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《广州中医药大学》 2012年
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清养透解合剂干预SLE免疫失衡的临床及实验研究

段红妍  
【摘要】:一、研究目的 本课题以“伏气温病”理论为指导,运用清养透解合剂,从临床研究和动物实验两方面,观察Th1/Th2细胞群偏移以及T淋巴细胞亚群失衡与SLE发病机制的关系。以此来探讨SLE发病机理,分析清养透解法的作用机理。 二、研究方法 (一)临床试验:采用前瞻性单盲随机对照的方法,纳入初次确诊为SLE患者病例共42例,其中治疗组22例,对照组20例,另选取12名正常人为正常对照组。治疗组在常规西医治疗基础上给予清养透解合剂(由青蒿10g、鳖甲15g、水牛角20g、生地15g、丹皮10g等药物组成);对照组给予常规西药治疗及中药安慰剂。常规西医治疗方案为:口服强的松片为主,病情复发或合并狼疮肾炎、狼疮脑炎时在激素难以控制病情的情况下加用环磷酰胺冲击疗法。中药安慰剂主要由淮山药、焦糖组成。分别于入组时、治疗第6个月采取静脉血,检测T淋巴细胞亚群CD3CD4CD8的比例、调节性T细胞CD4+CD25+的数量以及血常规中RBC、WBC、PLT、HGB;补体C3、C4: BUN、Cr; ESR。 (二)动物实验:将24只8-10周龄雌性MRL/lpr小鼠按质量随机分为中药组、西药组、中西医结合组、模型对照组4个组,每组6只小鼠;另取8-10周龄雌性BALB/C小鼠6只作为正常对照组。中药组(A组)予以清养透解合剂(9.5g/kg)按0.4ml/只灌胃,每日1次;西药组(B组)予以强的松(10mg/kg)先生理盐水稀释后按0.4ml/只灌胃,每日1次;中西医结合组(C组)予以强的松(10mg/kg)加清养透解合剂(9.5g/kg)先生理盐水稀释后按0.4ml/只灌胃,每日1次;模型对照组(D组)生理盐水按0.4ml/只灌胃,每日1次;正常对照组(E组)生理盐水按0.4ml/只灌胃,每日1次。6周后眼眶取血检测T淋巴细胞亚群CD3CD4CD8的比例、调节性T细胞CD4+CD25+的数量;取脾脏组织并采用RT-PCR法检测小鼠脾脏组织IFN-r及IL-4基因表达 三、结果 (一)临床试验 1、一般资料:本研究共纳入观察病例共42例,其中38例最终完成试验。治疗组20例,西药对照组18例,健康对照组12例。有4例因脱落未完成最终试验。 2、临床指标: (1)血液分析结果:RBC治疗前后治疗组与对照组比较均无显著性差异(P0.05);而WBC、PLT、HGB均治疗前治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05);治疗组、对照组治疗前后比较有显著性差异(P0.05);治疗后治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05)。 (2)免疫指标:补体C3、C4结果均治疗前治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05);治疗组治疗前后比较有显著性差异(P0.05),对照组治疗前后比较无显著性差异(P0.05);治疗后治疗组与对照组比较有显著性差异(P0.01)。 (3)肾功能指标:尿素、肌酐结果:治疗前治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05);治疗组、对照组治疗前后比较有显著性差异(P0.05);治疗后治疗组与对照组比较有显著性差异(P0.01)。 (4)血沉结果:治疗前治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05);治疗组、对照组治疗前后比较均有显著性差异(P0.05);治疗后治疗组与对照组比较有显著性差异(P0.01)。 (5)T细胞亚群结果:治疗前治疗组、对照组与正常对照组比较有显著性差异(P0.01);治疗后治疗组与正常对照组比较无明显差异(P0.05)、对照组与正常对照组有显著性差异(P0.01);治疗后治疗组与对照组比较无显著性差异(P0.05),治疗组与对照组治疗前后比较均有显著性差异(P0.05)。从治疗前后差异的比较得出,治疗组优于对照组,且差异具有显著性(P0.05)。 (二)动物实验 1、动物的症状特点:与正常对照组小鼠比较其余各治疗组小鼠皮毛均有脱落和稀疏的表现,并且以模型对照组表现较为明显。且狼疮鼠表现为活动能力下降、易激惹。 2.IFN-γmRNA.IL-4mRNA表达:RT-PCR检测结果:(1)Th1类细胞因子IFN-Y基因表达水平:与正常组比较,模型组IFN-γ水平明显下降(P0.01),其他各治疗组IFN-γ水平亦有下降(P0.05);而模型组、中药组、西药组、中西医组两两比较差异不明显(P0.05)。(2)Th2类细胞因子IL-4基因表达水平:与正常组比较,模型组IL-4水平明显上升,有非常显著性差异(P0.01),中药组、西药组、中西医结合组与模型组比较有显著差异(P0.05),中药组、西药组、中西医结合组、正常组两两比较比较无显著性差异(P0.05)。(3)Thl/Th2细胞因子比值:与正常组比较,中药组、模型组比值有变化,有非常显著性差异(P0.01),中西医结合组与正常组比较无显著性差异(P0.05),西药组与正常组比较有显著性差异(P0.05);各治疗组与模型组比较有显著性差异(P0.05)。 3、小鼠外周血T淋巴细胞亚群水平结果:(1)CD3+T淋巴细胞水平:与正常组比较,模型组小鼠外周血CD3+水平下降,有显著性差异(P0.01),各治疗组与模型组比较CD3+水平上升,有显著性差异(P0.05),中药组、西药组、中西药结合组、正常对照组两两比较差异不显著(P0.05)。(2)CD3+CD4+T淋巴细胞水平与正常组比较,模型组CD3+CD4+水平下降,有非常显著性差异(P0.01),中药组、西药组、中西医结合组无显著性差异(P0.05);(3)CD3+CD8+T淋巴细胞水平与正常组比较,模型组CD3+CD8+水平上升,有非常显著性差异(P0.01),中药组、西药组、中西医结合组无显著性差异(P0.05);(4)CD4+CD25+调节性T细胞水平:小鼠外周血CD4+CD25+,与正常对照组比较,模型组以及各治疗组有显著性差异(P0.01):与模型对照组比较中西医结合组有显著性差异(P0.01);与西药组比较中西医结合组有显著性差异;西药、中药组两两比较无显著性差异(P0.05)。 四、结论 1、SLE患者体内存在T淋巴细胞亚群紊乱,表现为CD3+升高,CD3+CD4+下降,CD3+CD8+升高,CD4tD25+升高,从而证明Th1/Th2细胞平衡紊乱,Th1/Th2细胞向Th2漂移。配合清养透解合剂为主的中西医结合治疗明显优于单纯使用西药,而且中西医结合治疗能够改善Th1/Th2细胞群失衡,维持T细胞功能正常,抑制B细胞的异常增殖。 2、MRL/lpr小鼠存在Th1/Th2细胞平衡紊乱,主要表现为Th2升高,Th1/Th2细胞向Th2漂移。T淋巴细胞亚群和调节性T细胞数量减少。从运用清养透解合剂配合西药的中西医结合组效果明显优于其余各治疗组。 3、实验数据与临床表现存在差异,本次试验临床患者血常规中RBC治疗前后比较无显著性差异,而在导师平时治疗过程中确实存在一部分患者血常规中RBC异常治疗一段时间后趋于正常,说明临床上确实存在经治疗后有改善的趋势,但只是由于样本量和研究时间的限制导致试验数据统计无显著性差异。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R259

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