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《广州中医药大学》 2016年
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补肾中药更康颗粒的药效学及急性毒理实验研究

顿晶晶  
【摘要】:绝经综合征是女性性激素的转变所致一系列症候群,可能导致身体、情感和社交障碍,每一位女性都要经历这一时期,只是症状轻重不一,而且中国人口基数大,发病率高,绝经综合征引起了重视。现代医学治疗以激素治疗为主,临床见效快,但其使用时机、持续治疗时间、剂型选择、副作用等备受争议。中医药疗效好、治疗方式丰富,副作用小的特点已受到人们的关注,近来随着中医药事业的崛起,中药复方的开发研究成了热点。国内外许多学者都从临床随机对照试验、动物实验、基因研究等多方面对中药复方进行了作用和机制的研究,而实验研究主要通过中药复方对调节生殖内分泌、抗氧化衰老、增强镇静催眠作用、增强免疫功能、增强学习和记忆功能等方面来进行,采取的动物模型主要有自然衰老模型、去势模型、化学药物诱导模型、细胞模型等。更康颗粒是王小云主任经过临床验证30余年的验方,功效:补肾填精,燮调阴阳。主要适合绝经综合征肾虚型人群。绝经综合征中医病机以肾虚为本,更康颗粒用药从治疗肾虚着手,兼顾他脏。目的:1.围绕补肾中药更康颗粒的临床疗效进一步开展其药效学研究,包括对更年期去势大鼠血清相关性激素、下丘脑单胺类神经递质、β-内啡肽、抗氧化功能相关物质及子宫的影响。2.观察研究SD大鼠24h内3次灌胃给予更康颗粒,在一定时间内所产生的毒性反应,了解其急性毒性作用剂量。方法:1.药效学研究:选取SD雌性大鼠80只,按随机数字表分为8组:空白对照组、假手术组、模型组、戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组、更康颗粒低剂量组、更康颗粒中剂量组、更康颗粒高剂量组,每组各10只,除空白组和假手术组外,其余6组大鼠手术去势,各组经过灌胃给药4周(空白对照组、假手术组与模型组给予蒸馏水),采用ELISA法测定大鼠血清性激素、下丘脑神经递质(5-HT、5-HIAA、DA、NE)含量、β-EP、抗氧化相关物质(SOD、MDA、GSH-Px),取出子宫,计算脏器指数及检测子宫内膜厚度。使用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。2.急性毒理实验:最大给药量方法:选取40只雌性大鼠,按体重分层后,试验随机分为2组[受试物组(148.5g生药/kg)和溶媒对照组(纯净水)],每组20只,各组均按30mL/kg体重1天内连续灌胃给药3次,每次间隔4h;每次灌胃给药后连续4h观察大鼠出现的毒性症状及症状起始的时间等情况。在灌药前、灌药第1天、灌药第7天、灌药第14天测量体重。药后连续观察14日,每天上下午各1次,观察大鼠外观、行为、精神、对刺激的反应、分泌物、排泄物等。所有大鼠均进行大体解剖,肉眼观察其器官体积、颜色、质地的改变;若任何器官出现体积、颜色、质地等改变时,均进行组织病理学检查。结果:1.更康颗粒的药效学研究(1)更康颗粒对去势模型大鼠性激素的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠血清E2含量水平降低(P0.01),LH、GnRH、T含量升高(P0.01),FSH含量升高(P0.05),空白组与假手术组比较,FSH、LH、E2、GnRH、T含量差异无统计学意义(P0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P0.05、P0.01),血清E2含量升高(P0.01);中剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P0.05、P0.01),E2含量升高(P0.05);低剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T、E2与模型组相比差异无统计学意义(P0.05)。③更康颗粒中、高剂量组血清FSH、LH、GnRH、T水平与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05),更康颗粒中、高剂量组血清E2含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05),调节作用相近。④更康颗粒低剂量组T、E2含量与空白对照组、假手术组比较差异有统计学意义(P0.05),更康颗粒低剂量组FSH、LH、GnRH以及中、高剂量组的FSH、LH、GnRH、T、E2与空白组、假手术组差异无统计学意义(P0.05)。⑤在调节性激素水平上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(2)更康颗粒对去势模型大鼠下丘脑神经递质的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量升高(P0.01),空白对照组与假手术组相比,5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差异无统计学意义(P0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量降低(P0.01);中剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE水平降低(P0.05,P0.01);低剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差异无统计学意义(P0.05)。③更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、DA含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异有统计学意义(P0.05),戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组作用优于低剂量组;更康颗粒低剂量组5-HIAA、NE含量以及中、高剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05),调节作用相近。④更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑NE含量与空白组、假手术组差异有统计学意义(P0.05),更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA以及中、高剂量组5-HT、5-HIAA、DA、NE含量与空白组、假手术组差异无统计学意义(P0.05),使之趋于正常水平。⑤在调节下丘脑单胺类神经递质上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(3)更康颗粒对去势模型大鼠下丘脑β-EP的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠下丘脑β-EP含量降低(P0.01),空白对照组与假手术组相比,β-EP含量差异无统计学意义(P0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠下丘脑β-EP含量差异有统计学意义(P0.05);中剂量组大鼠下丘脑β-EP含量升高(P0.05);低剂量组大鼠下丘脑β-EP含量差异无统计学意义(P0.05),③更康颗粒中、高剂量组大鼠下丘脑β-EP含量与与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05),调节作用接近。④更康颗粒低剂量组与空白组、假手术组差异有统计学意义(P0.05),更康颗粒中、高剂量组丘脑β-EP含量与空白对照组、假手术组差异无统计学意义(P0.05)。⑤在调节β-EP水平上,更康颗粒高剂量组均值高于更康颗粒低、中剂量组。(4)更康颗粒对去势模型大鼠抗氧化相关物质的作用:①与空白对照组、假手术组相比,与空白对照组相比,模型组大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P0.01),与假手术组相比,模型组大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P0.05、P0.01);与空白对照组、假手术组相比,MDA含量升高(P0.01),空白对照组与假手术组相比,血清SOD、MDA、GSH-Px含量差异无统计学意义(P0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P0.01),MDA含量降低(P0.01);中剂量组大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P0.01),MDA含量降低(P0.05);低剂量组大鼠血清GSH-Px含量升高(P0.05),SOD、MDA指标含量差异无统计学意义(P0.05)。③与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较,更康颗粒中、高剂量组SOD、MDA含量与与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较差异无统计学意义(P0.05),更康颗粒的低、中、高剂量组大鼠血清GSH-Px与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05)。④更康颗粒中、高剂量组大鼠血清SOD、MDA含量与空白对照组、假手术组比较差异无统计学意义(P0.05),更康颗粒低、中、高剂量组大鼠血清GSH-PX含量与空白对照组、假手术组比较差异无统计学意义(P0.05)。⑤在调节抗氧化相关物质上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(5)更康颗粒对去势大鼠子宫的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠子宫系数降低(P0.01),子宫内膜厚度减小(P0.01),空白对照组与假手术组相比,差异无统计学意义(P0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠子宫系数升高(P0.05),子宫内膜厚度增加(P0.05);更康颗粒低、中剂量组大鼠子宫系数与子宫内膜厚度差异无统计学意义(P0.05)。③与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较,更康颗粒低、中、高剂量组大鼠子宫系数和子宫内膜厚度与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P0.05),说明其作用相近。④与空白组、假手术组相比,更康颗粒低、中、高剂量组子宫系数、子宫内膜厚度与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.01、P0.05);更康颗粒中、低剂量组大鼠子宫内膜厚度与假手术组差异有统计学意义(P0.01、P0.05),高剂量组子宫内膜厚度与假手术组差异无统计学意义(P0.05)。⑤在调节子宫系数、子宫内膜厚度方面,更康颗粒高剂量组均值高于更康颗粒低、中剂量组。2.更康颗粒的急性毒理实验研究在此期间,大鼠精神状态良好,外观未见异常表现,行为活动正常,未见异常分泌物及排泄物,至试验结束时无大鼠死亡。受试物组大鼠体重在灌药前、灌药第1天、灌药第7天、灌药第14天与溶媒对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。受试物组与溶媒对照组大鼠在观察期结束时按计划处死,大体解剖肉眼观察其体表完整、被毛柔顺、无外伤及破溃等;皮下无出血点及色素沉着等;腹腔、胸腔无积水,脏器位置正常;各器官的体积、颜色及质地等均未发现病变及异常。结论:1.更康颗粒通过改善去势模型大鼠的性激素水平,提高子宫系数,改善子宫内膜厚度来调节生殖内分泌;更康颗粒通过调节去势大鼠下丘脑单胺类神经递质(5-HT、5-HIAA、DA、NE)、β-EP含量,改善围绝经期植物神经功能紊乱;更康颗粒提高抗氧化物质(SOD、GSH-Px)含量,降低有害产物(MDA)含量,发挥抗氧化衰老作用。2.更康颗粒(148.5g生药/kg,为临床人拟用剂量的179倍)对SD大鼠24h内3次灌胃给药未见毒理反应。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285

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