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《广州中医药大学》 2001年
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骨炎定对体外培养软骨细胞的影响

杨运东  
【摘要】: 骨性关节炎是中老年人的常见疾患,主要病理特征是关节软骨的退 变。关节软骨退变的原因尽管是多方面的,但软骨细胞的结构破坏和功 能丧失在其中起着至关重要的作用。采取有效方法保护软骨细胞的结构、 调节软骨细胞的功能是防止软骨退变的关键措施,是治疗骨性关节炎的 正确途径。陈基长教授研制的中药骨炎定(GUYANDING,GYD)能减 轻骨性关节炎的临床症状,改善关节功能。为了深入探讨其作用机理, 本实验采用软骨细胞培养技术观察其对软骨细胞代谢的影响。 实验一:关节软骨细胞的分离和培养 采用胶原酶Ⅱ分段酶消化法从三月龄大耳白兔的关节软骨中分离出 软骨细胞并进行原代和传代培养。每日在倒置显微镜下观察细胞形态及 其生长情况,并用甲苯胺蓝异染色法进行细胞表型鉴定。结果表明,软 骨细胞形成单层的时间原代培养1周左右,传代培养约4-5天,细胞以 圆形或上皮样细胞形态为主。甲苯胺蓝染色证实,细胞可合成蛋白多糖, 异染反应主要集中在细胞集落样生长区,异染程度以原代培养最为显 著。 实验二:骨炎定对培养兔软骨细胞增殖和蛋白质合成的影响 把传一代的软骨细胞接种于96孔培养板和24孔培养板中,培养24 小时后细胞贴壁进行分组试验。 1 MTT法测细胞增殖把96孔培养板中的32孔随机分为8组,每组4孔, 每孔培养体积0.1ml。A组(对照组)加用5%血清培养液;B-G组:分 别加用含有5%血清与1.25%、2.5%、5%、10%、20%、40%DMEM培 养液;AO组为空白调零组,未接种细胞,只加有含有5%血清的DMEM 广州中医药大学九八级骨科博士:杨运东 导师;陈基长 培养液。在培养48小时后用MIT ie检测细胞活性和增殖。结果GYD 组 5O、10o、20%骨炎定可促进软骨细胞增殖,与对照组相比,差别有 非常显著意义。 2考马斯亮蓝祛检测细胞总蛋白 24孔培养板随机分为六组,每组4孔,分别为:A组:空白对照组。 只加含有5%血清培养液;BS组分别加含有20%、10%、5%骨炎定、5% 防风、5%当归注射液的培养液,培养三天后用考马斯亮蓝法检测细胞总 蛋白。结果表明:5%、10%、20%可促进软骨细胞总蛋白合成,与对照 组相比差别有非常显著性意义。炉仍刀l) 实验三:骨炎定对培养软骨细胞NOS和SOD的影响 把原代培养的软骨细胞接种于24孔培养板中,细胞贴壁生长后随机 分为6组并更换相应的培养液。A组(空白对照组人更换DMEM培养 液;B组(实验对照组)更换含有 100U/rnllN’--的培养液滑卜骨*组: 分别更换含有100、5o、2。50、1.25O骨炎定培养液(含有100UhaltwF)。 焙养刀小时后,收集各孔.上清液,用比色法检测NOS、SOD %性。结 果表明,TN’-可使软骨细胞中的iNOS活性增加,5%骨炎定可显著提高 软骨细胞SOD %性,抑制i:NOS活性。 实验四。骨炎定对培养软骨细胞超微结构的影响 传代培养的软骨细胞接种于8个培养瓶中,每瓶中预先置有盖玻片 一块。培养24小时细胞贴壁后培养瓶随机分为两组,对照组:更换含有 生理盐水的培养液。骨炎定组:更换含有5%骨炎定培养液。培养5天后, 取出小盛片,2,5%戊二醛固定后行扫描电镜观察。收集培养瓶中的细胞, 2.5%戊H醛固定后行透射电镜观察。结果:5%骨炎定组软骨细胞表面的 3 骨炎定对体外培养软骨细胞的影响 纤细突起和皱稻较对照组多,细胞表面的囊泡数少,透射电镜观察软骨 细胞胞浆丰富,线粒体和粗面内质网发达。超微结构的变化说明中药骨 炎定对软骨细胞有保护作用。 结论:本实验充分说明中药骨炎定可促进软骨细胞的增殖和蛋白质合成, 保护软骨细胞兔受肿瘤坏死因子等细胞因子的损害,可提高自由基清除 水平,调节软骨细胞的合成代谢,从而有效地保护软骨细胞,达到防止 软骨退变的日的。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R274.9

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【引证文献】
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