肌梗死模型中改善心脏重构和功能的作用[D];大连医科大学;2010年
9 周芳明;代谢综合征心脏重构和功能异常的临床研究[D];第三军医大学;2003年
10 汪砚雨;慢性心力衰竭患者血清MMP-1、TIMP-1的水平变化和意义[D];郑州大学;2004年
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