耳针对链脲佐菌素糖尿病大鼠心肌细胞保护作用的研究

【摘要】：目的 耳针对糖尿病防治具有较好的临床疗效,但其作用机理及对糖尿病心脏病的心肌细胞干预机制尚未明确。因此本研究通过建立链脲佐菌素糖尿病大鼠,观察糖尿病大鼠经耳穴干预治疗后空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(GHbAlc)、胰岛素(Ins)、心肌细胞结构的变化及心肌凋亡情况,判断针刺耳甲区穴位治疗是否能减低糖尿病大鼠心肌细胞的损害,改善症状及减少并发症发生,为探讨耳甲区穴位针刺治疗糖尿病机理及对糖尿病心脏病的心肌细胞影响,旨在为耳针对糖尿病防治和保护心肌损伤进一步提供理论依据。 方法 1、SPF级SD大鼠50只,正常组10只；40只大鼠采用腹腔注射链脉佐菌素复制糖尿病大鼠模型,均分4组。耳针组：选用皮内针埋入耳甲区治疗,埋针时间为30分钟,每天治疗1次；二甲双胍组：盐酸二甲双胍片(52mg·kg-1·d-1),分2次灌胃；二甲双胍加耳针组：以上两种治疗方法同时使用；治疗时间均为30天；未治疗组：糖尿病大鼠未进行任何治疗。治疗前,5组大鼠均采集空腹血检测FBG、GHbAlc、Ins;30天后复查FBG、GHbAlc、Ins,观察心脏HE染色病理学结构及透射电镜观察各组大鼠的心肌细胞超微结构,并对心肌细胞凋亡情况计数。 2、HE染色观察实验大鼠心脏心肌细胞病理形态学结构；透射电镜观察各组大鼠的心肌细胞超微结构；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法原位检测心肌细胞凋亡并对凋亡的心肌细胞计数。 结果 1、FBG、GHbAlc、Ins检测结果：治疗前,糖尿病各组大鼠FBG、GHbAlc、Ins水平与正常组比较明显升高(P0.05)。治疗30d后,正常组和模型组FBG、GHbAlc、Ins与治疗前均无差异(P0.05)；模型组FBG与治疗各组比较有差异(P0.05)；二甲双胍组、耳针组及二甲双胍加耳针组FBG与治疗前比较显著下降(P0.05)；二甲双胍组和耳针组GHbAlc、Ins与治疗前均无差异(P0.05)；二甲双胍加耳穴组GHbAlc与治疗前比较显著下降(P0.05),但该组的Ins与治疗前均无差异(P0.05) 2、病理形态学改变结果：(1)心肌病理切片HE染色：正常组心肌细胞形态正常,纤维走行整齐致密,无细胞变性坏死、炎症细胞浸润、间质纤维化；模型组心肌纤维走向稍紊乱,可见均质红染坏死灶,伴少量炎症细胞浸润,局部心肌纤维内见糖原沉积；二甲双胍组心肌纤维走行整齐致密,仅见局部心肌细胞可见水肿样变；耳针组心肌纤维分布较疏松,稍有紊乱或呈收缩状改变,可见均质红染坏死灶,伴少量炎症细胞浸润；二甲双胍加耳针组心肌纤维分布稍稀松,走向稍紊乱,偶见少量心肌细胞水肿样变,基本接近正常组。(2)心肌超微结构：正常组心肌肌丝结构、肌节结构清楚,胞核位于心肌细胞中央部位,核内以常染色质为主；模型组部分肌节错位,肌纤维稀疏、断裂、分离、局部溶解,线粒体肿胀,嵴减少、稀疏,糖原颗粒增多,肌浆网扩张,闰盘扩张、断裂,模糊不清,微血管内皮细胞核畸形,异染色质主增多,边聚,微血管管腔狭小；二甲双胍组肌节对位基本整齐,无明显肌原纤维溶解,肌纤维排列较稀疏,线粒体内只见很少数嵴溶解,肌浆网轻度扩张,闰盘不规则,有中断；耳针组肌丝结构较清楚,Z线模糊变细,肌纤维稀疏,线粒体轻度肿胀,少数嵴溶解,内有少许空泡变性,糖原颗粒增多,闰盘完整；二甲双胍加耳针组肌纤维排列整齐,Z线明显,线粒体轻度肿胀,模糊,闰盘、肌膜完整。(3)大鼠心肌细胞凋亡：阳性细胞细胞核呈棕色或棕褐色,细胞核内染色质浓缩形成密集颗粒,细胞核大小不一致。正常组可见少量凋亡细胞,模型组心肌细胞有大量凋亡细胞存在,治疗各组凋亡细胞散在分布；正常组与模型组心肌细胞凋亡指数有显著差异(P0.01)；模型组的心肌细胞凋亡指数与治疗各组比较有统计学意义(P0.05)。 结论 表明耳针治疗：1、能降低血糖(FBG)和糖化血红蛋白(GHbAlc); 2、减轻高血糖对心肌细胞的损害,减少心肌细胞发生凋亡,保护心肌细胞结构,延缓心肌病变。

【关键词】：耳针 糖尿病大鼠 心肌细胞 超微结构 细胞凋亡
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R245
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