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《广州中医药大学》 2011年
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情志因素对去卵巢大鼠脑神经递质、内分泌的影响及中药的干预作用

姜迎  
【摘要】:目的 更年期是妇女由生育期向老年阶段的过渡时期,其间卵巢功能从旺盛状态逐渐衰退,卵巢分泌的雌激素水平波动或下降,导致下丘脑-垂体-性腺轴协调功能改变,部分妇女在此期间不能适应这种变化,出现以植物神经系统功能紊乱为主,伴有神经心理症状的一组症候群以及低雌激素水平的相关疾病,即更年期综合征。本实验以去卵巢模型大鼠为研究对象,探讨去卵巢大鼠的神经内分泌变化及情志因素对其的影响。中医认为,更年期综合征病机以肾虚为本,故本实验亦探讨了左归丸的干预作用。 方法 2月龄雌性SD大鼠48只,体重180-220g,按体重区组随机分为6组:假手术组、去卵巢空白组、去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组,每组8只。去卵巢空白组、去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组行双侧卵巢摘除术,假手术组以相同手术方法打开腹腔后缝合。从术后第9天起,去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组每日接受一次“猫吓鼠”情志刺激,共21日。各组大鼠均从术后第9天起开始接受灌胃给药,假手术组、去卵巢空白组、去卵巢恐模型组按9.45ml/kg给予蒸馏水灌胃,每日1次;左归丸组按9.45ml/kg给予左归丸中药混悬液(含生药1g/ml)灌胃,每日1次;阿普唑仑组按9.45ml/kg给予阿普唑伦蒸馏水溶液(浓度为0.0076mg/ml)灌胃,每日1次;倍美力组按9.45ml/kg给予倍美力蒸馏水溶液(浓度为5.952μg/ml)灌胃,每日1次,各组均连续给药21日。各组大鼠于末次给药后2小时,进行高架T迷宫实验和旷场实验。末次给药后24小时,大鼠被断头处死,取材后采用化学发光法检测大鼠血清性激素水平;高效液相色谱电化学法检测大鼠脑组织5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素含量;免疫组化法观察大鼠脑组织雌激素受体的表达。 结果 1各组大鼠行为学测试结果:旷场实验:水平得分方面,去卵巢空白组与假手术组相比明显减少(P0.05);去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比无显著差异(P0.05)。垂直得分方面,去卵巢空白组与假手术组相比明显减少(P0.05);去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比明显减少(P0.05);左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,旷场实验水平得分无明显差异(P0.05);三组的旷场实验垂直得分均高于去卵巢恐模型组(P0.05);左归丸组与阿普唑仑组、左归丸组与倍美力组相比,垂直得分较高(P0.05)。高架T迷宫实验:去卵巢空白组与假手术组的单向逃跑时间无显著差异(P0.05);去卵巢恐模型组的单向逃跑时间低于去卵巢空白组(P0.05);左归丸组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,均高于去卵巢恐模型组(P0.05);左归丸组与假手术组相比无明显差异(P0.05);左归丸组与阿普唑仑组、左归丸组与倍美力组相比,左归丸组单向逃跑时间均较高(P0.05)。 2各组大鼠血清E2含量结果:去卵巢空白组E2水平与假手术组相比明显减少(P0.05);去卵巢恐模型组E2水平与去卵巢空白组相比无明显差异(P0.05);左归丸组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,E2水平高于去卵巢恐模型组(P0.05);左归丸组、倍美力组与假手术组相比无明显差异(P0.05);左归丸组与倍美力组相比无明显差异(P0.05)。 3各组大鼠脑神经递质含量结果 海马神经递质含量结果:去卵巢空白组与假手术组相比,去卵巢空白组大鼠海马5-HT、NE含量明显增加(P0.05),5-HIAA含量无明显变化(P0.05),而去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马5-HT、NE含量明显增加(P0.05),5-HIAA含量无明显变化(P0.05);去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比,5-HT、NE含量有所下降(P0.05);与假手术组相比,去卵巢空白组及去卵巢恐模型组大鼠海马5-HT与NE含量比值有显著差别,5-HT/NE比值升高(P0.05)。左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠海马5-HT、NE明显低于去卵巢恐模型组(P0.05),5-HIAA含量无明显变化(P0.05),左归丸组与假手术组相比,两组大鼠海马5-HT、NE含量无明显差异(P0.05);左归丸组与倍美力组相比,两组大鼠海马5-HT含量无明显差别(P0.05),但左归丸组大鼠海马NE明显低于倍美力组(P0.05),接近假手术组水平;左归丸组与假手术组相比,5-HT/NE比值无明显差异(P0.05)。 额叶皮质神经递质含量结果:去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠皮质5-HT、NE含量明显增加(P0.05),5-HIAA含量明显降低(P0.05);与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠皮质5-HT/NE升高(P0.05)。左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠皮质5-HT明显低于去卵巢恐模型组(P0.05),5-HIAA含量明显增加(P0.05);左归丸组与假手术组相比,两组大鼠皮质5-HT含量无明显差异(P0.05),而5-HIAA含量明显升高(P0.05);去卵巢恐模型组与假手术组相比,NE含量明显增加(P0.05),而左归丸组与假手术组皮质NE含量无明显差别(P0.05);左归丸组与假手术组相比,5-HT/NE比值无明显差异(P0.05)。 4各组大鼠海马ERβ积分光密度结果:去卵巢空白组与假手术组相比,去卵巢空白组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于假手术组大鼠(P0.05);去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于去卵巢空白组大鼠(P0.05);去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于假手术组大鼠(P0.05);左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠海马ERβ积分光密度明显低于去卵巢恐模型组(P0.05);左归丸组与假手术组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异(P0.05);倍美力组与去卵巢恐模型组相比,海马ERβ积分光密度明显低于去卵巢恐模型组(P0.05);倍美力组与假手术组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异(P0.05);左归丸组与倍美力组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异(P0.005)。 结论 1在行为学实验中,去卵巢后大鼠旷场实验水平得分、垂直得分减少,活动度及探究能力降低,而情志刺激可进一步降低大鼠探究能力;高架T迷宫实验中,去卵巢加情志刺激可缩短平均单向逃跑时间,升高大鼠惊恐水平,而左归丸可提高去卵巢恐模型组大鼠垂直得分及单向逃跑时间,增强其探究能力,降低其惊恐水平,并达到假手术组水平。 2去卵巢后大鼠血清E:明显下降,情志刺激对去卵巢大鼠血清E2的进一步影响不大。左归丸可明显提高去卵巢恐模型大鼠血清E2,使血清E2达到假手术组水平。 3去卵巢及情志刺激使大鼠海马单胺类神经递质5-HT、NE明显增加,5-HIAA含量无明显变化,5-HT/NE升高,5-HT含量的增加可能来自去卵巢及情志刺激造模对5-HT合成的增强作用。中药左归丸的干预可使升高的海马5-HT、NE含量下调至接近假手术组水平,使5-HT和NE的比例恢复到平衡,其中5-HT含量的下调,可能是通过抑制5-HT的合成路径的一个或多个环节达到的。 去卵巢及情志刺激使大鼠额叶皮质单胺类神经递质5-HT、NE明显增加,5-HIAA含量明显降低,5-HT/NE升高,5-HT降解减慢或伴有合成的增加。中药左归丸的干预可使升高的额叶皮质5-HT、NE含量下调至接近假手术组水平,使5-HT和NE的比例恢复到平衡,其中5-HT含量的下调,可能是通过加快5-HT的降解速度实现的。 4大鼠去除卵巢后海马ERβ的表达上调,其机制可能是雌激素缺乏后引起的代偿性增高。情志刺激会进一步增加大鼠海马ERβ的表达,有可能是由应激对神经-内分泌-免疫网络系统的作用影响实现的。左归丸干预后,可使升高的ERβ表达下降,并使其达到假手术组水平,这可能与左归丸使体内雌激素的水平升高有关,同时也可能与左归丸对神经内分泌的整体调节有关。 本实验通过建立情志因素(恐)影响下的更年期雌性大鼠模型,观察到其行为学、内分泌、神经递质及雌激素受体方面的改变,初步提示更年期综合征发病机制涉及到多环节、多系统。中药左归丸可降低行为学实验中大鼠的惊恐水平,并对生殖内分泌、神经递质等方面的异常变化具有改善作用,从而使失调的机体内环境回归稳定,体现了中药复方多成分、多层次、多靶点的整体复合效应,也为临床运用补肾药物防治更年期综合征提供了理论和实验依据。
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