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《广州中医药大学》 2012年
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中国恒河猴艾滋病病证复合模型创建及治疗艾滋病中药复方优化研究

李茂清  
【摘要】:目的: 国内中医药防治艾滋病的基础研究相对于西医药防治艾滋病的同类研究起步晚,目前尚属探索阶段。利用适宜的动物艾滋病模型进行艾滋病研究具高度的可控性、可靠性、可重复性,同时可缩短研究进程,减少干扰因素,降低试验风险。在某种程度上来说艾滋病研究中,采用动物艾滋病模型研究比采用人体试验进行研究更易实现。国内在上世纪90年代后期已经开始利用动物模型进行艾滋病的研究,但具有中医证特征的艾滋病动物模型研究方面属于空白,这对中医药治疗艾滋病疗效的科学客观评价带来了明显障碍。恒河猴艾滋病模型为艾滋病研究中动物模型的金标准,并被世界卫生组织WHO所推荐。国外研究多采用印度恒河猴,但由于印度恒河猴目前数量减少、价格昂贵、出口受严格限制,已经不能满足日益增长的科研需求,这给开展艾滋病的深入研究带来了明显阻碍。越来越多的研究采用来源相对充足的中国恒河猴替代印度恒河猴进行艾滋病研究。本研究在国家“十一五”科技重大专项资助下,对中国恒河猴艾滋病模型以及具中医证特征的中国恒河猴艾滋病模型开展深入详细研究,并利用这些动物艾滋病模型进行中医药治疗艾滋病方面的研究。希望通过上述研究后实现以下的目标:(1)通过开展对中国恒河猴实验基础规范的标准化制定及基础背景的研究,进而深入研究中国恒河猴艾滋病模型/病证复合模型,深化中医对艾滋病的认知;(2)在中医理论指导下采用猴艾滋病病证复合模型观察中药干预的效果,探讨中医理论对艾滋病治疗的意义;(3)采用猴艾滋病模型对中药进行疗效优化,为进一步进行新药开发提供实验依据;(4)通过中西药代谢性相互作用研究,为进一步探讨中西医结合治疗艾滋病的合理性提供范例及实验依据。 方法: 1、文献研究:使用ENDNOTE软件收集国内外主流医学杂志文献,详细阅读后剔除重复或者资料不齐全文献,对文献进行整理分类和有效信息集中,最后选择有代表性文献,进行总结归纳,了解现代医学在艾滋病研究方面的最新状况。文献研究主要集中在三个方面,具体为艾滋病西医研究进展方面、艾滋病中医研究进展方面、动物疾病模型在中医药研究中的应用进展方面。在完成文献研究后提出本实验研究的整体设计思路。 2、中国恒河猴实验基础规范的标准化制定及基础背景研究:本部分研究将进行各项实验基础规范化的研究,保证实验研究结果的准确、可靠、可重复性;同时对中国恒河猴基础背景进行研究,深入了解了动物模型的研究背景。研究具体分为中国恒河猴艾滋病动物模型实验研究相关标准操作/作业流程(SOP)制定、健康中国恒河猴指标参考范围的研究两大部分。其中中国恒河猴艾滋病动物模型实验研究相关标准操作/作业流程制定部分为主要针对中国恒河猴动物试验、检测、操作、观察规范化进行标准制定;而健康中国恒河猴指标参考范围的研究部分采用健康中国恒河猴横断面调查研究,制定在本试验研究条件下多项检测指标正常参考范围。 3、中国恒河猴艾滋病动物模型研究:本部分研究主要针对中国恒河猴艾滋病动物模型进行深入细化研究,研究涉及猴艾滋病的疾病各阶段。研究第一步是对急性感染过程中体质量指标、T淋巴细胞亚群指标、病毒载量指标、血常规指标等多项指标的变化情况进行分析比较;研究第二步对长期感染过程中T淋巴细胞亚群指标、病毒载量指标、中医证候学指标以及临床症状变化情况等进行长期序贯性监测;研究第三步是对中国恒河猴艾滋病动物模型生存状况的调查;研究第四步是综合前三步试验结果对猴艾滋病模型进行中医基本病因病机的探索。通过这些研究试图找到疾病变化的规律特征,在此基础上为中医药治疗艾滋病提供理论指导。 4、中国恒河猴艾滋病病证复合模型研究:本部分研究主要针对具中医证特征的中国恒河猴艾滋病动物模型进行深入细化研究。研究的内容为创建具中医脾虚证特征的中国恒河猴艾滋病病证复合模型和具中医肾虚证特征的中国恒河猴艾滋病病证复合模型,通过试验对比分析病证复合模型的指标变化规律特征,同时比较中医疗法中的补肾疗法、补脾疗法、清热疗法在艾滋病治疗中的疗效。并对各种疗法的优点和特点进行汇总分析,对艾滋病治疗方案提出优化后的具体方药。 5、研究成果拓展应用:本部分研究利用前面研究的成果进行了拓展应用。利用总结出的基本病因病机选择药物测试艾滋病晚期状态下中医药干预的效果;通过中西药代谢性相互作用研究,测试实验进程中优化后的中医药组方对植物单体化学物/西药在各种模型及健康志愿者中的增效作用。 结果: 1、中医药防治艾滋病疗效显著,不易产生耐药性,毒副反应较少或较轻。恒河猴艾滋病模型是研究艾滋病的动物模型“金标准”,广泛应用于艾滋病研究的各个方面。中医药研究中广泛使用动物模型进行具中医证特征的动物模型构建。利用中国恒河猴创建具中医证特征的艾滋病动物模型,进行中医药治疗艾滋病疗效的科学客观评价是必要和可行的方案。研究整体设计思路第一步为中国恒河猴实验基础规范的标准化制定及基础背景的研究;第二步为中国恒河猴艾滋病动物模型研究;第三步为中国恒河猴艾滋病病证复合模型研究;第四步为利用不同的动物艾滋病模型进行抗艾滋病中药复方优化的研究。 2、在中国恒河猴实验基础规范的标准化制定及基础背景的研究中,首先制定出1、恒河猴动物试验SOP;2、基础研究试验检测SOP;3、基础研究观察SOP;4、动物模型构建SOP;5、试验药物制作及使用SOP;6、恒河猴疾病防治SOP;7、试验数据处理SOP。对健康中国恒河猴研究后确立了血常规13项、肝肾功能4项、中医证学相关12项、T淋巴细胞亚群7项等共36个监测指标的正常参考范围。 3、对中国恒河猴艾滋病模型基础背景进行了深入的研究。对艾滋病急性感染期病毒载量、T淋巴细胞亚群等指标变化分析表明:中国恒河猴艾滋病模型血浆病毒峰值在10~14天,随后病毒载量整体出现波动下降的趋势。而T淋巴细胞亚群中CD4+%呈现下降趋势,CD4+/CD8+比值感染后在病毒载量高峰时期出现最低值,随后出现上升趋势。CD8+%则在急性感染阶段出现上升趋势。对中国恒河猴艾滋病模型感染18个月长期观察显示:T淋巴细胞亚群CD4+%、CD4+/CD8+比值随着感染时间延长呈现波动下降趋势;病毒载量在感染后2-3个月进入病毒调定点,此后病毒载量一般在病毒调定点上下0.5个对数波动;而中医证学相关指标皮质醇(Cortisol, Cor)在感染后随着感染时间延长呈现波动下降趋势。对因艾滋病死亡的中国恒河猴艾滋病模型数据分析表明:CD4+%、CD4+/CD8+比值、CD4+计数与病情密切相关;T3指标下降程度与病情恶化程度密切相关,Cor水平则在死亡前1-2个月出现上升趋势。对中国恒河猴艾滋病模型生存情况分析表明采用SIVmac239病毒株创建的猴艾滋病模型中位生存时间为2年左右。对艾滋病动物模型中医基本病因病机探索结果表明:本病的病因为“艾邪”。模型在急性感染期病机表现为外邪侵扰,邪正相争;在病毒潜伏期表现为邪毒内伏,暗伤正气;艾滋病前期表现为邪气亢盛,正气亏损;典型艾滋病期表现为正气亏虚。 4、通过不同的复合模型构建方案,试验成功首创了两种共四类具中医证特征的艾滋病病证复合模型。其中两种病证复合模型为中国恒河猴脾虚艾滋病病证复合模型和中国恒河猴肾虚艾滋病病证复合模型。四类为脾虚Ⅰ型病证复合模型(简称脾虚Ⅰ型)、脾虚Ⅱ型病证复合模型(简称脾虚Ⅱ型)、肾虚工型病证复合模型(简称肾虚Ⅰ型)、肾虚Ⅱ型病证复合模型(简称肾虚Ⅱ型)。其中中国恒河猴脾虚艾滋病病证复合模型临床症状表现出摄食减少、体质量增长缓慢、腹泻等,血液学指标三碘甲腺原氨酸(T3)、CD4+%、CD4+/CD8+比值水平均显著下降,而中国恒河猴肾虚艾滋病病证复合模型临床症状表现出畏寒、精神萎靡、消瘦、腹泻等,血液学指标三碘甲腺原氨酸(T3)、皮质醇(Cor)、CD4+%、CD4+/CD8+比值水平均显著下降。对四类病证复合模型深入研究后发现脾虚工型模型在复合模型创建阶段中建模因素对艾滋病病情影响不显著,但建模后造模因素对治疗阶段病情产生显著影响,能加速艾滋病病情的进展。在此类艾滋病模型中补脾法疗效优于清热法疗效;脾虚Ⅱ型模型研究结果显示脾虚Ⅱ型与脾虚Ⅰ型病情进展相类似,但比脾虚Ⅰ型病情更为严重,但在脾虚Ⅱ型试验中补脾法疗效并不优于清热法;肾虚Ⅰ型模型研究结果显示复合模型创建阶段中建模因素对艾滋病病情影响不显著,但建模后造模因素对治疗及停药期影响显著,能加速病情的进展。肾虚Ⅰ型试验中补肾法疗效优于清热法疗效,特别是补肾法在停药后8个月疗效与清热法差异非常显著;肾虚Ⅱ型模型研究结果显示肾虚Ⅱ型比肾虚Ⅰ型病情严重、肾虚Ⅱ型在复合模型创建期间造模因素对艾滋病病情影响显著,肾虚Ⅱ型试验中补肾法疗效优于清热法、肾虚Ⅱ型非治疗情况下病情进展更加迅速。在总结艾滋病动物模型/中国恒河猴艾滋病病证复合模型中医干预的经验基础上,针对猴艾滋病的基本病机,对原补肾处方进行药物优化,优化出新的补肾治疗方药(优化后组方)。 5、在研究成果拓展应用中,在艾滋病中医病因病机探索研究而归纳出的结论指导下,采用大补肾(元)阳药物参附注射液对中国恒河猴艾滋病晚期模型进行干预,成功的延长了模型的生存时间,减轻了临床症状,延缓了病情的进展。另外对优化后组方联合植物单体化学物治疗猴艾滋病动物模型的结果显示:中药和植物单体化学物E联用能明显增强植物单体化学物E的疗效,同时无明显毒副作用,具有良好的新药开发前景。进一步进行的优化后组方对猴艾滋病动物模型/健康志愿者服用蛋白酶抑制剂茚地那韦血药浓度影响的试验提示:优化后组方和茚地那韦联用能明显增加茚地那韦血药浓度,具减缓健康志愿者茚地那韦清除率作用。 结论: 1、文献研究表明了中医药在艾滋病防治方面具有明显疗效,对中医药防治艾滋病方面进行深入研究可能会取得较大的进展或突破。明确了在中医药防治艾滋病研究中采用适宜的恒河猴艾滋病动物模型进行研究比采用人体试验更容易实现。而且动物试验研究具高度可控、可靠、可重复性,可缩短研究进程,减少干扰因素,降低试验风险。明确了中国恒河猴创建具中医证特征的艾滋病病证复合模型的理论可行性。 2、中国恒河猴实验基础规范的标准化制定为本项目各试验的规范化研究提供了保证。制定出健康中国恒河猴多项指标正常参考范围,为实验结果的准确判断提供了相关试验依据。 3、中国恒河猴艾滋病动物模型能较好反应艾滋病病情变化特征,可适用于艾滋病多种类型的研究中。中国恒河猴艾滋病模型艾滋病的病因为艾邪,疾病过程病机变化整体表现为艾邪侵扰,邪正相争,随后邪毒内伏,暗伤正气,之后邪气亢盛,正气亏损,最后元气亏虚,五脏六腑气血阴阳亏竭。 4、具中医证特征的艾滋病病证复合模型因模型不一样,在艾滋病病情进展方面和中药干预效果方面也不完全一致。试验整体显示出具中医证特征的艾滋病病证复合模型病情比单纯的艾滋病模型严重。治疗效果比较中表明采用中药治疗远远优于不治疗效果,其中补肾疗法优于清热疗法,而补脾疗法与清热疗法在不同艾滋病动物模型中疗效不同。 5、研究成果的拓展应用证实了中医药在艾滋病治疗中的疗效,也再次证实了中西医联合治疗艾滋病的益处。对从理论上说明中药联合植物单体化学物/西药治疗艾滋病的合理性提供了范例和研究思路。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R-332;R285.5

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5 指导专家 解放军302医院感染一科主任医师 周志平 记者 黄显斌;切断艾滋病感染三途径[N];医药导报;2006年
6 付洪军;艾滋病感染者逾九成为青壮年[N];珠海特区报;2007年
7 记者 曾繁华;“染艾”老人逐年增多[N];柳州日报;2010年
8 记者 赵玉峰;借鉴中医先进技术 不断提高救助水平[N];临汾日报;2011年
9 记者 李杰斌实习生 宋立;艾滋病病人就医分娩有补助[N];桂林日报;2008年
10 卫新;经性途径感染艾滋病呈上升趋势[N];保健时报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李茂清;中国恒河猴艾滋病病证复合模型创建及治疗艾滋病中药复方优化研究[D];广州中医药大学;2012年
2 曾文;恒河猴川西亚种生物学特性背景数据建立及在新药评估中的应用研究[D];四川农业大学;2010年
3 房青;人源性生物人工肝的制备及临床前研究[D];北京协和医学院;2010年
4 高晓晖;武汉市中学生教育与防止艾滋病扩散的政策和措施研究[D];华中科技大学;2012年
5 徐晶;以社区为基础有效发现和管理艾滋病感染者/病人的模式探讨[D];华中科技大学;2010年
6 陈超然;青春期艾滋病孤儿污名应对与创伤后成长研究[D];华东师范大学;2012年
7 刘德;艾滋病中医辨证特点与临床研究[D];湖北中医药大学;2010年
8 潘菊华;SIVmac239致恒河猴免疫—神经—内分泌缺陷及免疫Ⅰ干预研究[D];中国中医科学院;2011年
9 陈颂;SIVmac239感染中国恒河猴的研究[D];北京协和医学院;2008年
10 王俊杰;动力学模型在我国艾滋病五类高危人群传播规律分析中的应用[D];中国疾病预防控制中心;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曲彤薇;浙江省两市农村居民艾滋病认知情况的调查[D];浙江大学;2010年
2 茅乃玲;依托社区和家庭网络开展社区吸毒人员艾滋病综合干预研究[D];安徽医科大学;2010年
3 康丽娜;山西省不同人群艾滋病歧视现状及影响因素的研究[D];山西医科大学;2011年
4 房蛟飞;五家戒毒场所艾滋病防治现状及对策研究[D];昆明医学院;2011年
5 张留;安徽省某地区农村家庭主妇参与式艾滋病健康教育效果评价研究[D];安徽医科大学;2011年
6 姜思宇;从个人和家庭层面分析艾滋病对我国社会经济的影响[D];北京信息控制研究所;2010年
7 李雪华;武汉市男男性行为人群性病、艾滋病流行病学调查[D];华中科技大学;2009年
8 史晟倢;四川省宁南县艾滋病流行病学调查[D];复旦大学;2010年
9 刘少楠;艾滋病家庭内传播及其影响因素的研究[D];济南大学;2011年
10 孟凡亮;女性性工作者艾滋病预防用药使用意愿及需求调查[D];新疆医科大学;2010年
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