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《广州中医药大学》 2012年
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温肾补阳法对变应性鼻炎鼻粘膜重塑及转录因子T-bet/GATA-3调控的临床研究

杨占军  
【摘要】:研究目的、意义 本研究的目的在于通过临床试验来验证T-bet/GATA-3的平衡失调和阴阳平衡失调是否有内在联系,即研究肾阳虚因素对调节T-bet/GATA-3细胞因子产生的影响,以及温补肾阳法对调节T-bet/GATA-3的平衡失调的调控作用,同时通过动物实验观察温补肾阳法对变应性鼻炎粘膜重塑及T-bet/GATA-3的平衡失调的影响,为中医的病因学说和治疗学说提供科学依据。 研究方法、结果 1临床研究 1.1研究方法: 选择符合诊断标准(中医肾阳虚型;西医属常年性变应性鼻炎)的患者91例,治疗组41例,对照组50例,另选择正常健康的受试者20例作为空白对照组。治疗组采用金匮肾气丸合苍耳子散为主方加减治疗;对照组采用氯雷他定治疗,疗程4周。本实验采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测变应性鼻炎患者外周血淋巴细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(INF-Y)浓度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)测定淋巴细胞中T-be、 GATA-3mRNA表达水平。 1.2结果:温肾补阳组患者治疗后同治疗前相比,INF-γ. T-bet水平明显提高(P.05), IL-4、 GATA-3水平明显下降(P0.05),同正常对照组相比无明显差别(P0.05)。而氯雷他定治疗前后无明显改善。 2实验研究 2.1材料和方法 用8周龄雄性大鼠,腺嘌呤制作肾阳虚模型,用卵清蛋白制作变应性鼻炎模型,实验A、B、C组(长期抗原攻击组)继续2次/周给予含有卵清蛋白400ug的生理盐水20ul滴鼻液点鼻,抗原攻击共达12周,对照组则对应予以生理盐水点鼻。温补肾阳组在完成肾阳虚造模后(即第22天起),按13.5g/kg·d灌服金匮肾气丸汤液,其它各组以4ml/只灌服生理盐水,直至实验结束。实验结束后ELSIA法检测血浆中IL-4和IFN-γ的含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血淋巴细胞中T-bet和GATA-3的表达组织标本石蜡包埋,采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)、阿辛蓝-过碘酸-希夫(alcian blue-periodic acid-Schiff, AB-PAS)和Masson三色胶原染色(Masson's Trichrome, MT)法染色,计数鼻中隔黏膜中嗜酸粒细胞、上皮杯状细胞数量,半定量测量鼻中隔黏膜和鼻甲基底膜区及上皮下胶原含量。 2.2结果 2.2.1各组Th1/Th2细胞因子及转录因子比较变应性鼻炎模型组、肾阳虚变应性鼻炎模型组血清Th1细胞因IFN-γ、 T-bet水平明显低于温补肾阳组和正常对照组(P0.05);变应性鼻炎模型组、肾阳虚变应性鼻炎模型组血清Th2细胞因子IL-4、GATA-3水平明显高于温补肾阳组和正常对照组(P0.05);温补肾阳组与正常组相比,血清Thl细胞因子和血清Th2细胞因子及转录因子差异无显著性(P0.05) 2.2.2鼻粘膜重塑的影响病理结果显示温肾补阳组鼻粘膜嗜酸粒细胞数、杯状细胞化生数、MT染色蓝色面积呈逐渐减少趋势,但仍明显高于正常组。 讨论 1、有关肾气汤治疗变应性鼻炎的探讨 目前有许多学者认为变应性鼻炎是一个综合及全身因素的局部表现,涉及遗传、环境等,特别是“卫生假说”之感染与环境体质等尤为重要。依据中医辨证规范,本病患者临床见喷嚏、流涕、鼻塞、鼻痒是为肺气壅滞,气机不利,肺失宣降,肺卫失固之肺卫气虚的上逆之象。但追溯本病的患者则更多有病程绵长,反复发作,气弱怕冷,遇寒加重和诱发的特点。肺主呼吸,肾主纳气,肾阳肾气是人身阳气之根本,肺虚日久.久病及肾;或肾阳肾气不足,不能温煦承纳肺之呼吸之气,都会致使肺气之升降卫外功能失司,肾虚不纳,肺虚不固,气机不利,气冲而嚏。故其虽病在上,则实为病已及下,治疗应温肾纳气以降上逆之气。据此,本研究选用温补肾阳之经典成药金匮肾气丸为主,以践温肾纳气之功。 2、Thl/Th2细胞因子失衡与转录因子T-bet/GATA-3失衡的研究 Thl/Th2分化失衡是机体免疫应答调节的关键环节,与多种疾病的发生、发展和转归有关。转录因子T-bet和GATA-3分别作为Thl和Th2细胞特异性转录因子,受到广泛关注。对Thl/Th2失衡与变应性鼻炎的治疗的研究主要从两方面进行:一是研究已知治疗方法在治疗变应性鼻炎中是如何调节Thl/Th2失衡的;二是以纠正Thl/Th2失衡为目的研究治疗变应性鼻炎的新药物。这两方面研究的共同核心部分,就是使Th2反应减轻,或使Thl反应增强,或者是使Th2反应减轻和使Thl反应增强结合起来,从而纠正Th1/Th2失衡,达到治疗变应性鼻炎的目的。本研究发现温肾补阳法可改善Thl/Th2以及T-bet/GATA-3mRNA失衡,说明了其治疗变应性鼻炎的机制。 3、过敏性鼻炎鼻粘膜重塑的研究 重塑是机体对损伤组织进行修复动态过程的结果,是由于反复损伤造成正常组织结构不能恢复,或不正常的修复过程而导致永久性结构异常,其改变具有明显的组织特异性和疾病特异性,又以呼吸道粘膜表现最为明显,几乎存在于所有的炎症性疾病中,其不同的控制机制很大程度上取决于不同的疾病。变应性鼻炎是发生在鼻粘膜的变态反应性疾病,属于气道炎症性疾病的一种,由于其分布广泛及逐年增高的发病率,逐渐引起人们的重视。本研究通过建立大鼠AR动物模型,动态观察AR鼻粘膜重塑及温肾补阳法对重塑过程的影响。从结构上看,A、B、C组大鼠在鼻内局部激发后,均出现明显的鼻粘膜表面纤毛不完整,上皮细胞及细胞间质水肿明显,部分出现上皮细胞坏死剥脱。大量柱状上皮转化为具有分泌功能的杯状细胞。粘膜下层血管扩张明显,管腔周围以嗜酸性细胞为主的炎性细胞浸润,电镜下见基膜增厚,胶原沉积及少量纤维增生。予以温肾补阳法治疗后,C组其粘膜重塑进程减缓,于第8周前后表现一定程度逆转,粘膜上皮杯状细胞化生减轻,纤毛可以一定程度再生,上皮部分修复。在变应原刺激持续存在的情况下,A、B组重塑病变进一步加重,最后呈现不可逆性改变,而C组虽逐渐改善,但治疗12周后仍有粘膜重塑表现。综上所述,我们认为AR鼻粘膜存在重塑现象,且随着变应原的持续接触,重塑将进一步加重,并发生不可逆性病理改变,温肾补阳法可有效控制AR临床症状,减缓或一定程度逆转鼻粘膜重塑,而对于已经发生不可逆性改变的粘膜结构并无明显逆转或修复作用。 结论 1、温肾补阳法抗AR的作用机制可能是通过上调转录因子T-bet的表达水平,促进Th1类细胞因子IFN-r的分泌,并下调转录因子GATA-3表达水平,抑制Th2类细胞因子IL-4的表达,从而纠正T-bet和GATA-3表达失衡,进而纠正并恢复Th1与Th2细胞免疫平衡。 2、通过观察长期鼻粘膜抗原暴露的豚鼠慢性变应性鼻炎动物模型,发现上皮细胞损伤,鼻粘膜上皮杯状细胞化生和细胞外基质沉积构成了变应性鼻炎中鼻粘膜组织重塑的特点。虽然变应性鼻炎中鼻粘膜组织重塑的确切发生机制及临床意义尚不清楚,但可能与鼻粘膜高反应性、鼻阻塞、分泌物增多等密切相关,相信随着对其了解的深入,会对进一步认识变应性鼻炎及其治疗产生重要影响,抑制鼻粘膜重塑发生将成为变应性鼻炎治疗新的着眼点。 3、中药方剂多是复方组成,含有多种有效成分,因此中药治疗本病的机理是很复杂的,是通过多个环节起作用,温肾补阳法对鼻粘膜重塑及转录因子T-bet/GATA.3失衡的调控都是是其中的重要环节。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R276.1

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【参考文献】
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