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《广州中医药大学》 2011年
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内异症复发模型的建立及中药干预的实验研究

黄洁明  
【摘要】:目的 通过建立大鼠子宫内膜异位症模型及术后复发模型,检测异位内膜中C-FOS、P450arom、SF-1、COUP-TF及E2、PGE2的含量,阐明雌激素合成调节网络中各作用点间相互关系,研究疾病启动-信号调节-效应分子之间的关联,从整体角度探讨内异症的发病和复发的机制。并以西药达那唑作为对照,积极探索罗氏内异方对内异症模型雌激素合成调节网络和术后复发的影响,进一步揭示中医药对内异症作用机理和作用靶点,在预防内异症复发的治疗策略方面有重要的临床意义。 方法 采用大鼠自体子宫内膜手术移植法建立内异症动物模型,三周后再次开腹切除部分原始异位病灶,从而建立术后复发内异症模型。随机将大鼠分成两大组。第一大组(A)在切除部分原始病灶前后均进行干预,分别给予罗氏内异方高、低剂量,达那唑,雌激素,前后各用药3周,共6周;第二大组(B)术前不做干预,仅在术后进行干预,药物及剂量同A组,用药3周。二次开腹后3周再切除全部的复发异位内膜病灶送检。同期以模型组(未用药干预)和卵巢切除模型组作对照。观察大鼠的一般情况和生活状态,异位内膜病灶的生长状态和外观,对囊肿大小和盆腹腔粘连程度进行分级统计;采集的原始和复发的异位内膜组织标本以ELISA法检测PGE2含量、放射免疫法检测E2含量和荧光定量PCR检测C-FOS、COUP-TF、SF-1、P450arom的mRNA表达水平。用SPSS15.0软件对数据进行统计分析。 结果 1.大鼠一般状态,经过六周处理喂养观察,空白模型组大鼠的毛泽光润清洁,反应灵敏,喜活动,食欲正常,体重增加,大便成颗粒状。内异症复发模型,在切除原始异位病灶术后2—3天能逐步恢复日常状态。 2.异位病灶的复发情况,囊肿大小不一、形态各异,可见丰富血管形成。未见囊肿者,可局部形成红色或淡黄色斑点、或实质结节,或瘢痕,可见血管密集。全部复发病例是以单个病灶出现,并没有出现播散性种植的多个病灶。病理检查证实复发的移植物中均有子宫内膜上皮细胞、腺体和少量间质生长,证实此为术后复发异位病灶,证明用此法制作子宫内膜异位症术后复发模型成功。 3.对模型组进行统计,术后复发囊肿比术前囊肿明显缩小,差异有显著性(P0.05),术前囊肿大小决定术后囊肿的大小(P0.05)。术前和术后粘连程度比较差异无显著性(P0.05),手术前后的粘连程度的相关性不大(P0.05)。 4.术前模型大鼠统计结果(A组):①与空白模型组比较,高剂量组、低剂量组、达那唑组的大鼠异位内膜组织E2和PGE2含量均明显下降,差异有显著性(P0.05);三组之间比较差异无显著性(P0.05)。②与空白模型组相比,高剂量组、低剂量组和达那唑组大鼠异位内膜组织C-FOS表达量明显减弱,差异有显著性(P0.05),三组之间比较差异无显著性(P0.05)。③与空白模型组相比,高剂量组、低剂量组大鼠异位内膜组织P450arom表达量明显减弱,差异有显著性(P0.05)。低剂量组与高剂量组、达那唑组相比,则明显减弱,差异有显著性(P0.05)。④与空白模型组相比,低剂量组大鼠异位内膜组织SF-1表达量明显减弱,差异有显著性(P0.05)。低剂量组与高剂量组、达那唑组相比,则明显减弱,差异有显著性(P0.05)。⑤与空白模型组相比,各组间大鼠异位内膜组织COUP-TF表达量无差异性(P0.05)。⑥大鼠异位内膜组织的E2含量与PGE2含量、P450arom、C-FOS表达量呈显著正相关关系(P0.05),而与COUP-TF表达量呈显著负相关(P0.05)。大鼠异位内膜组织的PGE2含量与P450arom表达量呈显著正相关关系(P0.05)。大鼠异位内膜组织的C-FOS与COUP-TF表达量和E2含量有显著的正相关(P0.05)。大鼠异位内膜组织的P450arom与SF1表达量、E2含量和PGE2含量有显著的正相关(P0.05)。COUP-TF表达量与SF-1表达量不相关(P0.05)。⑦低剂量组的囊肿最小,与空白模型组、其他组比较差异有显著性(P0.05)。雌激素组与空白模型组相比,囊肿明显增大,差异有显著性(P0.05)。高剂量组、达那唑组与空白模型组差异无显著性(P0.05)。粘连程度方面,中药两组均较空白模型组、其他处理组的秩次低,说明中药两组的粘连程度最轻,差异有显著性(P0.05)。 5.术后复发模型统计结果:①在A组中,各用药组的异位内膜组织E2和PGE2含量明显低于空白模型组,有显著性差异(P0.05);高剂量组、低剂量组和达那唑组之间比较无差异性(P0.05)。②在B组中,各用药组的异位内膜组织E2含量明显低于空白模型组,有显著性差异(P0.05);而高剂量组、低剂量组和达那唑组之间比较无差异性(P0.05)。高剂量组、低剂量组、达那唑组异位内膜组织PGE2含量与空白模型组之间比较无差异性(P0.05)。③经过两两比较,低剂量A组与空白模型组比较,复发囊肿明显缩小,差异有显著性(P0.05)。其余各组与空白模型组差异无显著性(P0.05)。粘连程度方面,低剂量A组较空白模型组、其他处理组的秩次低,差异有显著性(P0.05)。 6.模型大鼠与复发模型大鼠各组比较:①除空白模型组和低剂量B组外,各处理组在切除原始病灶后的异位内膜E2含量均显著下降,差异有显著性(P0.05)。低剂量A组、达那唑A组和高剂量B组在切除原始病灶后的异位内膜PGE2含量下降明显,差异有显著性(P0.05)。②切除原始病灶后所有组别的粘连程度的级别有所下降,其中高剂量A组、高剂量B组手术后的粘连程度比手术前的有明显改善(P0.05),比较差异有显著性;其他组别比较差异无显著性(P0.05)。③切除原始病灶后所有组别的复发囊肿有所缩小,其中除低剂量A、B组和雌激素B组外,其他各组的手术后的囊肿大小比手术前的有明显缩小,比较差异有显著性(P0.05)。 结论 1.实践证明,SD大鼠是可以用作制备内异症复发模型的动物。对复发病灶进行病理检查可见有子宫内膜上皮细胞、腺体和间质生长,证实此为术后复发异位内膜种植病灶。本研究成功了建立大鼠子宫内膜异位症术后复发模型,是子宫内膜异位症动物模型一大突破,是本研究的创新之处。 2.内异症复发模型的异位内膜的形态多样化,存在不成囊肿而是浸润性生长的模型,故认为大体肉眼未见囊肿者并不代表局部无异位内膜的种植,若以形成囊肿与否计算成模率的统计方法欠妥。研究表明,有囊肿形成的大鼠模型中,囊肿大小可以作为观察治疗效果的指标之一,而粘连程度不应该作为内异症大鼠模型治疗观察指标。 3.内异症复发模型的异位内膜局部雌激素合成和调节存在两个独立的途径:①通过SF-1-P450arom-PGE2介导的雌激素合成与调节网络;②C-FOS基因对雌激素早期应答促成反应,从而使局部的E2浓聚,促进异位内膜细胞不断自主生长增殖,继而发生侵袭、种植、血管形成,最终发展成为内异症。研究发现手术只是人为破坏令异位病灶缩小,但没有使局部病灶的PGE2和E2明显下降,术后病灶局部雌激素自主生成的微环境依然存在,这可能是导致内异症术后复发的生物学基础。 4.研究结果证明了罗氏内异方在一定浓度范围内通过抑制SF-1的表达和C-FOS的表达,明显抑制局部雌激素自分泌式的合成和异位内膜对雌激素过早应答,使局部E2含量下降,从而抑制内膜异位病灶的种植和发展,缩小囊肿;同时改善盆腔内环境,缓解盆腔疼痛。可能是预防内异症复发的最佳方案之一。术前术后应用低浓度的罗氏内异方措施可以使手术难度与手术风险降低,对消除或抑制残存病灶、防治术后复发具有确切的疗效和优势。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R271.9

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